修饰的无唾液酸-干扰素及其用途制造技术

本发明专利技术涉及制备修饰的无唾液酸－干扰素的方法以及使用所述干扰素治疗肝病的方法。通过加入水溶性聚合物修饰无唾液酸－干扰素，所述水溶性聚合物包括例如聚乙二醇（ＰＥＧ），聚乙烯吡咯烷酮（ＰＶＰ），聚（乙烯醇）（ＰＶＡ），聚（氧化烯烃），诸如聚（丙二醇）（ＰＰＧ），聚三亚甲基二醇（ＰＴＧ），和聚（氧乙烯化多元醇），诸如聚（氧乙烯化山梨醇），聚（氧乙烯化甘油），和聚（氧乙烯化葡萄糖）等。可被修饰并用于治疗肝病的无唾液酸－干扰素包括例如，无唾液酸－干扰素－α，－Ｒ，和－γ。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及利用干扰素治疗肝病。
技术介绍
干扰素是一类天然存在的蛋白，其最早是由于其预防病毒复制的能力而被发现的。其它研究确定，干扰素具有抗增生效应并可用于对抗一些类型的癌细胞。具体地说，包括干扰素-α，-β和-γ家族的成员在内的干扰素显示对许多病毒和肿瘤指征有临床效果，所述指征包括肝炎，毛细胞(hairycell)白血病，慢性骨髓源性白血病，黑素瘤，滤泡样淋巴瘤(follicularlymphoma)和慢性肉芽肿性疾病(chronic granulomatous disease)。乙型肝炎(HBV)和丙型肝炎(HCV)病毒感染是全世界性的健康问题。超过350,000,000人感染有HBV，使得其成为全世界最常见的严重慢性病毒感染。此外，在全世界范围内，HBV是导致肝癌的首要病因。此外，全世界大约170,000,000人患有慢性HCV感染，包括美国的至少3,900,000人。HCV导致30％的终末期肝病和肝癌，并且是导致患者需要肝移植的主要疾病。然而，HBV和HCV的治疗选择的有效性很有限，其会很快丧失有效性，且通常难以被患者耐受。在美国，原发性肝癌的发病率从1975到1995增加了71％，且被诊断患有肝癌的患者总数每年持续增加。在2002年，美国癌症协会估计在美国将确诊16,600例原发肝癌和胆管癌，并且14,100美国人将死于该疾病。虽然干扰素是有功效的治疗性化合物，它们很快从患者体内清除，使得需要频繁给药以保持该化合物的治疗有效水平。此外，干扰素不靶向具体的组织，且由此需要相对高的系统浓度以便在靶位点达到治疗有效浓度。干扰素的这些性质增加了治疗导致的有害副作用出现的可能性。因此，需要将干扰素靶向疾病位点较长时间以使其效力最大化且副作用最小化。专利技术概述一方面，本专利技术涉及基本纯的修饰的哺乳动物(例如人)无唾液酸-干扰素，其与水溶性聚合物结合(conjugate)，所述水溶性聚合物的平均分子量为大约1,000-60,000道尔顿，1,000-5,000，5,001-10,000，10,001-20,000，20,001-35,000，或35,001-60,000道尔顿。所述水溶性聚合物可以是线性的或分支的，并可内部交联。优选，所述水溶性聚合物是聚乙二醇(PEG)，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，聚(乙烯醇)(PVA)，聚(氧化烯烃)，诸如聚(丙二醇)(PPG)，聚三亚甲基二醇(PTG)，和聚(氧乙烯化多元醇)，诸如聚(氧乙烯化山梨醇)，聚(氧乙烯化甘油，和聚(氧乙烯化葡萄糖)。本专利技术的无唾液酸-干扰素可在一个，两个，三个或更多个氨基酸残基上进行修饰。对于在一个以上的氨基酸残基上进行修饰的无唾液酸-干扰素，其可利用相同或不同的水溶性聚合物修饰。在所需的实施方案中，所述无唾液酸-干扰素在半胱氨酸，赖氨酸，丝氨酸，苏氨酸，酪氨酸，精氨酸，或谷氨酸残基；在C-末端羧基；或在N-末端胺基被修饰。在最优选的实施方案中，所述无唾液酸-干扰素在半胱氨酸或赖氨酸上修饰。适合药用的无唾液酸-干扰素包括，例如人无唾液酸-干扰素-α，无唾液酸-干扰素-β，和无唾液酸-干扰素-γ。本专利技术还提供了药物组合物，其含有修饰的哺乳动物无唾液酸-干扰素和可药用的赋型剂。另一方面，本专利技术涉及通过给药有效量的药物组合物治疗患肝病的患者的方法，所述药物组合物包含修饰的哺乳动物(例如，人)无唾液酸-干扰素。