包含类凝血酶的止血组合物及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种新型的止血组合物，其包括纤维蛋白原或纤维蛋白、以及类凝血酶，其中，类凝血酶与纤维蛋白原或纤维蛋白之比为０．０１～１００ＩＵ∶１ｍｇ。由于类凝血酶形成的凝块不会引起收缩，而且类凝血酶不会引发交叉免疫反应，因而本发明专利技术的止血组合物能够克服现有包含凝血酶或凝血酶原的止血产品所存在的诸多缺点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种止血组合物及其制备方法，更具体是涉及一种。
技术介绍
人和动物凝血过程包括纤维蛋白的形成与交联，这一过程包括纤维蛋白单体的形 成、聚合及纤维蛋白的交联。1)纤维蛋白单体的形成纤维蛋白原是由肝合成，具有两条α链(Aa)、两条β链 (Ββ)、和两条γ链(Υ2)，即三对不同的多肽链组成的糖蛋白，可用(Aa、Bi3、Y)2表示， 在凝血酶的作用下，纤维蛋白原释放出A和B小肽，形成纤维蛋白单体。2)纤维蛋白单体的聚合及交联可溶性纤维蛋白单体间通过氢键等次级键相连 而成的多聚体凝块，虽可网罗血细胞而形成血凝块，但较松软且不稳定，需在Ca2+参与下， 由X III a作用才能进一步转变为稳定的纤维蛋白多聚体。因子X III是由两对不同的多肽链 组成的四聚体，在Ca2+参与下由凝血酶、Xa作用于转变为XlIIa，XlIIa使可溶性纤维蛋白多 聚体中一分子纤维蛋白单体的Gln残基与另一分子单体的Lys残基间形成分子间共价键， 从而形成稳定的纤维蛋白多聚体，并在血小板的作用下，使网罗血细胞的血块进一步收缩， 形成更坚固的血凝块，完成凝血过程。在凝血过程中凝血酶起主要作用。在蛇毒中存在着一类蛋白酶，它们与凝血酶有 相似的功能，被称为蛇毒类凝血酶。蛇毒类凝血酶主要存在于蝮亚科(Viperidae)和蝰科 (Crotalidae)蛇毒中。蛇毒类凝血酶具有精氨酸酯酶活性，能够直接作用于纤维蛋白原，水 解释放血纤肽A(fibrinop印tide A, FPA)或B (FPB)，使纤维蛋白单体首尾聚合而凝固。在 体外作为促凝剂引起血浆或纤维蛋白原凝集，但类凝血酶在体内不激活凝血因子X III，由 类凝血酶水解生成的纤维蛋白凝块不产生侧链交联，对纤溶酶的作用高度敏感，很容易被 天然网状内皮系统或正常的纤溶作用清除。一般来说，不同种属的血浆纤维蛋白原对类凝 血酶的敏感性依次为人>狗>鼠>兔。蛇毒类凝血酶与凝血酶的不同点在于1、已知的蛇毒类凝血酶均是单一的多肽 链，具有多个二硫键，不含游离的巯基。凝血酶含A、B两条链。2、几乎所有的类凝血酶均为 糖蛋白，但与凝血酶不同的是其寡糖链是与天冬酰氨连接，而不是丝氨酸。3、它进行水解时 有的仅使纤维蛋白原Aa链上裂解出纤维蛋白肽A，有的蛇毒则只裂解出纤维蛋白肽B，或是 裂解出纤维蛋白A和B肽，但速率不同。其分子间是首尾相连接。4、对凝血因子XIII无激 活作用，不能使纤维蛋白之间交联。5、对纤维蛋白原的作用较凝血酶更专一，其活性不被抗 凝血酶III、肝素、水蛭素、大豆胰蛋白酶等抑制剂所抑制。6、类凝血酶对热稳定，即使在低浓 度时对热也稳定。7、类凝血酶形成的凝块不会引起收缩。纤维蛋白止血胶，它的作用机制是效仿血液凝固的最后阶段，使纤维蛋白原在凝 血酶和钙离子的作用下，转变为纤维蛋白网，再在第X III因子的作用下，变为稳定的纤维蛋 白网，从而发挥其止血功效。1909年Bergel首次报道了纤维蛋白粉的止血功能。现今生产的生物胶都是由动物体内提取，含A、B两种试剂。试剂A包括生物胶主体及主体溶解液两 部分，主要含高浓度的纤维蛋白原、凝血因子XIII;试剂B则包括催化剂及催化剂溶解液，主 要含凝血酶原(或直接用凝血酶)和氯化钙。当B试剂的溶解液和催化Ca2+剂混合后，便 将凝血酶原激活转化为凝血酶。凝血酶能水解纤维蛋白原，使之转化为纤维蛋白单体。单 体由于负电荷减少，自发聚合成不稳定的可溶性纤维蛋白多聚体。同时，在Ca2+存在的条件 下，凝血酶能激活因子XIII。因子XIII能催化某些肽链间的残基共价结合，最后形成稳定的 不溶性纤维蛋白多聚体，起到止血、封闭、粘合作用。目前，上市的品种主要有奥地利IMMUNO公司生产的TISSEEL纤维蛋白封闭剂。其产品含四个组分1)冻干纤维蛋白原，75-115mg/ml，并含有XIII因子，纤维结合蛋白等；2) 纤维蛋白原溶解液，含抑肽酶3000KIU/ml ；3)冻干凝血酶，500IU/ml ；4)凝血酶溶解液，含 氯化钙40mmol。四个组分分别用西林瓶密封包装，并配有一种双联注射器。