协同组合物及其应用制造技术

本发明专利技术提供用于治疗赘瘤或癌生长及治疗此类患者以使适血功能恢复或提高的一种协同组合物和方法。本发明专利技术包括分开地或组合地施用一种细胞毒性Ｔ－淋巴细胞诱导组合物和至少一种能中和或减量调节肿瘤分泌的免疫抑制因子的活性的制剂的组合。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及此项专利技术涉及用于治疗人和动物赘瘤或癌生长及治疗此类患者以使造血功能恢复或提高的一种组合物和方法。该专利技术所述组合物包括一种细胞毒性T淋巴细胞诱导组合物和一种能中和或减量调节肿瘤分泌免疫抑制因子活性的制剂的组合。2．相关技术描述细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)被认为是对多种病毒性感染和赘瘤或癌生长反应的主要宿主机制(Greenberg等，Adv．Immunol．，49281-355(1991)；Baxevanis等，Crit．Rev．Oncol．-Hematol．，16157-79(1994)；Ward等，Biological Approaches to CancerTreatment，Biomodulation，pp．72-97，edited by M．S．Mitchel，New YorkMcGraw Hill，Inc．(1993))。这些细胞通过识别与被感染或被转化细胞上多种分子(命名为I类MHC(大组织相容性复合物)分子)相结合的抗原片段来消除这些被感染或转化的细胞(Baxevanis等，Crit．Rev．Oncol．-Hematol．，16157-79(1994)；Matsumura等，Science，257927-34(1992)；Long等，Immunol．Today，10232-34(1989))。在亚单位疫苗中使用可溶形式的肿瘤相关抗原(TAA)来刺激肿瘤特异性T细胞免疫是开发安全并且有效的癌免疫疗法的一种理想策略。使用完整蛋白的优点在于，在特定抗原呈递细胞(APC)内的抗原加工完成之后，即包含了肽潜在抗原决定部位的所有信息。但是由完整可溶性抗原所产生的免疫通常并不激活CTLs。因此，为了刺激CTL对特定蛋白抗原产生反应，人们尝试了多种旨在改善细胞内抗原向APC传送的方法。其中包括活病毒载体(Moss，B．，Science，2521662-67(1991)；Takahashi等，PNAS USA，853105-09(1988))和细菌载体(Aldovini等，Nature(London)，351479-482(1991)；Sadoff等，Science，240336-38(1988))、非复制型质粒DNA接种(Ulmer等，Science，2591745-49(1993))、将蛋白和肽结合到亲脂性复合物(Deres等，Nature(London)，342561-64(1989))或ISCOM(Takahashi等，Nature(London)，344873-75(1990))。使用病毒载体或DNA注射方法产生疫苗所担心的主要是可能的DNA整合到与具备转化潜力的癌基因显著相关的宿主细胞基因组中以及诱导体内产生抗载体反应相关的安全性。此外，对免疫妥协的个体而言，使用与具有诱导免疫反应最低毒性的适当的非感染性运载系统结合的纯化抗原是安全的。Raychaudhuri等人发现一种通过它可在人类及驯养动物或对农业有重要作用的牲畜体内诱导CTL应答并且在非感染性运载系统中包括完整的可溶性蛋白的安全而又有益的组合物(美国专利号5，585，103)，其全文在此引作参考CTL诱导组合物涉及使用一种对动物几乎无毒或无毒，且不含其存在可降低预期应答的免疫刺激性肽(如胞壁酰二肽)的抗原制剂。更明确而言，CTL诱导组合物(PROVAXTM)包含可使CTL产生预期应答的抗原以及一种无毒抗原制剂，该抗原制剂包括、由或基本由一种稳定化去污剂、一种微胶粒形成剂和一种可生物降解及生物相容性油脂组成。但文献显示，肿瘤可通过分泌因子或细胞因子而逃避免疫监视，这些因子或细胞因子对局部或全身存在的活化免疫细胞和前体免疫细胞两者的功能均具有免疫抑制作用。