脂蛋白氧化的抑制剂制造技术

胆固醇降低剂的羟化衍生物抑制脂蛋白氧化，因此对防止动脉粥样化形成和由此产生的血管疾病（包括心脏病发作）的发展有用。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术的领域本专利技术涉及抑制脂蛋白氧化从而减缓或阻止动脉粥样化形成的方法。该方法需要使用已知胆固醇降低剂的羟化衍生物。本专利技术的背景动脉粥样硬化心血管疾病和相关疾病以及高脂血症相关的疾病事件是残疾和死亡的主要原因。现在已经公认，在健康哺乳动物和已患有高脂血症的个体中降低某些形式的胆固醇，能引人注目地减少心脏病发作、血管疾病和动脉粥样硬化相关的其它疾病。高脂血症是一种以血清脂质例如胆固醇、甘油三酯和磷脂异常增为特征的疾病。这些脂质不能在血浆中以溶液自由循环，而与蛋白质结合，作为称作脂蛋白的大分子复合物进行运输。脂蛋白按其密度大小分为五类乳糜微粒，极低密度脂蛋白(VLDL)，低密度脂蛋白(LDL)，中等密度脂蛋白(IDL)，和高密度脂蛋白(HDL)。高脂血症的一种形式是高胆固醇血症，其特征是存在LDL胆固醇水平升高。高胆固醇血症的初期治疗经常是变更食物为低脂肪和低胆固醇的食物，结合适当的体育运动，之后，当仅通过食物和运动没有达到降低LDL的目标时采用药物治疗。通常认为LDL是“坏”胆固醇，而HDL是“好”胆固醇。尽管人们希望降低升高了的LDL胆固醇水平，但也希望增加HDL胆固醇水平。已经发现，HDL胆固醇水平增加通常和冠心病(CHD)危险降低相关联。虽然LDL胆固醇被认为是坏的，并且大多数胆固醇降低剂通过降低LDL形式的血浆浓度起作用，但在动脉粥样化形成的早期还有另一个关键过程，那就是LDL的氧化。VLDL和HDL的氧化也会发生，这也促使动脉粥样化形成。氧化会导致细胞内钙增加、能量产生降低、细胞因子激活、膜损伤，所有这些都导致细胞凋亡、坏死和最终细胞死亡。典型的氧化反应起始于一个活性自由基从LDL颗粒中的多不饱和脂肪酸摄取一个氢原子。由此形成脂质过氧化氢和烷氧基自由基，它们反过来又能启动邻近的脂肪酸氧化，导致脂质过氧化的蔓延。这些氧化形式的脂蛋白比天然脂蛋白更迅速地被巨噬细胞吸收，这样就导致了巨噬细胞胆固醇积累，随后引起泡沫细胞形成和组织巨噬细胞和内皮细胞运动性的抑制。这一系列事件导致血管机能障碍和动脉粥样硬化损伤的形成和活化。现在我们发现，普遍使用的胆固醇降低剂的某些羟基取代衍生物是脂蛋白的有效抗氧化剂。此外，这些化合物有助于自由基的清除和金属离子的螯合，而自由基和金属离子也是脂蛋白氧化的机制。本专利技术概述本专利技术提供了一种在哺乳动物中抑制脂蛋白氧化的方法，其包括施用抗氧化有效剂量的羟化胆固醇降低剂。本专利技术还提供了一种在哺乳动物中清除自由基的方法，其包括施用自由基清除剂量的羟化胆固醇降低剂。本专利技术还提供了一种抑制脂蛋白螯合金属离子的方法，其包括施用有效剂量的羟化胆固醇降低剂。在一个优选实施方案中，所述方法通过采用抑制素、特别是atorvastatin的羟化形式而实现，这些化合物在美国专利5，385，929中有描述，所述专利引入本文作为参考。在另一个优选实施方案中，所述方法通过采用羟化吉非贝齐、如有如下结构式的化合物而实现 在另一个实例中，采用羟化氟伐他汀，如有如下结构式的化合物 在另一个实施方案中，采用羟化cerivastatin，特别是有如下结构式的化合物 在另一个优选实施方案中，使用洛伐他汀的羟化衍生物，如有如下结构式的化合物 附图的简要说明附图说明图1．Atorvastatin及其羟化代谢物的结构式。图2．吉非贝齐及其羟化代谢物的结构式。图3．Atorvastatin及其羟化代谢物对铜离子氧化系统(A)、AAPH氧化系统(B)和J-774 A．1巨噬细胞氧化系统(C)中的LDL氧化的影响。在所有三个氧化系统中LDL(100μg蛋白／mL)与递增浓度的所述药物或其代谢物在37℃孵育4小时(系统A和B)，或与所述细胞孵育20小时(C)。孵育结束时，用TBARS分析测定LDL氧化。巨噬细胞介导的LDL氧化通过有细胞时得到的值减去无细胞时得到的值来计算。结果以平均值±标准差(SD)(n=3)形式给出。