本发明专利技术提供一种以阿扎霉素Ｆ３、阿扎霉素Ｆ４和尼菲霉素组合物为有效成分的农用杀菌剂ＷＹＬＺ－１３４９及其制备方法和应用。该杀菌剂的制备方法包括先培养保藏编号为ＣＧＭＣＣＮｏ．１６８０的马来西亚链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ？ｍａｌａｙｓｉｅｎｓｉｓ）ＥＣＯ？００００２，再分离提取发酵培养物，用丙酮或甲醇将菌丝体破壁后与发酵上清液合并，经大孔吸附树脂吸附分离，并用丙酮或甲醇洗脱，洗脱液浓缩或进一步纯化得ＷＹＬＺ－１３４９或阿扎霉素Ｆ３、阿扎霉素Ｆ４和尼菲霉素，再添加载体或助剂后得成品。试验结果表明，该杀菌剂特别对防治水稻稻瘟病、烟草赤星病、番茄灰霉病和辣椒炭疽病有良好的效果。与现有药剂相比，具有用量少、农民使用成本低、使用范围广等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农药生产
，特别是涉及一种防治作物真菌病害的农用抗生素制备工艺和用途。
技术介绍
当前，人类对环境的要求越来越严格，而化学农药的开发难度也越来越大，成功率 越来越低。经过几十年的筛选，几乎已遍及了人们可想象的化学结构。为此，世界工业发达 国家及各大农药公司纷纷寻找新的开发点，同时也为了寻找新的先导化合物，农药的研究 开发进入了回归自然的时代，即从天然产物中寻找可开发的农药或先导化合物。由于天然 产物在分子大小与性质等方面已经过长期与生物分子相互作用的进化选择，因而具有良好 的类药性；另外，作为生态系统的一部分，天然产物具备一种特别的优势环境的适应性和 兼容性。如何从天然产物中寻找新农药化合物或先导化合物，已成为当今农药开发的主题 之一。 大量研究表明，通过生物合成的微生物次生代谢产物的化学结构极其复杂和多样 化，它们不仅以独特的作用机理作用于靶标生物，而且具有内在的生物可降解性，低残留的 明显优势，在有效防治作物病害的同时对非靶标生物的副作用较小。因此可以从微生物次 生代谢产物中开发出高效的杀菌剂，以克服由许多老品种化学合成杀菌剂引致的抗性和污 染问题。目前国内外已成功开发出各种微生物源的农用杀菌剂，例如灭瘟素S，春雷霉素，多 抗霉素，有效霉素、米多霉素、硝吡咯菌素和嗜球果伞素等，用于防治植物真菌病害。另外， 微生物源的抗真菌物质还可以作为合成高活性类似物的先导化合物，例如分别以硝吡咯菌 素及嗜球果伞素作为先导化合物，合成出活性更高的拌种咯和氟咯菌腈，以及嘧菌酯和甲 基醚菌酯，并且都已成功上市。近来，不断有新的抗生素化合物从各种微生物次生代谢产物 中分离到，如gopalamicin和thiobutacin等，可用于防治某些作物病害。另外，持续增长 的天然化合物数量表明，自然界中多样性的巨大潜力还远未发掘完。 放线菌是各种抗生素的最丰产微生物，它产生如氨基糖苷、蒽环、糖肽、13-内酰 胺、大环内酯、核苷、肽、多烯和聚醚等作用机理独特与结构多样化的抗生素，其产生的抗生 素占天然抗生素的75%以上。尤其值得注意的是，链霉菌产生的新抗生素在数量和结构多 样性方面均超过放线菌的其它属，特别是在农业上使用的抗生素中，约60%分离自链霉菌， 表明链霉菌拥有更强的新抗生素合成能力。本专利技术就是在此背景下创制的。
技术实现思路
1.专利技术目的本专利技术提供一种有效成分为阿扎霉素F3、阿扎霉素F4和尼菲霉素组 合物的杀真菌农用抗生素，命名为WYLZ-1349，并提供一种从链霉菌属的微生物中发酵、分 离、提取阿扎霉素F3、阿扎霉素F4和尼菲霉素组合物，再添加适当的稳定剂和助剂制备成 杀真菌农用抗生素产品的方法，以及利用该产品进行防治作物真菌病害的应用，从而开发 出一种稳定性好、高效、安全低毒的新农药。 本专利技术人为了寻找比以往更有效的杀真菌农用抗生素，从土壤中分离各种微生物 来筛选微生物次生代谢产物，然后对这些次生代谢产物分别进行精制、鉴定和开发应用。在 此过程中，本专利技术人发现属于链霉菌属的马来西亚链霉菌(Str印tomyces malaysiensis) ECO 00002所产生的次生代谢产物对多种作物病害有良好的防治效果，通过对有效成分的 精制、鉴定，并与文献报道的相关化合物的谱图数据相比较，发现有效成分中3个主要活 性成分的平面结构与文献报道的阿扎霉素F3(Azalomycin F3)、阿扎霉素F4(Azalomycin F4)和尼菲霉素(Niphimycin)相同(Chem. Pharm. Bull. ，1967,15 :1657-1661， 1726-1732 ; 1982,30 :1653-1657，1658-1668，1669-1673，4006-4014. J. Antibiot. ，1970,23 :107-112 ; 1981,34 :1107-1118 ;1982,35 :1480-1494 ;1984,37 :103-109， 1167-1169， 1170-1186 ; 1985,38 :1363-1369 ;1986,39 :713-716 ;1990,43 :639-647 ;1993,46 :1912-1915 ;1994， 47 :688-696 ;1995,48 :293-299，896-898，1173-1175，1350-1352 ;1996,49 :765-769 ; 1997， 50，194-200， 484-489， 965-969. J. BasicMicrobiol. ，1998， 38 :415-419.J.Am. Chem. Soc. ， 1982， 104 :4129-4141)，均为36元环大环内脂类化合物。 