本发明专利技术公开了一种枇杷叶总三萜酸提取物的制备方法，该方法包括以下步骤：（１）将枇杷叶干燥粉碎；（２）用乙醇或甲醇为溶剂提取枇杷叶干燥粉末，将提取液减压浓缩成浸膏；（３）将步骤（２）中得到的浸膏用８０－９０％乙醇或甲醇溶解，过滤或离心除去不溶物，得到醇溶液；（４）取活性炭装柱，将步骤（３）得到的醇溶液上样，用乙醇或甲醇进行梯度洗脱，收集洗脱液；（５）将步骤（４）收集的洗脱液浓缩干燥，得枇杷叶总三萜酸提取物；或将步骤（４）收集的洗脱液浓缩至醇浓度为２０－５０％，放置６－１２小时，过滤，将沉淀物干燥，得枇杷叶总三萜酸提取物。该方法制得的枇杷叶总三萜酸含量高，且工艺简单，成本低。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术具体涉及。
技术介绍
枇杷叶是蔷薇科枇杷属植物枇杷Eriobotrya japonica (Thunb. ) Lindl.的干燥 叶，是一味常用传统中药，收载于历版中国药典供中医临床使用。枇杷叶归肺、胃经，具清肺 止咳、降逆止呕作用，用于治疗肺热咳嗽、气逆喘气、胃热呕逆、烦热口渴等症状。新近的研 究发现从枇杷叶中分离得到的三萜酸类化学成分具有显著的降血糖活性。目前对枇杷叶总三萜酸提取物的制备，大多直接采用溶剂提取，工艺相对简单，但 所得到的提取物中三萜酸的含量较低；改进工艺能适当提高提取物中三萜酸的含量，但工 艺相对复杂、成本高，且三萜酸含量提高较少，无法满足制药需求。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有工艺中的缺陷，提高枇杷叶总三萜酸提取物中三萜酸的含量。为了达到上述目的，本专利技术提供了，该方 法包括以下步骤(1)将枇杷叶干燥粉碎；(2)用乙醇或甲醇为溶剂提取步骤(1)中得到的枇杷叶干燥粉末，将提取液减压 浓缩成浸膏；(3)将步骤O)中得到的浸膏用80-90%乙醇或甲醇溶解，过滤或离心除去不溶 物，得到醇溶液；所述乙醇或甲醇的重量为浸膏重量的10-40倍；(4)取活性炭装柱，将步骤C3)得到的醇溶液上样，用乙醇或甲醇进行梯度洗脱， 收集洗脱液；所述活性炭与步骤(1)中所述枇杷叶的重量比为0.2-5 1.；(5)将步骤(4)收集的洗脱液浓缩干燥，得枇杷叶总三萜酸提取物；或将步骤(4) 收集的洗脱液浓缩至醇浓度为20-50% (最佳浓度为30-35% )，放置6-12小时，过滤，将沉 淀物干燥，得枇杷叶总三萜酸提取物。其中，步骤O)中提取方法为每千克枇杷叶加入4-10L浓度为60-95%的乙醇或 甲醇，热回流或浸渍或渗漉提取2-4次，热回流提取每次1-3小时，浸渍或渗漉提取每次15 天，合并提取液。最佳提取方法为每千克枇杷叶加入8L浓度为90%的乙醇提取2小时， 过滤，滤渣加入6L浓度为90%的乙醇提取1小时，过滤，合并两次提取液。步骤中活性炭与枇杷叶的重量比为1 3 ；中洗脱采用重量为活性炭重量 8-15倍的80-90%乙醇；或先采用重量为活性炭重量10-20倍的10-75%乙醇进行洗脱，后 采用重量为活性炭重量8-15倍的80-90%乙醇进行洗脱，收集80-90%的乙醇洗脱液。本专利技术具有以下优点(1)本专利技术采用醇提取结合活性炭柱层析法进行制备，能够有效提高总三萜酸含量，经高效液相色谱法检测含量均高于60%，最高能达到69%，紫外分光光度法测得总三 萜酸含量以熊果酸计均高于80%。(2)活性炭是由含炭为主的物质作原料，经高温炭化和活化制得的疏水性吸附剂。 活性炭含有大量微孔，具有巨大的比表面积，易于吸附非极性或极性很低的吸附质，对芳香 族化合物的吸附力大于脂肪族化合物，对极性基团多的化合物的吸附力大于极性基团少的 化合物。枇杷叶中除了三萜酸外还含有黄酮类和多酚类化合物，枇杷叶中含有的三萜酸类 化合物大多为低极性大分子，而枇杷叶中的黄酮类和多酚类化合物具有芳环结构，而且大 都含有多个酚羟基，极性较大，活性碳对其吸附力比三萜酸类更强。因此采用活性炭柱层析 法纯化提取物时，80-95%高浓度乙醇可以将三萜酸类成分洗脱下来，而多酚类黄酮类化合 物则依旧保留在活性炭柱上。同时活性炭相对大孔树脂等常规柱层析材料价格便宜，在工 业生产上能够节约成本；且在进行洗脱时，杂质不易解吸附，因此不需要进行梯度洗脱，工 艺相对简单。(3)本专利技术采用活性炭进行柱层析，不同于常规试验中采用活性炭进行热回流 首先，活性炭的用量(20%-500%)比常规用量(一般加入量均小于5%)大，能够有效的 吸附杂质，从而提高产物的三萜酸含量；其次，采用动态的解吸附过程，能够使三萜酸和杂 质更好的分离，提高产品纯度。(4)本专利技术采用活性炭柱层析法得到的洗脱液采用浓缩至低醇度自然沉析的方 法，枇杷叶中的三萜酸极性小能够自然析出，而极性较大的杂质溶解于母液中，从而能够有 效的去除极性较大的杂质，进一步提高产物中总三萜酸的含量。