因此，仅接受目的在于增强肿瘤免疫力的治疗疫苗的癌症患者或许将不能从这种疫苗中充分受益。此外，由于维持健康骨髓所必需的干细胞和／或祖细胞的抑制，使癌症患者的造血活性受到抑制，处于癌症晚期的患者尤其如此。这种抑制由多种因素共同造成，其中包括用于癌症治疗的放疗、化疗以及可能由癌症治疗而被增量调节的诸如转化生长因子-β(TGFβ)的免疫抑制因子，该因子属于宿主正常肿瘤及生长肿瘤均分泌的稳定多肽生长因子家族。因此，鉴于此前已知的癌症疫苗以及肿瘤治疗方法所具有的上述缺陷，该领域显然有必要寻找更有效的免疫治疗方法和组合物。专利技术概述该项申请的专利技术人意外地发现，当CTL诱导疫苗与一种或多种能够中和、拮抗、减量调节或阻断TGFβ和IL-10等肿瘤分泌免疫抑制因子的制剂共同使用时，可通过诱导CTL反应使旨在增强肿瘤免疫力的该疫苗的治疗效果提高。因此，该专利技术的目的之一是提供一种组合物，该组合物包含与一种或多种能够中和、阻断、拮抗或减量调节肿瘤分泌因子活性的制剂共同使用时诱导CTL的任何佐剂制剂。特别优选的CTL诱导佐剂包括授权于Raychaudhuri等人美国专利号5，585，103所公开的TL诱导佐剂，该佐剂包括一种对其可诱导抗原特异性CTL反应的抗原激动剂及一种微流体化抗原制剂，所述抗原制剂包括(ⅰ)一种稳定化去污剂，(ⅱ)一种微胶粒形成剂，以及(ⅲ)一种可生物降解及生物相容性油脂，进一步而言，其中该抗原制剂不含免疫刺激性肽成分，并且配制成稳定的水包油型乳剂。能够中和、阻断、拮抗或减量调节肿瘤分泌免疫抑制因子的制剂优选包括抗-TGFβ抗体、转化生长因子-β受体融合蛋白(TGFβR-融合蛋白)、TGFβ拮抗剂如凝血栓蛋白肽、TGFβ结合蛋白和TGFβR阻断抗体。该专利技术的另一目的是提供一种包括诱导CTL反应在内的治疗方法，其中的改进包括使用一种诱导CTL反应的佐剂及一种免疫抑制因子拮抗剂，优选TGFβ拮抗剂，所述佐剂与拮抗剂可依次或按任意顺序同时给药。该专利技术的又一目的是提供一种赘瘤或癌生长的治疗方法用于需要该种治疗的患者。该专利技术的另一目的是提供一种恢复或提高患者血细胞生成的方法。由于该专利技术具有上述及其它下文要表明的目的、优点和特征，参考下列专利技术优选实施方案的详细描述及附加的权利要求可更明确地了解本专利技术的本质。附图简述附图说明图1显示卵清蛋白／PROVAXTM和／或抗-TGFβ抗体对已确定的EG7肿瘤治疗的抗肿瘤活性。图2A及2B显示E7／PROVAXTM和／或抗-TGFβ抗体对HOPE2细胞治疗的抗肿瘤活性。图3A及3B显示在无血清培养液(CHO-S SFM II，GIBCO，目录号#91-0456)中37℃体外连续培养2天(EL4，EG7细胞)或5天(3T3，KB及A431细胞)后的不同细胞系所分泌的活化形式或潜伏形式TGFβ-1的评价水平。图4显示小鼠抗-TGF-β1、β2、β3单克隆抗体(Genzyme公司目录号#80-1835-03)与条件培养液中取自人A431细胞或鼠BALB／c3t3细胞的人或小鼠TGFβ的结合。专利技术详述如上所述，该申请的专利技术人意外发现，当与一种或多种能够中和或减量调节肿瘤分泌免疫抑制因子的制剂连同使用时，诸如CTL诱导佐剂等旨在增强肿瘤免疫力的疫苗的治疗效果被提高。专利技术人惊奇地发现，这种结合导致协同增强细胞毒性T淋巴细胞的反应，从而导致提高的对诸如肿瘤的表达抗原的靶细胞的治疗性反应。此外，该专利技术人发现，将一种或多种中和或减量调节肿瘤分泌免疫抑制因子的制剂与疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，包含：（ａ）一种合剂，包含癌、病毒或寄生虫抗原及一种微流体化抗原制剂，所述抗原由所述癌、病毒或寄生虫感染的细胞表达，所述抗原制剂包含：（ｉ）一种稳定化去污剂，（ｉｉ）一种微胶粒形成剂，以及（ｉｉｉ）一种可生物降解 和生物相容性油脂，该抗原制剂被配制成稳定的水包油乳剂；以及（ｂ）至少一种能中和或减量调节免疫抑制因子活性的制剂。

