癞葡萄籽油甘油三酰酯在制备用于抑制肿瘤细胞的药物中的用途制造技术

本发明专利技术涉及癞葡萄籽油甘油三酰酯在制备用于抑制肿瘤细胞的药物中的用途。除了对结肠癌细胞系的毒性不如α－桐酸外，癞葡萄籽油中含共轭亚麻酸的甘油三酰酯对４个人体肿瘤细胞系都具有极强的毒性；而对正常肝细胞虽有毒性，但强度不高。因此，癞葡萄籽油甘油三酰酯具有良好的抑制肿瘤细胞的前景。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及癞葡萄籽提取物的用途，更具体地，本专利技术涉及癞葡萄籽油甘油三酰酯在制备用于抑制肿瘤细胞的药物中的用途。
技术介绍
癞葡萄(Momordica charantia L.Var.abbreviata Ser.，MCV)是苦瓜的一个变种，原产于印度东部，经江苏省优质产品开发服务中心驯化改良，被无锡市富仁生物技术有限公司成功地予以大面积栽培、开发。癞葡萄果实整体呈纺锤状，果面呈不规则尖刺状，长约4～10cm，宽约3～6cm，果重25g-30g，未成熟果实呈浅绿色，成熟后为金黄色。癞葡萄与我国常见的苦瓜外形略有不同。 癞葡萄籽中含油量约30％，脂肪酸组成较为简单，主要成分为十八个碳的脂肪酸，其含量达96.28％，其中十八碳不饱和脂肪酸含量达64.51％，在十八碳不饱和脂肪酸中共轭亚麻酸(conjugated linolenic acid，记为CLn)为其主要成分，其含量是总脂肪酸的55.13％。 近年来人们对共轭三烯酸(conjugated trienoic acid)抗癌活性的研究比较活跃，研究对象主要是富含共轭亚麻酸的植物油(如栝楼籽油、苦瓜籽油、石榴籽油等)以及纯CLn(如α-桐酸、栝楼酸、石榴酸等，它们均为十八碳共轭三烯酸，互为顺反异构体)，尤其对苦瓜籽油和α-桐酸的抗结肠肿瘤的活性及机理作了较多的研究，但对这些油的甘三酯(triacylglycerols，记为TG)组成及结构与抗肿瘤功效之间的关系研究较少。主要原因是TG组成复杂，同分异构现象普遍，难以分离得到单一的TG。TG是植物和动物天然脂质存在的主要形式，它们的分子结构，包括脂肪酸在甘油骨架上不同空间位置的分布，对它们的消化和吸收等营养性质，生物合成等生物化学性质，晶体结构、熔点等物理性质都有重大的影响，这一观点已经得到了普遍认同。13C-NMR法和胰脂酶定向水解TG法是研究TG组成与结构的常用手段，可以从整体上了解油脂TG中的脂肪酸分布的信息，但仍不能说明具体TG的结构；近年已有用APCI-MS法推断具体TG结构的报道。我们采用13C-NMR和APCI-MS两种方法，其结果相互印证，以图准确判定癞葡萄籽油(The Seed oil ofMomordica charantia L.Var.abbreviata Ser.，MCO)TG的结构。我们采用体外细胞培养方法，考察、比较MCO混合TG、α-桐酸以及从MCO混合TG中分离得到的不同TG对消化系统系列肿瘤细胞增殖的影响，探讨脂肪酸、甘三酯对于油脂的抗肿瘤功效是否存在结构或组成决定功效的关系的问题，同时试图发现该系列活性物质的抑瘤规律，筛选对某一肿瘤细胞株抑制作用最强的物质，并探求其作用浓度范围，为癞葡萄籽油的深度开发及其在肿瘤防治上的应用提供理论依据。
技术实现思路
[要解决的技术问题] 本专利技术的目的是提供一种癞葡萄籽油甘油三酰酯在制备用于抑制肿瘤细胞的药物中的用途。 [技术方案] 本专利技术涉及一种癞葡萄籽油甘油三酰酯在制备用于抑制肿瘤细胞的药物中的用途。 所述的癞葡萄籽油甘油三酰酯是采用下述方法制备的 (i)、癞葡萄籽阴干后去壳，25重量份癞葡萄籽用研钵磨成粉状，再转入具塞锥形瓶中，先加50重量份氯仿、100重量份甲醇，振摇2min，然后再加50重量份氯仿、50重量份水，振摇2min后进行过滤，滤渣用10重量份氯仿、20重量份甲醇、20重量份氯仿/水混合物(1∶1，v/v)顺序洗涤，合并洗液再转入分液漏斗静置分层，分离含氯仿液层，再用装有无水硫酸钠的漏斗进行过滤，得到的滤液用旋转蒸发仪在35℃水浴中在减压下蒸去溶剂，然后用氮气吹除残余溶剂，其油样充氮气置于冰箱中保存备用；其中所述的癞葡萄籽是由江苏无锡市富仁生物科技有限公司提供的。 (ii)、25重量份硅胶用80重量份石油醚/无水乙醚(87∶13，v/v)与1重量份乙酸的混合液浸泡一夜，装柱，再取2.5重量份所述油样，用50重量份所述混合液溶解，油样上柱，再用150重量份所述混合液作为洗脱液洗脱60-70min，收集洗脱液，用旋转蒸发仪在35℃水浴中在减压下蒸去溶剂，得到所述的癞葡萄籽油甘油三酰酯混合物(癞葡萄籽油TG)。 (iii)、液相色谱法分离癞葡萄籽油甘油三酰酯混合物 制备所述的癞葡萄籽油甘油三酰酯混合物溶液将所述癞葡萄籽油甘油三酰酯混合物样品溶于异丙醇/正己烷(5∶4，v/v)中，达到浓度200mg/mL； 液相色谱法分离条件WaterTM600(Waters公司)；色谱柱Lichrospher C18柱(10μm，250mm×10.0mm)(江苏汉邦科技有限公司)；柱温30℃；进样量50μL；流动相乙腈∶异丙醇/正己烷(5/4，v/v)＝60∶40(v/v)；流速3mL/min；检测波长270nm，所述的癞葡萄籽油甘油三酰酯混合物溶液上柱，分离，收集期望组分，得到所述的癞葡萄籽油甘油三酰酯。 在本专利技术中，所述的肿瘤细胞选自肝、胃、食道、结肠或口腔癌。 下面详细地描述(1)癞葡萄籽油TG组成和结构分析、(2)细胞试验与数据处理方法。 1、癞葡萄籽油TG的RP-HPLC/APCI-MS分析与制备 (i)色谱条件Waters 2695 Alliance HPLC Pump，SunFire C18 column(25cm×2.1mm，5μm particle size，Waters，USA)。将癞葡萄籽油TG样品溶于异丙醇/正己烷(5∶4，v/v)中，其浓度1mg/mL，进样量3μL。柱温35℃。流动相A乙腈，流动相B异丙醇/正己烷(5∶4，v/v)，梯度洗脱在0min100％A，50min内变到50％A+50％B，然后在10min内变为100％B，流速0.3mL/min。 (ii)质谱条件离子源为大气压化学电离(atmospheric pressurechemical ionization，APCI)，AP+模式，探针温度400℃，锥孔电压52v，扫描范围300-1000amu，氮气保护。 二极管阵列紫外检测器扫描范围200-400nm。 (iii)NMR分析条件 仪器型号BRUKER AVANCE500(Bruker Biospin International AG)。 13C-NMR采样脉冲宽度45°，扫描次数500-1000，测试温度300K，弛豫时间4s，在125MHz下观测，TMS为内标。 (iv)试验样品配制 癞葡萄籽油TG、α-桐酸(桐籽采自湖南省吉首市郊，桐油提取方法与癞葡萄籽油提取方法相同，经皂化得到桐油混合脂肪酸，再用一定比例的乙醇-水溶液溶解，低温下重结晶两次，得到白色针状结晶为α-桐酸)、从癞葡萄籽油混合TG中用液相色谱法分离得到的癞葡萄籽油甘油三酰酯各峰组分，用N2吹干溶剂，准确称量，用无水乙醇或四氢呋喃配成20mmol/L的储备液于-18℃冰箱中保存，2周内使用。 (v)癞葡萄籽油TG组成与结构分析 采用RP-HPLC/APCI-MS进行初步确定 采用RP-HPLC/APCI-MS方法从已纯化癞葡萄籽油甘三酯混合物中分离癞葡萄籽油甘三酯，并初步确定其结构。本法所需样品量少，分析时间短，可以分析癞葡萄籽油甘三酯混合物中的单个癞葡萄籽油甘三酯，其他方法较难做本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种癞葡萄籽油甘油三酰酯在制备用于抑制肿瘤细胞的药物中的用途。

【技术特征摘要】
1、一种癞葡萄籽油甘油三酰酯在制备用于抑制肿瘤细胞的药物中的用途。2、根据权利要求1所述的用途，其特征在于癞葡萄籽油甘油三酰酯是采用下述方法制备的(i)、癞葡萄籽阴干后去壳，25重量份癞葡萄籽用研钵磨成粉状，再转入具塞锥形瓶中，先加50重量份氯仿、100重量份甲醇，振摇2min，然后再加50重量份氯仿、50重量份水，振摇2min后进行过滤，滤渣用10重量份氯仿、20重量份甲醇、20重量份氯仿/水混合物(1∶1，v/v)顺序洗涤，合并洗液再转入分液漏斗静置分层，分离含氯仿液层，再用装有无水硫酸钠的漏斗进行过滤，得到的滤液用旋转蒸发仪在35℃水浴中在减压下蒸去溶剂，然后用氮气吹除残余溶剂，其油样充氮气置于冰箱中保存备用；(ii)、25重量份硅胶用80重量份石油醚/无水乙醚(87∶13，v/v)与1重量份乙酸的混合液浸泡一夜，装柱，再取2...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤坚，傅伟昌，顾小红，徐春燕，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]