具体实施例方式工艺优选实施例本试验采用以下4种方法制备枇杷叶总三萜酸提取物，根据高效液相色谱法测量 各三萜酸成分的含量，同时根据紫外分光光度法测量总三萜酸含量，并进行比较A、醇提取法100g枇杷叶药材粗粉，分别加药材重量8倍量和6倍量85%乙醇回 流提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，过滤，合并提取液并浓缩干燥。B、醇提取醇溶解法100g枇杷叶药材粗粉，分别加药材重量8倍量和6倍量85% 乙醇回流提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，过滤，合并提取液并浓缩成浸膏，浸膏 加90%乙醇溶解，过滤，上清液浓缩干燥。C、醇提结合活性碳加热回流法100g枇杷叶药材粗粉，分别加药材重量8倍量和 6倍量85%乙醇回流提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，过滤，合并提取液并浓缩成 浸膏，浸膏加90 %乙醇溶解，过滤，取上清液加入20g活性碳，加热回流，趁热过滤，滤液浓 缩干燥。D、醇提结合活性碳柱层析法100g枇杷叶药材粗粉，分别加药材重量8倍量和6 倍量85%乙醇回流提取两次，提取时间分别为2小时、1小时，过滤，合并提取液并浓缩成浸 膏，浸膏加90 %乙醇溶解，滤过，上清液上20g活性碳柱，300g 90%乙醇进行洗脱，收集洗 脱液浓缩干燥。高效液相色谱法色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Cw柱，250mm*4. 6mm，5 μ m)；以甲醇(A)-O. 15%甲酸(B)为流动相梯度洗脱，0 Imin A B = 73 27，2 48min A B =80 20，49 60minA B = 90 10。柱温 30°C ；检测波长 208nm。对照品溶液的制备精密称取三萜对照品适量加甲醇溶解配置成含野鸭椿酸 0. 2mg · ml—1、委陵菜酸0. Img · ml—1、山楂酸0. Img · πιΓ1、克罗索酸0. 2mg · ml—1、齐墩果酸 0. 05mg · πιΓ1、熊果酸0. 2mg · πιΓ1的混合对照品溶液作为对照品溶液。样品溶液的制备精确称取枇杷叶总三萜酸提取物10. Omg于IOml容量瓶中，加甲 醇超声溶解，摇勻，0. 45 μ m微孔滤膜滤过，即得。样品测定分别取样品溶液和对照品溶液各10 μ 1，进样，按外标法以峰面积计算样品含量。紫外分光光度法对照品溶液的制备精密称取熊果酸5. Omg于25ml容量瓶中，加无水乙醇溶解并 定容至25ml，摇勻即得。样品溶液的制备精确称取枇杷叶总三萜酸提取物6. Omg于25ml容量瓶中，加无 水乙醇超声溶解，定容至25ml，摇勻即得。样品测定精密移取0. 2 0. 4ml样品溶液于试管中，水浴蒸干溶剂，加入新配 5%香草醛-冰醋酸溶液0. :3ml，再加入高氯酸1.01111，601水浴反应151^11，立即置于冰水浴 中冷却，再加冰醋酸5ml混合均勻后于紫外-可见分光光度计下测量M5nm处的吸收值，根 据熊果酸标准曲线计算样品总三萜酸含量。结果见表1，方法D醇提结合活性炭柱层析法得到的总三萜酸含量及各三萜酸成 分含量均明显高于其它三种方法得到总三萜酸含量及各三萜酸成分含量。表ι不同制备方法所得提取物的出If率、各主要总三萜酸的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种枇杷叶总三萜酸提取物的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：（１）将枇杷叶干燥粉碎；（２）用乙醇或甲醇为溶剂提取步骤（１）中得到的枇杷叶干燥粉末，将提取液减压浓缩成浸膏；（３）将步骤（２）中得到的浸膏用８０－９０％乙醇或甲醇溶解，过滤或离心除去不溶物，得到醇溶液；所述乙醇或甲醇的重量为浸膏重量的１０－４０倍；（４）取活性炭装柱，将步骤（３）得到的醇溶液上样，用乙醇或甲醇进行梯度洗脱，收集洗脱液；所述活性炭与步骤（１）中所述枇杷叶的重量比为：０．２－５∶１；（５）将步骤（４）收集的洗脱液浓缩干燥，得枇杷叶总三萜酸提取物；或将步骤（４）收集的洗脱液浓缩至醇浓度为２０－５０％，放置６－１２小时，过滤，将沉淀物干燥，得枇杷叶总三萜酸提取物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吕寒，赵友谊，陈剑，罗美红，李维林，吴菊兰，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：84[]
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