注射用肝水解肽及其制备方法技术

本发明专利技术涉及肝水解肽注射剂及其制备方法。本发明专利技术提供注射用肝水解肽冻干粉针剂，其含有有效成分肝水解肽外，还含有赋形剂，赋形剂在冻干溶液中的浓度为８～１２％。本发明专利技术通过研究肝水解肽原液的制备以及冻干工艺的确定，获得了质量稳定的肝水解肽冻干粉针剂。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及肝水解肽注射剂及其制备方法。
技术介绍
肝水解肽是猪、牛的肝脏经水解的小分子多肽，内含18种游离氨基酸和微量元素，具有刺激肝细胞再生，恢复肝细胞功能，促进线粒体粗面内质网恢复的作用。对慢性乙型肝炎具有良好的治疗效果，降低ALT，消退TBIL，增加机体免疫功能，对病变的肝细胞损伤有良好的修复和促进再生的作用，并且无明显的不良反应。现有的药品为肝水解肽注射液又名肝乐宁注射液，是猪、牛肝脏经水解后，提取的具有生物活性的小分子多肽，氨基酸类和核酸类物质制成的无菌水溶液。内含27种游离氨基酸和微量元素，属肝源性肝细胞生长因子，具有刺激肝细胞DNA的合成，促进肝细胞的再生，恢复肝细胞的功能，增强肝脏枯否氏细胞的吞噬功能，降低脂源性内毒素对肝细胞进行损害，防止肝衰竭，抑制肿瘤坏死因子活性的诱生，阻断肝炎发生肝坏死，通过阻断自由基的CPO而对肝细胞起保护作用。临床上用于各种急慢性肝炎、肝硬化等，收到了满意的疗效，深受医患者的欢迎，显示出广阔的应用前景。肝水解肽注射液(曾名肝乐宁注射液)收载于国家药品监督管理局《国家药品标准(化学药品地方标准升国家标准第九册)》中，本申请人为方便临床用药，增加药物稳定性，易于贮存、保管和运输，丰富临床用药品种，研制了注射用肝水解肽。
技术实现思路
本专利技术提供注射用肝水解肽冻干粉针剂，其含有有效成分肝水解肽外，还含有赋形剂，赋形剂在冻干溶液中的浓度为8～12％。肝水解肽以多肽计每瓶注射用肝水解肽含量为20或40mg。所说的赋形剂优选为甘露醇。其制备工艺包括如下步骤按现有技术中的方法获得肝水解原液，用福林酚法测定其多肽含量。(1)配制根据对肝水解肽原液测定的多肽含量配制成一定浓度的溶液，使制备的每瓶注射用肝水解肽的含量达到规定的量，加入赋形剂，使溶液中赋形剂的含量为8～12％，调pH值至5.5～7.5，用超滤器过滤，取样，作半成品检测；(2)按测定的溶液中以多肽计肝水解肽的含量测算每支西林瓶中需灌装溶液的体积，无菌分装；(3)冷冻干燥将冷冻干燥机干燥箱温度预冷至-40℃～-45℃，分装后制品立即送入冻干机干燥箱中进行冷冻干燥，冷冻干燥过程及技术控制指标如下预冻将制品温度迅速降至-40℃～-45℃；升华干燥初始搁板温度为-45℃，凝结器温度为-55℃，干燥箱真空度保持在20Pa以下，不断加热升华，至-10℃制品冰层基本消失。二次干燥搁板温度逐渐升至40℃左右，保温干燥，凝结器温度为-50℃，干燥箱真空度5～6Pa；(4)、密塞轧盖、检验、包装即可。上述第(3)步中预冻的时间为4小时，二次干燥的时间为14小时。在制备过程中，最好控制肝水解肽原液中肝水解肽的含量以多肽计为不低于20mg/ml。浓度太低时需先浓缩。否则，由于受到西林瓶体积的限制，会导致每瓶冻干粉针中肝水解肽的含量不足。在制备注射用肝水解肽冻干粉针的过程中，获得高质量的肝水解肽原液是很重要的。具体操作如下(1)原料处理牛或猪肝脏，用剪去胆、筋膜等非肝脏组织、再用冷无菌注射用水冲洗，绞碎；(2)制匀浆提取将绞碎肝脏与注射用水按1∶0.5～1.5的质量比例混合置于胶体磨匀浆，将匀装水浴加热至48～52℃之间，调pH值至8.0～8.5，加肝脏质量的0.5％胰酶恒温连续水解6小时，不断调整pH值，使之保持8.0～8.5之间；(3)去除杂蛋白、离心、过滤调pH值至3.5，并加热至80～85℃保持30分钟，迅速冷却至室温，离心，得上清液将上清液，调pH值至6.5～6.8之间，40℃析出16小时，用微孔滤膜过滤，得过滤液；(4)分子量筛选、细菌内毒素去除将过滤液用超滤器超滤，用洁净无菌器具收取溶液。肝脏离体后时间不能超过2小时。装袋后的肝脏应立即进-40℃冷冻库急冻处理。所使用的肝脏冷藏时间不能超过6个月。本专利技术通过研究肝水解肽原液的制备以及冻干工艺的确定，获得了质量稳定的肝水解肽冻干粉针剂。附图说明图1是本专利技术提供的肝水解肽冻干粉针制备工艺的冻干曲线图。具体实施例实施例1 制备肝水解肽原液(1)原料处理牛或猪肝脏，用剪去胆、筋膜等非肝脏组织、再用冷无菌注射用水冲洗，置于灭菌绞肉机绞碎；(2)制匀浆提取将绞碎肝脏与注射用水按1∶1的质量比例混合置于胶体磨匀浆，将匀装水浴加热至48～52℃之间，用3M NaOH调pH值至8.0～8.5，加肝脏质量的0.5％胰酶恒温连续水解6小时，不断调整pH值，使之保持8.0～8.5之间；(3)去除杂蛋白、离心、过滤将水解液用3M HCl调pH值至3.5，并加热至80～85℃保持30分钟，迅速冷却至室温，离心，得上清液将上清液用3M NaOH调pH值至6.5～6.8之间，40℃析出16小时，用0.45um的微孔滤膜过滤，得过滤液；(4)分子量筛选、细菌内毒素去除将过滤液用1万道尔顿分子量的超滤器超滤，用洁净无菌器具收取1万分子量以下的溶液；实施例2支架剂甘露醇用量的确定我们选用加入同样的主药肝水解肽原液，加入三个不同量的甘露醇进行了冻干试验，并对三批样品进行了含水量、成形性、外观、酸度、溶解性的考察。结果如下表1 支架剂不同用量的考察结果 从上表可看出，三个处方的酸碱度、干燥失重、溶解性均好，但处方1、处方2成形较差，我们选用每支加入200mg甘露醇作为支架剂。实施例3冻干工艺(1)配制取实施例1中检验合格的肝水解肽溶液，依据检验结果按处方量投料，配制成2ml∶20mg(多肽)溶液，加入甘露醇作赋形剂，使其在溶液中的浓度为10％，调pH值至7.0，用超滤器过滤，取样，作半成品检测。(2)灌装经检测合格的半成品，按每瓶2.0ml装量，进行无菌分装，半加塞，送入冻干箱进行冷冻干燥。(3)冷冻干燥将冷冻干燥机干燥箱温度预冷至-40℃，分装后制品立即送入冻干机干燥箱中进行冷冻干燥，时间29小时。冷冻干燥过程及技术控制指标如下预冻将制品温度迅速降至-40℃，保温4h。升华干燥初始搁板温度为-45℃，凝结器温度为-55℃，干燥箱真空度保持在20Pa以下，不断加热升华，至-10℃制品冰层基本消失，此过程约11h左右。二次干燥搁板温度逐渐升至40℃左右，保温干燥，凝结器温度为-50℃，干燥箱真空度5～6Pa，此过程约14小时。详细冻干过程温度的变化见图1。(4)、密塞轧盖在冷冻干燥箱中压塞，取出冷冻干燥制品，移入轧盖机进行轧盖。(5)、检验。(6)、包装按拟定包装进行。实施例4 按实施例3生产样品一批，取样将其分别置于强光(4500Lx±500Lx)，高湿(RH92.5％)，高温(60℃)条件下放置10天，于5、10天分别取样考察样品的性状、主药含量、酸碱度、澄明度、高分子量物质、干燥失重，并与0天比较，评价其稳定性(见图1～10)。表二 影响因素试验 结果表明本品在强光(4500Lx±500Lx)、高湿(92.5％)、高温(60℃)条件下试验，其性状、主药含量、酸碱度、蛋白质、高分子量物质、胸腺肽α1、活性各项指标均无明显变化，表明本品在高温、高湿、光照条件下稳定性较好。说明本品的处方工艺条件是稳定可行的。本文档来自技高网...