图4．Atorvastatin及其羟化代谢物对铜离子氧化系统(A)和AAPH氧化系统(B)中的VLDL氧化的影响。VLDL(100μg蛋白／mL)和10μM的atorvastatin或其代谢物在37℃孵育4小时。孵育结束时，用TBARS分析测定VLDL氧化。结果以平均值±SD(n=3)形式给出。图5．Atorvastatin及其羟化代谢物的自由基清除活性(A)和铜离子螯合能力(B)。A．atorvastatin或其羟化代谢物(20μM)和1mM DPPH孵育并进行517nm吸光度的动力学测定。图中显示了三个有类似型式之不同研究的一个典型实验。采用维生素E(20μM)作为自由基清除剂的阳性对照。B．LDL(100μg蛋白／mL)和atorvastatin或其代谢物(10μM)以及递增浓度的CuSO4在37℃孵育4小时，之后用TBARS分析测定脂蛋白的氧化。结果以平均值±SD(n=3)形式给出。图6．吉非贝齐和吉非贝齐代谢物的浓度对铜离子氧化系统(A)、AAPH氧化系统(B)和J-774 A．1巨噬细胞氧化系统(C)中的LDL氧化的影响。在所有三个氧化系统中LDL(100μg蛋白／mL)与递增浓度的所述药物或其代谢物在37℃孵育4小时(系统A和B)，或与所述细胞孵育20小时(C)。孵育结束时，用TBARS分析测定LDL氧化。巨噬细胞介导的LDL氧化通过有细胞时得到的值减去无细胞时得到的值来计算。结果以平均值±SD(n=3)形式给出。图7．吉非贝齐及其代谢物对铜离子氧化系统(A)和AAPH氧化系统(B)中VLDL氧化的影响。VLDL(100μg蛋白／mL)和4μM的吉非贝齐或其代谢物在37℃孵育4小时。孵育结束时，用TBARS分析测定VLDL氧化。结果以平均值±SD(n=3)形式给出。图8．VLDL脂蛋白电泳。在有或无atorvastatin、吉非贝齐或它们的代谢物时铜离子(10μM CuSO4)诱导的脂蛋白氧化之后进行。图9．吉非贝齐及其代谢物的自由基清除活性(A)和铜离子螯合能力(B)。A．吉非贝齐或其代谢物(20μM)和1mM DPPH孵育并进行517nm吸光度的动力学测定。图中显示了三个有类似型式之不同研究的一个典型实验。采用类似浓度的维生素E(Vit E)作为对照自由基清除剂。B．LDL(100μg蛋白／mL)和吉非贝齐或其代谢物(3μM)以及递增浓度的CuSO4在37℃孵育4小时，之后用TBARS分析测定脂蛋白的氧化。结果以平均值±SD(n=3)形式给出。图10．吉非贝齐代谢物I和atorvastatin邻羟基代谢物对LDL氧化的联合影响。LDL(100μg蛋白／mL)单独地(对照)，或在吉非贝齐代谢物I(3μM)或atorvastatin邻羟基代谢物(4μM)单独或联合存在时，与10μM CuSO4在37℃孵育4小时。之后用TBARS分析测定脂蛋白的氧化。*p＜0．01(相对对照)和p＜0．01(相对代谢物I)，#P＜0．01(相对邻羟基代谢物)。结果以平均值±SD(n=3)形式给出。图11．在富含多不饱和脂肪酸的膜制品中atorvastatin对羟基代谢物的剂量依赖性抗氧化作用。图12．Atorvastatin对羟基代谢物、维生素E和普罗布考的相对抗氧化能力比较。图13．Atorvastat本文档来自技高网...

【技术保护点】
在哺乳动物中抑制脂蛋白氧化的方法，其包括施用一种抗氧化有效剂量的羟化胆固醇降低剂。

【技术特征摘要】
US 1997-11-25 60/066,8881．在哺乳动物中抑制脂蛋白氧化的方法，其包括施用一种抗氧化有效剂量的羟化胆固醇降低剂。2．权利要求1的方法，其使用羟化吉非贝齐、羟化atorvastatin或羟化氟伐他汀。3．权利要求2的方法，其使用邻位羟化或对位羟化的atorvastatin。4．在哺乳动物中清除自由基的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：M阿威拉姆，CL比斯加尔，RS牛顿，M罗斯布拉特，
申请(专利权)人：沃尼尔朗伯公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]