羟烷基淀粉-活性物质-偶联物制造技术

本发明专利技术涉及一种含由羟烷基淀粉（ＨＡＳ）和活性物质组成的偶联物的化合物，其中羟烷基淀粉直接或经由连接基团共价连接在活性物质上。本发明专利技术还涉及制备共价的ＨＡＳ－活性物质－偶联物的方法，其中ＨＡＳ和活性物质在反应介质中相互反应，其特征在于，该反应介质是水或含水量至少是１０重量％的水和有机溶剂的混合物。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化合物，它们含由羟烷基淀粉(HAS)和活化剂组成的偶联物(Konjugate)，其中该羟烷基淀粉是直接或通过连接基团共价结合在活性物质上。本专利技术还涉及制备共价HAS-活性物质偶联物的方法，在该方法中使HAS与活性物质在反应介质中相互反应，其特征在于，该反应介质是水或含至少10重量％水的水和有机溶剂的混合物。本专利技术还涉及该偶联物的医学应用。
技术介绍
许多药物-活性物质的临床应用均受一系列问题的有害影响(参见Delgado等人，Critical Review in Therapeutic Drug CarrierSystem，第9卷(3，4)，(1992)，249-304页)。例如，肠胃外给药天然的蛋白质会通过网状内皮系统、肝、肾和脾的排泄而失去作用。这种排泄依碳水化合物链的电荷、适于该蛋白质的细胞受体的存在和分子的形式和大小而发生。例如肾小球过滤的排出限值约为67kD。此外，蛋白水解降解的结果是可观察到的生物活性的快速损失。细菌表达的蛋白质以及其它的重组蛋白质具有高的免疫原性，并激发危及生命的过敏性。当然，相应的反应妨碍这些产物的医学应用。由此，在现有技术中，自70年代末以来系统研究了通过化学改性、特别是在大分子聚合物上的聚合或偶联以改进外源蛋白质的特性。大量工作集中于制备由蛋白质或其它活性物质和聚乙二醇的偶联物(参看US4179337)。由该偶联反应所期待的优点包括蛋白质在体内的半衰期的改进、活性物质的毒性下降、稳定性改进及溶解度的改进(Abuchowski和Davis，作为药物的酶(Enzymes as drugs)，Holcenberg和Rubberts，Herausgeber，367-383页，John Wiley &Sons N.Y.(1981))。但是活性物质的偶联方法表明是有问题的。因为蛋白质的活性基通过在PEG上的偶联会失活，或者该反应的反应产物的收率不合适。为了实现活性物质的活性不受损的特殊结合，要将活性基引入PEG中或引入活性物质或这些化合物以连接基团互相相结合。对此，通常是PEG提供活性基，然后它与可偶联的蛋白质的基团经共价相结合。例如，曾描述过在其偶联到PEG上后抗体和其断片的结合活性的损失(Kitamura等，Cancer Res.，第51卷(1991)，4310-4315页；Pedley等，Br.J.Cancer，第79卷(1994)，1126-1130页)。为解决这个问题，Chapman等(Nature Biotech.，第17卷(1999)，780-783页)建议，将PEG结合在抗体的某些结合位置上。此外，在WO95/13090中描述过偶合组分(partner)的活性损失。为解决这一问题，曾建议活化具有反应性基团的PEG，并且在有表面活性物质存在下通过该反应性基团使PEG结合在α-干扰素上。优选的反应性基团是N-琥珀酰亚胺-碳酸酯，在所述条件下，它与细胞溶素的ε-氨基应形成氨酯键。WO96/41813也公开了一种制备聚合物-多肽-偶联物的方法，其中，该聚合物(特别是PEG)在特定位置被衍生化，接着结合到多肽上。优选是将氨基-氧-乙酰-基引入PEG中，接着将该化合物结合到多肽上，特别是IL-8、hG-CSF和IL-1上。在文献上可找到大量相应偶联物的实例；参看US4179337中的PEG-胰岛素-偶联物；US44129 89中的牛-PEG-血红蛋白-偶联物；在Veronese等人的“应用生物化学和生物技术(Applied Biochem.Bioteeh.)”，第11卷，141-152(1995)中的PEG-核糖核酸酶-偶联物和PEG-超氧化物歧化酶-偶联物；US-4766106中的PEG-IL-2-偶联物或PEG-IFN-β-偶联物；WO90/15628中的PEG-多粘菌素-偶联物；和WO90/07939中的PEG-IL-2-偶联物。