【技术保护点】
注射用肝水解肽，其含有有效成分肝水解肽外，还含有赋形剂，所说的赋形剂在冻干溶液中的浓度为８～１２％。

【技术特征摘要】
1.注射用肝水解肽，其含有有效成分肝水解肽外，还含有赋形剂，所说的赋形剂在冻干溶液中的浓度为8～12％。2.根据权利要求1所述的注射用肝水解肽，其特征在于肝水解肽以多肽计每瓶注射用肝水解肽含量为20或50mg。3.根据权利要求1或2所述的注射用肝水解肽，其特征在于赋形剂为甘露醇。4.权利要求1所述的注射用肝水解肽的制备方法，其特征在于该方法包含下列步骤(1)配制根据对肝水解肽原液测定的多肽含量配制成一定浓度的溶液，使制备的每瓶注射用肝水解肽的含量达到规定的量，加入赋形剂，使溶液中赋形剂的含量为8～12％，调pH值至5.5～7.5，用超滤器过滤，取样，作半成品检测；(2)按测定的溶液中以多肽计肝水解肽的含量测算每支西林瓶中需灌装溶液的体积，无菌分装；(3)冷冻干燥将冷冻干燥机干燥箱温度预冷至-40℃～-45℃，分装后制品立即送入冻干机干燥箱中进行冷冻干燥；冷冻干燥过程及技术控制指标如下预冻将制品温度迅速降至-40℃～-45℃；升华干燥初始搁板温度为-45℃，凝结器温度为-55℃，干燥箱真空度保持在20Pa以下，不断加热升华，至-10℃制品冰层基本消失；二次干燥搁板温度逐渐升至40℃左右，保温干燥，凝结器温度为-50℃，干燥箱真空度5～6Pa；(4)、密塞轧盖、检验、包装即可。5.权利要求4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄伟，曾艺，彭国强，
申请(专利权)人：武汉同源药业有限公司，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]