本发明专利技术涉及的是一种从中国水仙球茎中提取分离水仙多糖的方法，该方法包括如下工艺步骤：一、水仙球茎预处理；三、水仙多糖的提取：四、粗多糖脱蛋白；五、沉淀法制备水仙粗多糖；六、水仙粗多糖的纯化。是以新鲜的中国水仙球茎为原料，采用水提醇沉法提取水仙多糖，以三氯乙酸法脱除粗多糖中的蛋白质，最后采用离子交换柱色谱和凝胶排阻色谱法进行纯化得到单一的多糖组分。本发明专利技术方法能够充分提取球茎中的多糖组分，所得多糖纯度高，能充分保持原有的生物活性；制备过程中，只以水和乙醇为溶剂，所用的凝胶材料经处理后可多次重复使用，降低了生产成本，适合大规模工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及的是一种。
技术介绍
φ H/JcyIllJ (Narcissus tazetta L. var. chinensis Roem), ^i^mM (Amaryllidaceae)多年生鳞茎植物，是我国传统十大名花之一，同时也是一种药用植物。中 医认为，水仙鳞茎性味苦、寒，入脾、肾、肝经.有清热解毒、散结消肿、祛风除热、活血调经 之功效，适用于风热病、五心烦热、月经不调、痈肿疮毒、腮腺炎等。《现代实用中药》记述水 仙可“治妇人子宫病.月经不调”。《本草再新》记载水仙可“治痈疽疮毒.排脓消肿.解 热，祛风，疗百虫咬伤”。《岭南采药录》则称“取水仙头部捣烂.敷治乳痈又治一切毒痈病， 捣烂敷之能驱毒”。近年国际药学界在对水仙花的药用研究中发现，水仙有明显的抗病毒作 用.对部分癌肿也有一定的疗效。《本草纲目》写道“水仙花作香泽涂身，理发去风气”。日 本《太和本草》称“水仙花之根去皮晒干研末和以乳汁，对治眼伤有神效。据日本《农 业杂志》记载“将根去皮捣烂和以米饭调拌均勻，贴于患处，能治肿痈，对妇女乳房肿痛有 特殊疗效”。1980年Tomoda等研究了水仙多糖的结构及其生物活性及其对乳腺癌的疗效。 Liu等报道了水仙提取物对癌细胞HL-60具有很好的毒效果。Goh等研究了水仙提取物对 储粮害虫玉米象和赤拟谷盗等害虫具有一定的拒食效果。刘静等报道了水仙提取物对人类 多发性骨髓瘤细胞系ARH-77增殖和凋亡的作用。国内外关于水仙的化学成分研究报道甚少，对中国水仙的研究目前仍未空白，还 未见任何关于中国水仙多糖的提取分离研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种关于，其提取分离方法是 基于脂溶性物质溶于乙醇、多糖不溶于乙醇而溶于热水的特点，采用乙醇脱脂、热水提取、 三氯乙酸脱蛋白、乙醇分级沉淀法得到水仙粗多糖，采用阴离子交换柱和凝胶柱层析纯化 得到精制多糖。本专利技术的技术解决方案，其特征是该方法包括以 下步骤一、水仙球茎预处理取新鲜的水仙球茎剥去表面干枯的表皮后清水洗净，切成 IOmmX IOmm的小片，在40 50°C下烘箱干燥lh，去除表面的水分；二、水仙球茎脱脂将预处理过的水仙球茎片加入该水仙球茎片3 3. 5倍重量的 95%乙醇(ml/g)，回流1 1. 5h，再经过滤，滤渣经风干、粉碎后用于后续的多糖提取；三、水仙多糖的提取脱脂后的球茎粉末用该球茎粉末10 15倍(ml/g)热水在 80°C下浸提3 4次，每次浸提时间为6 8h，浸提液经高速离心机离心，得到上清液经旋 转浓缩至1/4体积，得到水仙粗多糖水溶液；四、粗多糖脱蛋白水仙粗多糖水溶液脱蛋白的方法有Sevage法或三氯乙酸法或等电点法；五、沉淀法制备水仙粗多糖经过脱蛋白处理所得到的水仙多糖水溶液，加入3 4倍体积量的95%乙醇进行沉淀，经抽滤所得的滤饼依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗 涤，冷冻干燥去除所含的少量溶剂后得到水仙粗多糖；六、水仙粗多糖的纯化将醇沉所得的水仙粗多糖溶于蒸馏水，并制成饱和溶液， 经离心除去少量不溶物后，1)采用DEAE-Sephadex A50型离子交换柱初步分离，2)采用梯 度洗脱方式(分别采用蒸馏水、0. lmol/L NaCl水溶液、0. 5mol/L NaCl水溶液、1. Omol/L NaCl水溶液洗涤)，用苯酚-硫酸法跟踪检测，收集单一峰组分，3)采用透析法去除NaCl离 子后再浓缩，4)浓缩液用SephadexG-100进一步分离，用去离子水洗脱，收集单一峰，洗脱 液经减压浓缩、冷冻干燥，得到单一多糖组分。三种不同方法脱除蛋白的效果有较大差异，三氯乙酸法不仅脱蛋白效果好，而且 多糖的损失率也小，Sevage法次之，等电点法效果最差。本专利技术的有点以水仙多糖为原料，提取、纯化水仙球茎的胞内、胞外多糖；能够 充分提取球茎中的多糖组分，所得多糖纯度高，能充分保持原有的生物活性；制备过程中， 只以水和乙醇为溶剂，有效降低了污染，所用的凝胶材料经处理后可多次重复使用，降低了 生产成本，适合大规模工业化生产。