【技术特征摘要】
US 1997-9-18 08/933,3591．一种组合物，包含(a)一种合剂，包含癌、病毒或寄生虫抗原及一种微流体化抗原制剂，所述抗原由所述癌、病毒或寄生虫感染的细胞表达，所述抗原制剂包含(ⅰ)一种稳定化去污剂，(ⅱ)一种微胶粒形成剂，以及(ⅲ)一种可生物降解和生物相容性油脂，该抗原制剂被配制成稳定的水包油乳剂；以及(b)至少一种能中和或减量调节免疫抑制因子活性的制剂。2．权利要求1的组合物，其中所述抗原制剂基本由所述的稳定化去污剂、微胶粒形成剂，以及生物相容性油脂组成。3．权利要求1的组合物，其中去污剂选自吐温80、吐温20、吐温40、吐温60、Zwittergent 3-12、TEEPOL HB7以及SPAN 85。4．权利要求1的组合物，其中所述去污剂提供的量的范围大约为0．05-0．5％。5．权利要求4的组合物，其中去污剂的量约为0．2％。6．权利要求1的组合物，其中所述微胶粒形成剂的亲水亲油平衡为0-2。7．权利要求6的组合物，其中所述微胶粒形成剂的量为1．25-5％范围。8．权利要求1的组合物，其中所述微胶粒形成剂选自poloxamer401、PLURONIC L62Lf、PLURONIC L101、PLURONIC L64、PEG1000、TETRONIC 1501、TETRONIC 150R1、TETRONIC 701、TETRONIC 901、TETRONIC 1301以及TETRONIC 130R1。9．权利要求1的组合物，其中所述微胶粒形成剂的量为0．5-10％范围。10．权利要求1的组合物，其中油脂具有低于65℃的熔化温度。11．权利要求1的组合物，其中油脂选自角鲨烷、二十碳烷、四十四烷、姥鲛烷，以及植物油。12．权利要求1的组合物，其中油脂的量为1-10％范围。13．权利要求12的组合物，其中油脂的量为2．5-5％范围。14．权利要求1的组合物，其中去污剂为聚山梨酯80而微胶粒形成剂为poloxamer 401。15．权利要求14的组合物，其中油脂为角鲨烷。16．权利要求1的组合物，其中去污剂选自吐温20、吐温40，以及吐温80，油脂选自角鲨烷、二十碳烷、橄榄油以及姥鲛烷，微胶粒形成剂选自poloxamer 401，以及PLURONIC L62LF。17．权利要求1的组合物，其中所述免疫抑制因子为TGFβ。18．权利要求1的组合物，其中所述的能够中和或减量调节肿瘤或宿主分泌的免疫抑制因子活性的制剂为抗-TGFβ抗体、TGFβR-融合蛋白、TGFβ类似物、TGFβ结合蛋白或TGFβR阻断抗体。19．权利要求1的组合物，其中所述的能够中和或减量调节或抑制肿瘤和宿主分泌的免疫抑制因子活化的制剂为凝血栓蛋白肽或TGFβR Fc-融合蛋白。20．权利要求1的组合物，其中所述抗原制剂包括角鲨烷、吐温80和poloxamer 401。21．权利要求1的组合物，其中所述抗原选自gp100、MART-1／Melan A、gp75、酪氨酸酶、黑色素瘤蛋白多糖、MAGE、BAGE、GAGE、RAGE、N-乙酰葡糖胺转移酶-V、突变β-catenin、突变MUM-1、突变细胞周期蛋白依赖性激酶-4、p21 ras、BCR-abl、p53、p185HER2／neu、突变表皮生长因子受体、癌胚抗原、癌相关性突变粘蛋白、EBNA基因产物、人乳头状瘤病毒E7蛋白、人乳头状瘤病毒E6蛋白、前列腺特异性抗原、前列腺特异性膜抗原、PCTA-1、免疫球蛋白独特型以及T细胞受体独特型。22．权利要求1的组合物，其中所述组合物用于癌、病毒或寄生虫性病症的治疗。23．一种治疗方法，包括细胞毒性T淋巴细胞反应的诱导，其中的改进包括(ⅰ)施用诱导细胞毒性T淋巴细胞反应的佐剂，以及(ⅱ)施用免疫抑制因子拮抗剂；其中佐剂与拮抗剂可按任意顺序依次或同时给药。24．权利要求23...

【专利技术属性】
技术研发人员：N汉纳，GR布拉斯劳斯基，K哈里哈兰，
申请(专利权)人：生物基因IDEC公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]