诱导细胞毒性免疫应答的方法和用于该方法的重组猿猴腺病毒组合物技术

本发明专利技术提供了一种诱导抗所选分子的ＣＤ８＋Ｔ细胞应答的方法，该方法是靠重组猿猴腺病毒来输送该分子。本发明专利技术还提供了诱导α干扰素和β干扰素的方法，该方法是将重组猿猴腺病毒输送给对象。本发明专利技术的方法和组合物特别适合用于预防和治疗人免疫缺陷病毒、人乳头瘤病毒感染和癌症治疗。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本项工作得到国家卫生研究院授予的P30 DK47757-08号和P01 HL 59407-02以及NIAID授予的AI 49766-01号基金的支持。美国政府享有本专利技术部分权利。
技术介绍
现已测试了人血清型5型重组腺病毒作为衍生自病毒、寄生虫或肿瘤细胞的各种抗原的疫苗载体。结果是鼓舞人心的，因为E1缺失的腺病毒重组体引发了针对转基因产物的免疫反应。人血清型5型(Ad5)腺病毒是一种遍在的感冒病毒，它感染了生命第一年内的大多数人。专利技术者已经发现，已存在的对常见人血清型的免疫力降低了基于病毒同源血清型的腺病毒重组疫苗的效力。在一些情况下，这种效力降低可通过输送更高剂量的人重组腺病毒来克服。然而，更高的剂量可能伴有其它不希望的副作用。因此，需要有一种用来诱导产生针对所选分子的免疫反应(免疫应答)的组合物，从而避免目前的输送方法所伴有的问题。专利技术概述本专利技术提供了一种方法，该方法通过靠重组猿猴腺病毒来向宿主输送分子，从而优先诱导针对异源分子的细胞毒性免疫反应。本专利技术者出人意料地发现，本专利技术所用的重组猿猴腺病毒呈递免疫原的方式与用相应的人5型病毒来输送免疫原相比，诱导出了明显更强效的CD8+T细胞应答。另外，本专利技术者发现，重组黑猩猩腺病毒诱导出的α干扰素和β干扰素水平比人腺病毒高约5倍。因此，本专利技术一方面提供了一种方法，该方法通过向对象输送携带所述分子的重组猿猴腺病毒，从而在对象中优先诱导出针对异源分子的CD8+T细胞应答。在一个理想的方案中，重组猿猴腺病毒是重组黑猩猩腺病毒株。本专利技术另一方面提供了一种在对象中诱导出α干扰素和/或β干扰素反应的方法，该方法是向该对象输送重组猿猴腺病毒。本专利技术还有一方面提供了一种用于诱导针对人免疫缺陷病毒的CD8+T细胞应答的免疫原性组合物。该组合物含有重组猿猴腺病毒，该病毒包含编码人免疫缺陷病毒-1的经修饰的gag蛋白的最佳核酸序列以及生理上相容的载体。本专利技术还有一方面提供了一种在哺乳动物体内诱导针对人免疫缺陷病毒的CD8+T细胞应答的方法，该方法是给予该哺乳动物本专利技术的免疫原性组合物。本专利技术还有一方面提供了一种在哺乳动物体内诱导针对人乳头瘤病毒的CD8+T细胞应答的方法，该方法是给予该哺乳动物重组猿猴腺病毒，该病毒编码了衍生自人乳头瘤病毒的免疫原性蛋白。本专利技术的其它优点可从下列专利技术详述中轻而易举地得知。 附图说明图1总结了黑猩猩腺病毒C68基因组的基因组织结构。在图1A中，C68黑猩猩腺病毒的基因组用顶部的方框表示。反向末端重复序列用黑色阴影表示，早期区域用灰色阴影表示。方框上方的箭头表示早期基因的表达方向。方框下的线条表示基因组被分为100个图谱单位。线条下方的箭头表示5个晚期基因区域和每个区域中编码的蛋白。方框或箭头下的数字表示每个区域的开头(启动子或起始密码子)和末端(典型的PolyA信号)。*表示E2A晚期启动子。图1B描述了PstI克隆。图1C描述了BamHI克隆。图1D描述了HindIII克隆。对于1B-1D，无阴影的区域表示片段被克隆到质粒载体中(如表1所示)，而有阴影的区域表示限制性片段没有被克隆。对于每个部分，片段名称中大写字母A表示最大的片段，片段的大小列于方框上方，片段的末端点列于方框下。图2提供了六邻体蛋白的多序列对比。用CLUSTAL X比较黑猩猩腺病毒与高度相似的人腺病毒六邻体的推导的氨基酸序列。左边的区域显示了血清型和亚型，其后是残基数。数字指相对于翻译起始点的氨基酸位置。与C68相似的氨基酸用灰色表示，相同的用黑色表示。