一些偶联物现已用于临床应用中。例如天冬酰胺酶的特性可通过与PEG的共轭形成而得到改进，并且PEG-天冬酰胺酶-偶联物可以商标Oncaspar从市售得到而用于治疗癌。最近，美国食品和药物管理局批准了一种在PEG上偶联的G-CSF(Pegfilgastim)。在临床研究的各个阶段还存在有大量的其它pegylierter产物，其中例如PEG-CDP 870、PEG-屈大麻酚等(参看www.enzon.com或www.inhale.com中的PEG-渠道)。不仅蛋白质，而且其它化合物都可按这种方法偶联到PEG和其它聚合物上。例如WO97/33552和WO97/38727中公开了紫杉醇在PEG上的偶联，以及该偶联物在治疗肿瘤上的应用。PEG-喜树碱-偶联物在治疗肿瘤上的应用已由Euzon公司研究，并处于第I期临床阶段。抗生素也已偶联到PEG上。Dowling和Russell描述过关于土霉素-PEG-偶联物的药物动力学的实例(J.Vet.Pharmacol.Ther，第23卷(2000)，107-110)。为了得到新的功能，在现有技术中也通过另外的方法来衍生化抗生素。例如制备了长效-青霉素，它是普鲁卡因-青霉素衍生物，即青霉素与普鲁卡因碱的盐。这种衍生物具有长的作用时间，并用来治疗梅毒。同样，还描述过与多于两种化合物的偶联反应。WO93/23062公开了例如由抗B-细胞-淋巴瘤的抗体、活化的PEG和毒素组成的偶联产物的制备。但是PEG-活性物质-偶联物不具有曾描述过其在体内分解途径的天然结构。为此，除PEG-偶联物外，还制备了其它偶联物和蛋白质-聚合物来解决上述问题。由此有大量方法用于交联各种蛋白质和用于蛋白质在大分子上的结合(参看Wong，S.S的综述“Chemistry ofprotein conjugation and cross linking”，CRCS，Inc.(1993))。羟乙基淀粉(HES)作为天然存在的支链淀粉的衍生物在体内被α-淀粉酶分解。现有技术已描述HES-蛋白质-偶联物的制备(参看DE2616086和DE2646854中的HES-血红蛋白-偶联物)。血红蛋白是一种蛋白质，它作为血液代用剂和氧输送剂(所谓的“血红蛋白-基-氧载体”，HBOC)在临床上有很大意义。但是尽管对这类产品的需要早就已知(参看Rabiner，J.Exp.Med.，126，(1967)1127)，但至今还没有已知的HBOC-产品达到批准作为药物使用的状态。该天然的血红蛋白由两条α-肽链和β-肽链组成，它们作为辅基总是结合血红素。但分离的血红蛋白分子非常不稳定，并在较稳定的α，β-二聚物(MG 32kDa)中快速分解。该分离的血红蛋白的生物半衰期在血液循环中约为1小时，因为该二聚物经肾快速排泄。这时二聚物产生肾中毒的副作用(参看Bann和Jandl，J.Exp.Med.129(1967)925-934)。因此，对衍生的血红蛋白分子的研究工作主要是分子内交联血红蛋白，为形成聚合的HBOC-形式，进行分子内偶联和/或在聚合物上偶联。已知的血红蛋白-偶联物描述于Xue和Wong(Meth.In Enzymol，231(1994)，308-322页)和DE2616086和DE2646854中。后者公开的方法是将血红蛋白结合在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＨＡＳ－活性物质－偶联物，它是由制备共价的ＨＡＳ－活性物质－偶联物的方法得到的，在该方法中ＨＡＳ和活性物质在反应介质中相互反应，其特征在于，反应介质是水或含水量至少为１０重量％的水和有机溶剂的混合物。

【技术特征摘要】
DE 2001-3-16 10112825.81.一种HAS-活性物质-偶联物，它是由制备共价的HAS-活性物质-偶联物的方法得到的，在该方法中HAS和活性物质在反应介质中相互反应，其特征在于，反应介质是水或含水量至少为10重量％的水和有机溶剂的混合物。2.一种含由HAS和活性物质组成的偶联物的化合物，其中HAS直接或通过连接基团共价连接到活性物质上。3.权利要求1或2的化合物，其中活性物质是维生素、疫苗、毒素、抗生素、抗心律失常药、抑食欲药、麻醉药、镇痛药、抗风湿药、抗变应药、平喘药、抗抑郁药、抗糖尿病药、抗组胺药、抗高血压药、或抗肿瘤剂。4.权利要求1-3任一项的化合物，其中活性物质是激素、甾族化合物、脂质、蛋白质、寡肽或多肽或核酸，特别是D-核酸或L-核酸，如D-DNA、L-DNA、D-RNA或L-RNA。