半连续和连续酶促水解方法技术

本发明专利技术涉及受保护的醇基团，例如酯或氨基酸酯或磷酸酯基团的区域选择性酶促水解的半连续或连续式方法。本发明专利技术方法可用于，例如选择性酶促水解具有一个以上的可水解基团的吡喃糖苷或呋喃糖苷。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及受保护的醇基团，例如酯或氨基酸酯或磷酸酯基团的区域选择性酶促水解的改进方法。 W005/121162描述了通过在受保护的醇基团的核糖部分的5'-基团进行选择性水解而制备的某些D-呋喃核糖基化合物。然而，W005/121162描述的酶促水解方法本身对非均相反应方法固有例如反应时间长、水解的选择性有限、每批需要大容器、数个过滤步骤和不易于回收酶等缺点。 本专利技术提供区域选择性酶促水解的改进方法，该方法克服了以前采用的区域选择性酶促水解方法的许多缺点。根据本专利技术，出乎意料地发现通过对具有一个以上可水解基团的底物进行区域选择性酶促水解的半连续或连续式方法，可实现较高的水解选择性和较少的杂质以及不良水解产物。此外，相对于以前采用的长时间、高成本、低处理量的间歇式方法，这种半连续或连续方法是长期而经济的解决之道。与例如W005/121162描述的方法相比，本专利技术方法可显著縮短周期时间并尽可能降低对总容量性能低的影响。这与处理量增加的大规模方法尤其相关。 因此，就其最宽的方面而言，本专利技术提供一种区域选择性酶促水解包含一个以上可水解基团的底物的方法，其中所述酶促水解以半连续或连续方式进行。 在本专利技术的半连续或连续式方法中，通常使加成物的缓冲溶液流过固定化酶。本专利技术的术语"半连续"或"连续"指或多或少连续地(有间断或没有间断)流过柱的过程。合适的停留时间后，加成物完全水解，该过程可原位监测，例如通过对柱后收集并随后提取的包含产物的溶液的pH监测。半连续或连续式方法的关键参数需要依据例如底物、酶等独立进行调整，具体情况可凭经验确定。这些参数包括，例如停留时间、柱的填料、最佳pH、温度、加成物的浓度、有机溶剂的选择。例如，可调整停留时间以使加成物达到最佳水解，即选择性高并且转化快，所述停留时间通常可以是O. l分钟到300分钟。例如，停留时间取决于酶活性、温度、pH、溶剂体系，可调整停留时间从而能允许半连续或连续处理和最佳水解，如上所述。通常根据酶水解反应所需的条件选择pH和温度。例如，pH可以介于，例如5-8，或者例如5. 5-7. 5之间。温度可以在，例如15°C _70°C。 可利用适合于酶促反应的任何缓冲液，例如磷酸盐缓冲液、铵缓冲液、碳酸盐缓冲液、乙酸盐缓冲液。 此外，为完全溶解加成物和产物，可利用合适的有机组分。典型的有机组分包括，例如丙酮、甲乙酮、甲基异丁基酮、甲醇、甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、3-甲基-l-丁醇、2-甲氧基乙醇、2_乙氧基乙醇、叔丁基甲基醚、四氢呋喃、2_甲基四氢呋喃、二噁烷、乙腈、二氯甲烷、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、离子性液体、压縮气体，如二氧化碳、水等等，或它们的混合物。也设想了其它醇类、醚类、酮类。 此外，可利用添加齐U，例如来提高反应速率。典型的添加剂包括，例如PEG(1% -10% ) 、 NaCl、 Na2S04、 FeCl3。可凭经验确定这些添加剂的合适浓度，通常可以是0. 05M-1M。为方便起见，可将添加剂加入加成物的溶液中。 将酶固定在物理支承物，例如固体支承物上。适合于本专利技术的固定化酶所用的物理支承物包括，例如柱、连续搅拌罐、填充床反应器、膜式反应器、膜。根据本专利技术可使用适 合于水解的任何酶，例如酯酶、水解酶、脂肪酶。 本专利技术方法的合适底物含有至少两个可水解的基团，S卩，例如两个乙酸酯基、苯甲 酸酯基。这种基团的典型例子是保护的醇基团，例如酯基、氨基酸酯基、磷酸酯基。在一个 实施方式中，底物是吡喃糖苷或呋喃糖苷。 