氯霉素免疫原、包被原及其在胶体金试纸中的应用制造技术

本发明专利技术涉及氯霉素免疫原、包被原及其在胶体金试纸中的应用，属于免疫学技术领域。该免疫原、包被原为氯霉素通过高锰酸钾氧化后所得的半抗原偶联载体蛋白的产物。此半抗原在分子结构，立体化学和电子分布上与氯霉素对应体相似。半抗原分子具有便于与蛋白载体偶联的活性基团，且活性基团的存在对待测物分子的电子分布没有影响。此半抗原偶连学蓝蛋白后能使机体产生效价高，特异性好的针对氯霉素的抗体，吸附于玻璃纤维素膜上；偶连人血清蛋白后构建的包被原可被吸附于硝酸纤维素膜上，用于构建氯霉素胶体金试纸。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种氯霉素免疫原、包被原，属于免疫学

技术介绍
氯霉素最初是从委内瑞拉链丝菌的培养液中提取制得，现在用化学合成法大量生 产。是一类广谱抗生素。对革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌均有抑制作用。其中对伤寒杆菌、 流感杆菌和百日咳杆菌物作用比其它抗生素强，对立克次体感染如斑疹伤寒也有效，但是 对革兰氏阳性球菌的作用不及青霉素和四环素。2002年的上半年，围绕着动物源性食品中国与欧盟之间引发了一系列贸易纷争。 2002年1月28日，欧盟以氯霉素残留为由宣布全面禁止从中国进口动物源性食品。此项 “禁令”封杀了中国每年约7亿美元的相关产品出口。中国方面迅速就此作出回应。2月7 日，英国以氯霉素超标为由停止销售中国蜂蜜，2月中下旬，英国食品标准局在市场上抽样 检测中查出我国蜂蜜含欧盟禁用药物——氯霉素残留，发生了上市中国蜂蜜被召回的恶性 事件。并影响到了中国蜂蜜对日本、加拿大等国的出口。中国国家质检总局专门就氯霉素 音量先后下发了两个紧急通知(国质检食函510号、国质检食函578号)，禁 止在出口水产品的饲料、养殖(包括环境、器械等的消毒)、加工、保鲜、包装和运输等生产 环节使用氯霉素，并要求各地检验检疫机构加强对出口，限期整改，对如期验收不合格的企 业将取消其出口注册资格，禁止其产品出口。2002年8月21日农业部和国家质检总局发出 联合通知，声明将对中国水产品进行专项整治，以尽快削除药物对中国水产品的危害。我国 农业部第235号文规定动物性食品中氯霉素残留限量为不得检出。然而由于氯霉素抑菌效 果好且价格低廉，目前我国仍有部分养殖主将氯霉素用于治疗家畜、禽类疾病。为了保障人 民健康及扩大与世界各国食品贸易往来，必须对氯霉素残留进行监控。氯霉素是小分子化合物，常用的检测方法有高效液相色谱分析法(HPLC)或液相 色谱/质谱联用分析法(LC/MS)。这些方法普遍存在着仪器昂贵，方法复杂，操作烦琐，试 剂消耗量大的局限性。20世纪80年代兴起的胶体金免疫层析检测，基于免疫学检测原理， 操作简单快捷、结果清晰易于判断、无需复杂的实验技能和设备，特别适于现场检测。能够 在第一时间检测水产品中氯霉素残留，对遏制氯霉素的非法使用具有重要意义。但是目前 市面上的氯霉素胶体金速测产品存在检测限无法满足国家限量要求的现状。解决此问题在 于以下两个途径(一)改善抗体质量和竞争物。而改善抗体质量还在于优化免疫原结构； (二)改善包被原结构，从而从竞争物的角度优化抗原抗体识别。
技术实现思路
针对上诉问题，本专利技术提供了一种氯霉素免疫原、包被原，该免疫原、包被原能极 大提高氯霉素胶体金速测的灵敏度。本专利技术的另一个目的是提供该免疫原、包被原在胶体金试纸生产中的应用。上述氯霉素免疫原的制备包括以下步骤(1)氯霉素半抗原的合成；(2)氯霉素半抗原活泼酯的合成；(3)氯霉素半抗原活泼酯于血蓝蛋白进行偶联；(4)免疫原的纯化；(5)免疫原蛋白浓度的确定，分装。所述的半抗原具有式(I)所示结构权利要求1.氯霉素免疫原、包被原，其特征在于其制备方法为氯霉素半抗原和蛋白进行交联。2.根据权利要求1所述的半抗原，其特征在于所述的半抗原具有式(I)所示结构。3.根据权利要求1所述的免疫原，其特征在于所述的免疫原为氯霉素半抗原和血蓝蛋 白偶联的产物，具有式(II)所示结构。4.根据权利要就1所述的免疫原，其特征在于其用于免疫实验动物产生特异性识别氯 霉素的抗体，抗体标记胶体金后，吸附玻璃纤维膜上，置于样品垫附近，特异性识别氯霉素 分子。5.根据权利要求1所述的包被原，其特征在于所述的包被原为氯霉素半抗原和人血清 蛋白偶联后的产物，具有式(III)所示结构。6.根据权利要求1所述的包被原，其特征在于其用于包被于检测带附近，识别过量的 胶体金标记氯霉素抗体。全文摘要本专利技术涉及氯霉素免疫原、包被原及其在胶体金试纸中的应用，属于免疫学
该免疫原、包被原为氯霉素通过高锰酸钾氧化后所得的半抗原偶联载体蛋白的产物。此半抗原在分子结构，立体化学和电子分布上与氯霉素对应体相似。半抗原分子具有便于与蛋白载体偶联的活性基团，且活性基团的存在对待测物分子的电子分布没有影响。此半抗原偶连学蓝蛋白后能使机体产生效价高，特异性好的针对氯霉素的抗体，吸附于玻璃纤维素膜上；偶连人血清蛋白后构建的包被原可被吸附于硝酸纤维素膜上，用于构建氯霉素胶体金试纸。文档编号C07K14/795GK101993487SQ20091018976公开日2011年3月30日 申请日期2009年8月27日 优先权日2009年8月27日专利技术者张世伟, 李细清, 谭攀, 钟松清 申请人:深圳市三方圆生物科技有限公司本文档来自技高网...

【技术保护点】
氯霉素免疫原、包被原，其特征在于其制备方法为氯霉素半抗原和蛋白进行交联。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：钟松清，谭攀，李细清，张世伟，
申请(专利权)人：深圳市三方圆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：94[中国|深圳]