环结构域DE1和FG1中的7个超变区沿底部标记，其对应于序列对比中的下列Ad2序列HVR1，137-188；HVR2，194-204；HVR3，222-229；HVR4，258-271；HVR5，278-294；HVR6，316-327；和HVR7，433-465。这些序列的GenBank登录号如下所示AAD03657(Ad4)，S37216(Ad16)，S39298(Ad3)，AAD03663(Ad7)和NP040525(Ad2)。专利技术详述将人重组腺病毒株5的免疫原性与黑猩猩腺病毒株68相比，两者均表达了截短的gag序列，而黑猩猩腺病毒表现更强效。用表达绿色荧光蛋白和狂犬病病毒糖蛋白的重组黑猩猩腺病毒观察到了类似的结果。重组黑猩猩腺病毒的这种较高能力很可能与较高的转基因表达没有关联，因为研究是用Ad和黑猩猩重组病毒进行的，这两者携带了类似的表达盒，其中转基因受早期巨细胞病毒启动子的控制。本文提供的数据也表明，这不可能反映嗜性的差别，因为黑猩猩和Ad5病毒均采用相同的细胞受体。然而，这些结果表明，本专利技术所用的重组黑猩猩腺病毒出入意料地具有与人腺病毒不同的佐剂活性。这一更佳的佐剂活性对于黑猩猩腺病毒诱导的转基因特异性免疫反应的程度和动力学具有深刻的影响。较佳的是，这一较高的效力允许可以使用比人腺病毒输送系统所需剂量更低的黑猩猩腺病毒。另外，本专利技术者已经发现，重组黑猩猩腺病毒诱导了比人腺病毒高约5倍水平的α干扰素和β干扰素。另外，发现重组黑猩猩腺病毒对树突细胞的能力与人5型腺病毒几乎相同。猿猴腺病毒的这种能力以及出人意料的效力在诱导针对所选抗原的细胞毒性免疫反应以及治疗需要增强α干扰素和/或β干扰素诱导的病症提供了显著的优点。I.重组猿猴腺病毒A.来源各种黑猩猩腺病毒序列的来源可从美国典型培养物保藏中心(ATCC，10801University Boulevard，Manassas，Virginia 20110-2209)和其它来源获得。理想的黑猩猩病毒株是Pan5、Pan6和Pan7。特别理想的黑猩猩腺病毒株是黑猩猩腺病毒株Bertha或C1和黑猩猩腺病毒株Pan9或CV68。为了方便起见，病毒CV68在本说明书全文中称为“C68”。该病毒最初分离自受感染的黑猩猩的粪便或肠系膜淋巴结。这些病毒株的序列以及腺病毒基因E1a，E1b，E2a，E2b，E3，E4，L1，L2，L3，L4和L5提供在美国专利6,083,716中，该专利纳入本文作为参考。另外，非黑猩猩的猿猴腺病毒序列可用来制备本专利技术的重组载体。这些非黑猩猩的腺病毒包括从狒狒腺病毒株获得的腺病毒、从猕猴分离获得的腺病毒株以及从非洲绿猴分离获得的腺病毒株。本文所述的重组黑猩猩(或其它猿猴)腺病毒可含有衍生自一种或多种猿猴腺病毒株的腺病毒序列。这些序列可得自天然来源，用重组方法、合成方法或其它基因工程方法或化学方法制得。B.重组猿猴腺病毒用于本专利技术的重组猿猴腺病毒是病毒颗粒，它由重组猿猴腺病毒序列以及其携带的异源分子和/或猿猴腺病毒衣壳蛋白组成。这些猿猴腺病毒，尤其是黑猩猩C68和C1序列，还可用来与其它猿猴以及非猿猴腺病毒一起形成杂交载体，以及形成假型重组病毒(即具有腺病毒载体的重组病毒，该载体携带了有包装在猿来源的异源衣壳蛋白中的异源分子)。1.重组猿猴腺病毒用于本专利技术的重组猿猴腺病毒至少含有用于复制和毒粒包壳所需的猿猴腺病毒顺式元件，该顺式元件侧接于异源基因。即，该载体含有腺病毒的顺式作用的5′反向末端重复序列(ITR)(其作为复制起点)，天然的5′包装/增强结构域(含有包装线性Ad基因组所需的序列和E1启动子所需的增强子元件)，异源分子和5′ITR序列。例如见本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组腺病毒在制备药物中的用途，该药物用来在对象中诱导对免疫原的Ｔ细胞应答，其特征在于，在皮下输送时，所述重组猿猴腺病毒优先诱导对免疫原的ＣＤ８＋Ｔ细胞应答，其特征还在于，所述重组腺病毒包含编码免疫原的核酸分子，该核酸分子在指 导免疫原在对象体内表达的调控序列的控制之下。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：HCJ埃特尔，JM威尔逊，
申请(专利权)人：威斯特解剖及生物研究所，宾夕法尼亚州立大学托管会，
类型：发明
国别省市：US[美国]