按照本专利技术的一方面，底物是通常由如以下式(1)_(21)所示的化合物(不具有立体化学特性) <formula>formula see original document page 8</formula> 式中R独立地为H、烷基、羟基、羟基烷基、-NR' R〃、-SR〃 '、卤代；R'禾口 R"独立地为烷基、-SR〃 ' 、-S0R〃 ' 、-S02R〃 ' ；R"'独立地为H、烷基、芳基；W独立地为H、 -C(0)R^外消旋的、L-或D-氨基酸基团-C(0)CH2NHR4、 -C(O)CH((V6烷基)NHW、磷酸酉旨基；R3是(V18烷基；R4是H、 -C (0) CH (C卜6烷基)NH2、或_C (0) CH (CH2-芳基)NH2 ;B是核碱基(皿cleobase) ;X、Y禾P Y'独立地为_CH2_、—CHR' -、_CR' R〃 —或0、NR〃 ' 、S，其中R' 和R〃独立地为烷基和R〃 '是H或烷基或CO (Z) ， Z是0-烷基或NH-烷基或N-烷基2 ;和 R2是H、 -C (0) CH ((V6烷基)NH2 、或-C (0) CH (CH2-芳基)NH2 。 本文所用的术语"烷基"包括具有直链、支链或环状部分(包括稠合和桥连双环和 螺环部分)或上述部分组合的饱和单价烃基团。优选的烷基的例子包括C卜w或(V12烷基。 芳基可以未取代或在任何位置取代。芳基通常有0、1、2或3个取代基。在另一优选的实施 方式中，烷基是低级烷基，例如C卜e，更优选(V4。特别优选的是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁 基、仲丁基或叔丁基、正戊基或支化的戊基。烷基可以未取代或在任何位置取代。烷基通常 有0、1、2或3个取代基。 本文所用的术语"烯基"包括具有至少一个碳-碳双键的烷基部分，其中烷基如上 定义，包括所述烯基部分的E和Z异构体。本文所用的术语"炔基"包括具有至少一个碳_碳 三键的烷基部分，其中烷基如上定义。 本文所用的术语"芳基"包括通过自芳烃除去一个氢而衍生的有机基团，通常是 C6—w芳基。芳基可以未取代或在任何位置取代。所述芳基通常有0、1、2或3个取代基。典 型的例子包括苯基或萘基。 本文所用的术语"磷酸酯基"包括一个或多个磷酸酯基团，例如-(HO(PO)OH) 迈-(HO(PO(OH))OH) ， m是0、1或2， n是0、 1、2、3、4、5。 本专利技术的烷基或芳基还可以进一步取代，例如用一个或多个卤素(F、Cl、Br、1)取 代基或一个或多个以下取代基取代氰基、硝基、三氟甲基、三氟甲氧基、C「Ce烷基、C厂Ce烯 基、C2-C6炔基、羟基、CrC6烷氧基、_NH2、 -NH-烷基、-N(烷基)2、 -NH-芳基、-N(烷基)(芳 基)、-N(芳基)2、 -NHCHO、 -NHC (0)烷基、-NHC (0)芳基、-N(烷基)C (0) H、 -N(烷基)C (0) 烷基、-N(芳基)C(O)H、 -N(芳基)C(O)烷基、-朋0)2烷基、_^烷基)0)2烷基、-NHC(O) NH2 、 -N (烷基)C (0) NH2 、 -NHC (0) NH-烷基、-NHC (0) N (烷基)2 、 _N (烷基)C (0) NH-烷基、N (烷 基)C(0)N(烷基)2、 -NHS02-烷基、-N(烷基)S02-烷基、-C(O)烷基、-C(O)芳基、-OC(O) 烷基、-OC(O)芳基、-0)2-烷基、-0)2-芳基、-C02H、 -C(0)NH2、 -C(O)NH-烷基、-C(O)N(烷 基)2 、 -C (0) NH-芳基、-C (0) N (芳基)2 、 -C (0) N (烷基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种区域选择性酶促水解底物上的可水解基团的方法，所述底物包含一个以上的可水解基团，其中所述酶促水解以半连续或连续式方法进行。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：F高鲁，P本尼，
申请(专利权)人：安那迪斯药品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]