5.前述权利要求任一项的化合物，其中活性物质是酶、酶抑制剂、受体、受体-断片、胰岛素、因子VIII、因子IX、细胞因子、干扰素、白细胞介素、生长因子、肽-抗生素、病毒外被蛋白质、血红蛋白、红细胞生成素、白蛋白、hTPA、抗体、抗体断片、单链抗体或其衍生物。6.前述权利要求任一项的化合物，其中活性物质是甾类激素、由氨基酸衍生的激素或由脂肪酸衍生的激素。7.前述权利要求任一项的化合物，其中HAS连接在活性物质的ε-NH2基团、α-NH2基团、SH-基团、COOH基团或-C(NH2)2基团上。8.前述权利要求任一项的化合物，其中HAS是羟乙基淀粉，并且优选其平均分子量(重均分子量)为1-300kDa，优选5-200kDa。9.前述权利要求任一项的化合物，其中羟乙基淀粉的摩尔取代度为0.1-0.8，C2∶C6-取代的比例为2-20，均以羟乙基计。10.前述权利要求任一项的化合物，其中抗肿瘤活性物质选自烷化剂、抗代谢物、抗生素或天然物质。11.前述权利要求任一项的化合物，其中所述抗肿瘤活性物质是丝裂霉素C、环磷酰胺、博来霉素、苯丁酸氮芥、顺铂、阿糖胞苷、氟达拉滨、阿霉素、依托泊苷、5-FU、MTX、长春花碱、长春花新碱、长春地辛、羟基脲、6-MP或CCNU。12.前述权利要求任一项的化合物，其中抗肿瘤活性物质连接在羟乙基淀粉的还原性端基上。13.前述权利要求任一项的化合物，其中抗肿瘤活性物质是丝裂霉素C。14.前述权利要求任一项的化合物，其中羟乙基淀粉偶联在丝裂霉素C的甲氧基上。15.前述权利要求任一项的化合物，其中羟乙基淀粉通过连接基团偶联在丝裂霉素C的甲氧基上。16.一种药物组合物，它含有权利要求1-15任一项的化合物。17.权利要求16的药物组合物，它还含有可药用载体。18.权利要求16或17的药物组合物，它还含有细胞因子。19.权利要求16-18任一项的药物组合物，其中细胞因子是IL-2、α-干扰素或γ-干扰素。20.权利要求10-15任一项的化合物在制备用于治疗肿瘤和/或其转移的药物中的应用。21.权利要求20的应用，用于制备治疗泌尿科肿瘤和/或泌尿科肿瘤转移的药物。22.按照权利要求21的应用，用于制备用于治疗肾细胞癌或用于治疗肾细胞癌转移的药物。23.权利要求22的应用，用于制备治疗透明细胞的或嗜染性的肾细胞癌或其转移的药物。24.权利要求20的应用，其中该药物用于治疗淋巴系统疾病。25.权利要求24的应用，其中淋巴系统疾病是CLL、淋巴网状细胞瘤、NHL、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦氏病。26.权利要求25的应用，其中采用氟达拉滨作为抗肿瘤活性物质。27.权利要求20的应用，其中肿瘤是皮肤/局部原发性恶性肿瘤或其转移。28.权利要求27的应用，其中肿瘤是血液系统疾病或肿瘤学疾病，例如非小细胞和小细胞的支气管癌、乳腺癌、食管鳞状细胞癌、肾细胞癌、睾丸癌、恶性黑素瘤、ALL或CML。29.权利要求20-28任一项的应用，其中该药物还包含细胞因子。30.权利要求20-29任一项的应用，其中细胞因子是IL-2、α-干扰素或γ-干扰素。31.权利要求1-9任一项的化合物，其中该抗心律失常活性物质选自钠通道阻断剂、β-受体阻断剂、选择性复极化延长剂、钙拮抗剂和局部麻醉药。32.权利要求1-9任一项的化合物，其中抗心律失常活性物质是阿糖腺苷、奎尼丁、普鲁卡因酰胺、双异丙吡胺、利多卡因、苯妥因、美西律、西萝芙木碱、Parjmalium、普罗帕酮、阿替洛尔、普奈洛尔、胺碘酮、索他洛尔、维拉帕米、加罗帕米或地尔硫。33.权利要求1-9任一项的化合物，其中该抗心律失常活性物质连接在羟乙基淀粉的还原性端基上。34.权利要求1-9任一项的化合物，其中该抗心律失常活性物质是阿糖腺苷。35.权利要求1-9任一项的化合物，其中该抗心律失常活性物质是阿糖腺苷，它通过氨基连接在羟乙基淀粉上。36.权利要求1-9任一项的化合物，其中该抗心律失常...

【专利技术属性】
技术研发人员：K索默梅耶，W艾克纳，S弗里，C荣格海恩里奇，R沙普夫，K鲁特贝克，
申请(专利权)人：弗雷森纽斯卡比德国有限责任公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]