具体实施例方式实施例1 将新鲜的水仙球茎剥去表面干枯的表皮后清水洗净，切成小IOmmX IOmm左右大 小的小片，在50°C下烘箱干燥lh，去除表面的水分。称取250g水仙片，装入2500ml烧瓶中， 加750ml 95%乙醇回流1. 5h脱脂，过滤，滤渣置通风厨中风干后粉碎；将脱脂处理过的水 仙球茎加入5000ml圆底烧瓶中，加入2500ml去离子水在80°C下萃取6h，浸提液用8000r/ min的高速离心机离心lOmin，将上清液取出，留下的渣再按相同的方法浸提2次，将3次所 得的上清液合并，经旋转浓缩仪浓缩至600ml左右，得到水仙粗多糖浓缩液。往水仙粗多糖浓缩液中加入40ml三氯乙酸，充分搅拌后放置过夜，在3000r/min 条件下离心lOmin，弃去沉淀得脱蛋白糖液，采用同样的方法经过2次脱蛋白，得到脱蛋白 多糖液。将脱蛋白多糖液加入95%乙醇1800ml进行沉淀，经抽滤所得滤饼依次用无水乙 醇、丙酮、无水乙醚洗涤，冷冻干燥后得到水仙粗多糖11.43g，得率为4.6%。将上述水仙多糖溶于40ml的蒸馏水中，并制成饱和溶液，经离心除去少量不溶物 后，采用DEAE-Sephadex A50型离子交换柱初步分离，采用梯度洗脱方式(蒸馏水、0. Imol/ L NaCl水溶液、0. 5mol/L NaCl水溶液、1.0M mol/L NaCl水溶液)进行洗脱，洗脱速度控制 在4ml/min，用苯酚-硫酸法跟踪检测，收集的组分在490nm处检测吸光值，得到三个吸收 峰，分别收集三个吸收峰(组分A、B、C)，采用透析法去除NaCl离子后再浓缩，得到多糖组 分A、B、C的量分别为4. 3g、3. 7g和2. 6g。多糖组分A再经S印hadex G-100进一步纯化，用 去离子水洗脱，收集单一峰，洗脱液经减压浓缩、冷冻干燥得到单一多糖组分2. 05g。该纯多 糖经酸水解后，采用HPLC测定其单糖组成。测试条件为高效液相色谱仪为Model 500 (美 国 Syltech)，所用液相色谱柱为有机酸柱 IC Sep ICE-Core gel 87H3 (300mmX 7. 8mm)，检测器为示差折光检测器6040XR ；柱温为55°C，流动相为5mmol/L的H2SO4水溶液，流动相 流速为0. 5mL/min，进样量为10 μ L。该纯多糖是高度乙酰化的多糖，乙酰化程度为65% ； 该纯多糖由葡萄糖、甘露糖和阿拉伯糖等三种单糖组成，其中葡萄糖占44. 96%，甘露糖占 54. 93 %，而阿拉伯糖仅占0. 11 %。实施例2:将新鲜的水仙球茎剥去表面干枯的表皮后清水洗净，切成小IOmmX IOmm左右大 小的小片，在40°C或50°C下烘箱干燥lh，去除表面的水分。称取300g水仙片，装入2500ml 烧瓶中，加900ml 95%乙醇回流1.5h脱脂过滤，滤渣置通风厨中风干后粉碎。将脱脂处理 过的水仙球茎加入圆底烧瓶中，加入3000ml去离子水在80°C下萃取6h，浸提液用8000r/ min的高速离心机离心lOmin，将上清液取出，留下的渣再按相同的方法浸提2次，将3次所 得的上清液合并，经旋转浓缩仪本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
中国水仙多糖的提取分离方法，其特征是该方法包括以下步骤一、水仙球茎预处理取新鲜的水仙球茎剥去表面干枯的表皮后清水洗净，切成10mm×10mm的小片，在40～50℃下烘箱干燥1h，去除表面的水分；二、水仙球茎脱脂将预处理过的水仙球茎片加入该水仙球茎片3～3.5倍(ml/g)的95％乙醇，回流1～1.5h，再经过滤，滤渣经风干、粉碎后用于后续的多糖提取；三、水仙多糖的提取脱脂后的球茎粉末用该球茎粉末10～15倍(ml/g)热水在80℃下浸提3～4次，每次浸提时间为6～8h，浸提液经高速离心机离心，得到上清液经旋转浓缩至1/4体积，得到水仙粗多糖水溶液；四、粗多糖脱蛋白水仙粗多糖水溶液脱蛋白的方法有Sevage法或三氯乙酸法或等电点法；五、沉淀法制备水仙粗多糖经过脱蛋白处理所得到的水仙多糖水溶液，加入3～4倍体积量的95％乙醇进行沉淀，经抽滤所得的滤饼依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，冷冻干燥去除所含的少量溶剂后得到水仙粗多糖；六、水仙粗多糖的纯化将醇沉所得的水仙粗多糖溶于蒸馏水，并制成饱和溶液，经离心除去少量不溶物后，1)采用DEAE Sephadex A50型离子交换柱初步分离；2)采用梯度洗脱方式，...
【专利技术属性】
技术研发人员：王石发，高健，谷文，李好瑾，彭镇华，彭爱铭，
申请(专利权)人：南京林业大学，国际竹藤网络中心，
类型：发明
国别省市：84
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