适合于利用该方法治疗的肝病包括，例如病毒性肝炎(例如，乙型肝炎和/或丙型肝炎病毒感染)，肝纤维化，和肝癌诸如弥漫型肝细胞癌(diffuse-typeheptocellular carcinoma)，发热型肝细胞癌(febrile-type heptocellularcarcinoma)，和淤胆型肝细胞癌，肝母细胞瘤，肝样腺癌，以及灶性结节样增生。在本专利技术该方面的所需实施方案肿，所述修饰的无唾液酸-干扰素是前述的任何一种。修饰的无唾液酸-干扰素的治疗有效量为例如，约0.025μg/kg到10.0μg/kg体重(例如，约0.025，0.035，0.05，0.075，0.1，0.25，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，或3.5μg/kg体重)。此外，所述治疗有效量可以是例如每天一次、每隔一天一次、每周两次、每周一次、每隔一周一次或每月一次进行给药。″干扰素″指高同源物种家族-已知为干扰素的特定蛋白，其可抑制病毒复制和细胞增生，并调节免疫反应，且基本上与干扰素-α，-β或-γ或其生物活性片段相同。评估干扰素的生物活性的方法是众所周知的(例如，Monkarsh等，Anal.Biochem.247434-440，1997；Grace等，J.InterferonCytokine Res.211103-1115，2001；Bailon等，Bioconj.Chem.12195-202，2001；Pepinsky等，J.Pharmacol.Exp.Therap.2971059-66，2001)。人干扰素根据其细胞来源和分子结构而分成三类干扰素-α(白细胞)，干扰素-β(纤维母细胞)，和干扰素-γ(淋巴细胞)。″干扰素-α″是指含有与干扰素-α2成熟多肽(氨基酸24-188，登录号P01563；SEQ ID NO1)或其生物活性片段基本相同的氨基酸序列的蛋白。因此干扰素-α包括干扰素-α2前体多肽(登录号P01563；SEQ ID NO1)以及保持成熟干扰素-α生物活性(例如，抗增生活性)的片段。该定义还包括干扰素-α2的变体形式，包括例如，干扰素-α2b(SEQ ID NO1的R46K突变)和干扰素-α2c(SEQ ID NO1的R57H突变)。干扰素-α2b是O-连接的糖蛋白。干扰素-α14c是N-连接的糖蛋白，其在Asn-72糖基化。天然干扰素可以Wellferon(Glaxo-SmithKline，Alferon(干扰素)，Sumiferon(Sumitomo)和Multiferon(Viragen)的商品名购得。非-糖基化的干扰素-α也可购得，包括例如重组干扰素-α2a，商品名为Roferon-A(Roche)，重组干扰素-α2b，商品名为Intron-A(Schering Ploμgh)，和重组干扰素-α2c，名为Berofor alpha2(Boehringer Ingelheim)。重组共有序列干扰素-con 1可以Infergen(Amgen)的名称获得。当然，在用于本专利技术的组合物和方法前，任何非-糖基化的干扰素必须用含有末端半乳糖残基的寡糖来糖基化。″干扰素-β”是指含有与成熟干扰素-β多肽(氨基酸22-187，登录号P01574；SEQ ID NO2)或其生物活性片段基本相同的氨基酸序列的蛋白。因此干扰素-β包括不包含单个肽的成熟干扰素-β蛋白，包含所述单个肽的干扰素-β前体多肽(登录号P01574；SEQ ID NO2)，以及其具有干扰素-β活性(例如，抗增生活性)的片段。干扰素-β是在成熟干扰素-β蛋白的Asn80上糖基化的糖蛋白。重组干扰素-β已经开发出来并可购得。干扰素-β1a可以Avonex(Biogen)和Rebifg(Serono)的商品名购得。干扰素-β1b可以Betaseron(Berl本文档来自技高网...

【技术保护点】
修饰的无唾液酸－干扰素，其包含与水溶性聚合物结合的无唾液酸－干扰素，所述聚合物的平均分子量大约为１，０００－６０，０００道尔顿。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：尼古拉斯P巴克，丹尼尔K波多尔斯基，
申请(专利权)人：通用医疗公司，GI公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]