使用前，分别 用两个注射器抽取两种溶解液，溶解相应冻干组分，再分别将两种溶解后溶液用两只注射 器抽出，并将两只注射器通过一个三通组装成双联注射器；使用时，将两种溶液同时等量 混合喷涂到创面上，起到止血封闭创面的作用。另一种市售的纤维蛋白封闭剂是由奥地利 NYC0MED医药公司生产的商品名为“特可考”的纤维蛋白封闭剂，其有欧洲专利EP0059265。 该纤维蛋白封闭剂的各组分粘附在胶原海绵上。使用时直接贴创面即可。纤维蛋白原胶已广泛地运用于外科手术，迄今还未发现明显的毒性和不良反应。 但有病人采用纤维蛋白原胶后产生自身抗凝血酶抗体，引起严重的出血。人们已经了解牛 凝血酶可能携带牛海绵状组织脑炎病原体以及其它使哺乳动物致病的病毒，而且牛凝血酶 是一种强抗原，使用牛凝血酶后会在人体引起各种免疫反应。牛凝血酶引发交叉免疫反应 所产生的抗体，可能会因其削弱抗凝血酶III (AT-III)的正常抑制作用而导致血栓形成。 目前市场上，牛凝血酶都混有牛凝血因子V，进入人体后可发生交叉免疫反应，所产生的免 疫复合物经血循环被清除，由此可导致人凝血因子V的缺乏，并可能引起严重出血倾向。 Tisseel, BeriplastP等几家公司使用人凝血酶制剂，用人凝血酶替代牛凝血酶，但人类携 带的各种病毒，例如肝炎病毒将存在潜在的传播危险。有人使用猪凝血酶，但一样存在携带 人畜共患病毒等可能。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术人研究开发了一种新型的止血组合物。该组合 物至少包括任何来源获得的纤维蛋白原或纤维蛋白、以及任何来源的类凝血酶。由于类凝血酶形成的凝块不会引起收缩，而且类凝血酶不会引发交叉免疫反应， 因而本专利技术的止血组合物能够克服现有包含凝血酶或凝血酶原的止血产品所存在的诸多 缺点。本专利技术人经过大量的研究工作，确定了本专利技术的止血组合物中类凝血酶与纤维蛋 白原(或纤维蛋白)的适当的比例范围。即，类凝血酶与纤维蛋白原(或纤维蛋白)的比 例范围应为0. 01 100IU Imgo当低于0. OlIU Img的比例时，难以形成凝胶；而高于100IU Img时，成本太高，会造成浪费。上述比例优选为0. 1 IOIU lmg，在这个比例范围，形成凝胶的时间适宜，且所形成的凝胶的弹性和粘合力较好。在本专利技术的止血组合物中，纤维蛋白原(或纤维蛋白)和类凝血酶可以分别为 溶液形式或者固体形式。其中，当为液体形式时，纤维蛋白原或纤维蛋白的浓度为10 120mg/ml。当低于10mg/ml时，形成的凝胶含水量高、弹性小、易破裂，而浓度高于120mg/ ml很难达到。优选为40 100mg/ml，在此范围形成的凝胶弹性和粘合力好。类凝血酶的 浓度为1 5000国际单位(IU)/ml。低于lIU/ml形成凝胶的时间过长，而高于5000IU/ml 形成凝胶时，局部成胶过快，无法均勻成胶。优选50 1000IU/ml，形成凝胶的时间适宜。 纤维蛋白原或纤维蛋白在制成冻干品之前的浓度一般是40 100mg/ml，类凝血酶的浓度 为 50 500IU/ml。纤维蛋白原在和本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种止血组合物，包括纤维蛋白原或纤维蛋白、以及类凝血酶，其中，类凝血酶与纤维蛋白原或纤维蛋白之比为０．０１～１００ＩＵ∶１ｍｇ。

【技术特征摘要】
一种止血组合物，包括纤维蛋白原或纤维蛋白、以及类凝血酶，其中，类凝血酶与纤维蛋白原或纤维蛋白之比为0.01～100IU∶1mg。2.权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述类凝血酶与纤维蛋白原或纤维蛋 白之比为0. 1 IOIU Imgo3.权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述纤维蛋白原或纤维蛋白为溶液形 式时，浓度为10 120mg/ml。4.权利要求3所述的止血组合物，其特征在于，所述纤维蛋白原或纤维蛋白的浓度为 40 lOOmg/ml。5.权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述纤维蛋白原来源于人血、牛血、猪 血、以及马血的一种或多种。6.权利要求1所述的止血组合物，其特征在于，所述纤维蛋白为选自血纤维蛋白I、des BB血纤维蛋白、以及血纤维蛋白II的一种或多种。7.权利要求1所述的止血组合物，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：马骉，孔双泉，宋梦薇，孙爽，
申请(专利权)人：北京赛生药业有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]