2.技术方案本专利技术是通过以下技术方案来实现的。 WYLZ-1349的制备工艺、活性成分的精制与鉴定方法，其特征在于按如下步骤依次 进行 (1)种子培养过程 采用马来西亚链霉菌(Str印tomyces malaysiensis)ECO 00002，保藏登记入册编 号为CGMCC No. 1680，在种子罐中加入下列成分，按重量百分含量计酵母膏0. 4 0. 8，葡 萄糖0. 4 1. O，麦芽膏1. 0 2. O，复合维生素0. 001 0. 002，微量盐0. 005 0. 01，以 及0. 05 1. 0% (V/V)有机硅消泡剂，其余含量为水，12rC高压灭菌40分钟后备用。 培养条件在种子罐中培养36 48小时，培养温度为26 32°C，pH 6. 5 7. 0， 通气量1 : (0. 5 0. 8) (V/V)，罐压0. 03 0. 05Mpa，搅拌速率100 150转/分钟。 (2)抗生素发酵过程 在发酵罐内加入下列成分，按重量百分含量计甘露醇2. 0 3. O，大豆粉2. 0 4. O，磷酸氢二钾0. 01%以及0. 05 1. 0% (V/V)有机硅消泡剂，其余含量为水。在上述物 料放入发酵罐后，灭菌前调整pH值为7.5，12rC高压灭菌40分钟备用。将步骤(1)培养好 的种子液接入发酵罐，上罐接种量为10% 20% (V/V)。 培养条件培养时间72 96小时，培养温度为26 32。C，pH 6. 5 7. O，通气量 1 : (0. 5 1. 0) (V/V)，罐压0. 03 0. 05Mpa，搅拌速率100-200转/分钟。 (3)发酵产物后处理，按以下步骤依次进行 A.将发酵液进行过滤，过滤得上清液和菌丝体；B.将菌丝体放入提取罐中，加入 丙酮或甲醇等有机溶剂搅拌破壁6 10小时后，过滤得菌丝体的提取液；C.将菌丝体的提 取液抽入到浓縮罐中，在700mmHg真空度，蒸气压0. 02MPa，温度20 3(TC条件下减压浓縮 回收丙酮；待丙酮回收完后，将菌丝体的提取清液与步骤A.所得的上清液一起采用大孔吸 附树脂吸附，用丙酮或甲醇等有机溶剂洗脱，含活性组分的洗脱液经浓縮后得到WYLZ-1349 的粗提物；D.在粗提物中加入适当比例的各种农药通用载体或助剂后得成品WYLZ-1349。 (4)WYLZ-1349中活性成分的精制与鉴定取步骤(3)中步骤C.得到的部分粗提 物经过硅胶及S印hadex LH-20凝胶本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种农用杀菌剂，其特征在于它是以阿扎霉素Ｆ３、阿扎霉素Ｆ４和尼菲霉素组合物为有效成分的杀菌剂ＷＹＬＺ－１３４９，阿扎霉素Ｆ３、阿扎霉素Ｆ４和尼菲霉素的分子式分别为Ｃ↓［５６］Ｈ↓［９５］Ｎ↓［３］Ｏ↓［１７］、Ｃ↓［５７］Ｈ↓［９７］Ｎ↓［３］Ｏ↓［１７］和Ｃ↓［５９］Ｈ↓［１０３］Ｎ↓［３］Ｏ↓［１８］，分子量分别为１０８２．３６、１０９６．３９和１１４２．４６，分别具有如下的平面结构：＊＊＊Ｒ＝Ｈ，阿扎霉素Ｆ３尼菲霉素Ｒ＝ＣＨ↓［３］，阿扎霉素Ｆ４产生ＷＹＬＺ－１３４９所用的菌株是马来西亚链霉菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｍａｌａｙｓｉｅｎｓｉｓ）ＥＣＯ００００２，保藏编号为ＣＧＭＣＣＮｏ．１６８０。
【技术特征摘要】
一种农用杀菌剂，其特征在于它是以阿扎霉素F3、阿扎霉素F4和尼菲霉素组合物为有效成分的杀菌剂WYLZ-1349，阿扎霉素F3、阿扎霉素F4和尼菲霉素的分子式分别为C56H95N3O17、C57H97N3O17和C59H103N3O18，分子量分别为1082.36、1096.39和1142.46，分别具有如下的平面结构R＝H，阿扎霉素F3 尼菲霉素R＝CH3，阿扎霉素F4产生WYLZ-1349所用的菌株是马来西亚链霉菌(Streptomyces malaysiensis)ECO00002，保藏编号为CGMCC No.1680。F...
【专利技术属性】
技术研发人员：李铭刚，杨佩文，文孟良，李家瑞，赵江源，尚慧，
申请(专利权)人：云南大学，云南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]
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