增加血小板和造血干细胞产生的方法技术

本发明专利技术公开了一种增加造血干细胞产生的方法。该方法包括将ＴＰＯ模拟化合物施用于受试者。本发明专利技术也公开了包含ＴＰＯ模拟化合物和药用载体的药物组合物。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本申请要求2002年9月18日申请的No.60/411,779和60/411,700的优先权。
技术介绍
血小板生成素(TPO)，最初被克隆作为血小板产生的主要调节因子，其在造血干细胞(HSC)生物学中具有关键性的作用。Kaushansky等，Nature，369568-571(1994)。事实上，所有具有种群恢复活性的原始HSC都表达c-Mpl-TPO的受体。Solar等，Blood，924-10(1998)。TPO单独或与其它早期作用的细胞因子，诸如干细胞因子(SCF)、白介素3(IL-3)或Flt-3配体结合增强初始HSC的体外增殖。Ku等，Blood，874544-4551(1996)；Sitnicka等，Blood，874998-5005(1996)。体内试验证实了这些结论。Kimura等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，951195-1200(1998)。c-Mpl基因突变引起的先天性无巨核细胞血小板减少的临床观察也支持了干细胞中TPO自我更新和扩展的重要性，其中先天性无巨核细胞血小板减少是一种儿童期的全造血血统衰竭病。Ballmaier等，Blood，97139-146(2001)。人们已发现成熟骨髓中HSCs的扩展比骨髓移植后tpo-/-小鼠中少10至20倍。外源地添加TPO弥补了这种缺陷。Fox等，J.Clin.Invest.，110389-394(2002)。这些报道表明TPO是HSCs的自我更新和扩展的主要的非多余的供应因子。自体干细胞移植(ASCT)被日益广泛地用作可能有效的、骨髓清除性化疗、高剂量化疗给药后的骨髓重建的手段。这些方法的原理是使HSCs由骨髓流动到周围血液中(利用G-CSF+/-启动的化学疗法)，其中周围血液通过脱落收集。这些干细胞，形成了所收集的种群的一小部分，然后当骨髓清除性化疗后再灌注时能够重新构成骨髓。在此方法中获自周围血液的干细胞好像类似于脐带血细胞并且其在骨髓清除性化疗后再生骨髓的能力优于骨髓细胞的能力，其植入中性粒细胞和血小板的时间小于10天。ASCT最普遍适用的肿瘤类型为骨髓瘤、淋巴瘤(何杰金氏病和非-霍奇金淋巴瘤)以及急性骨髓性白血病。用ASCT进行的高剂量化学疗法可逐渐地被用作首行疗法，尤其是用于骨髓瘤中，但是其同时也被用作首行化疗失败后的抢救治疗。这样的受试者常常已被进行严重地预处理，因此具有受损伤的造血潜能的骨髓。这些收集的细胞被再输注到受试者中后，受试者例如人患者有一个时期处于感染(低嗜中性粒细胞)和出血(低血小板)的危险之中。这个时期基于再灌注干细胞的数量而变化，其反过来依赖该能力来刺激骨髓中干细胞的扩展。此外，一些受试者在植入的起始阶段后也出现骨髓衰竭。当周围血液干细胞被流动化并由HLA匹配的供体收集时，干细胞移植也用于异源的情形。由于移植物抗宿主疾病的发生，与ASCT相比，此种异源移植不太经常使用，但是当不能够从患者获得充分的干细胞时可使用异源移植。然而在成髓细胞完全缺乏的情况下，使用异源干细胞来获得部分的植入(“迷你移植”)可由于移植物对肿瘤的作用而提供一些治疗益处。目前在极端少量的患者中的另一种可能用途是用于基因治疗领域，其中用缺陷基因的正常拷贝转导的正常异源的骨髓细胞或自体同源细胞可有效地用于某些由单基因缺陷引起的遗传病。异源移植也被研究作为自身免疫疾病的一种治疗选择。尽管ASCT具有潜在的用途并且是简单的，但对其广泛应用的显著限制超出了所期待的全血细胞减少的时间，因此受试者的强力支持是允许再灌注细胞来恢复足以维持周围血液数的血细胞生成的水平所必需的。显著比例的移植受试者(最高达40％)需要在移植后有延长的血小板灌输(植入的原发性失败)。较少的组(在自体同源移植中为5-10％，但是对于异源移植＞20％)发展了次级血小板减少，尽管有初始的植入，有时需要延长的灌输。植入失败或迟发性的植入失败与增加的死亡率、增加的保健费用和降低的受试者生活质量相关联。因此在这样的受试者中需要增加HSC的产生。研究证明了给患者施用TPO导致周围血液祖细胞的流动化。一项研究证明在多剂量组合施用TPO与G-CSF后，来自多重谱系的集落形成细胞和CD34+细胞流动到周围血液中。另一项研究表明在患有另外的正常血细胞生成的癌症患者中施用单一剂量的TPO 3-7天之后，循环CD34+细胞出现6倍的增加。在这些研究中，干细胞富集的亚级分(CD34+Thy+Lin-)几乎增加了9倍并且相应的巨核细胞亚级分(CD34+CD41+CD14-)几乎增加了15倍。这些研究表明TPO能够使来自骨髓的自我更新的HSC和相应的子代细胞流动。尽管重组TPO(rhTPO)的利用具有增加HSC产生的希望，但人们需要通过给药方式来改善TPO疗法。因此人们需要基本上保持TPO的全部激动剂活性并且同时允许以不同的方式施用小分子TPO模拟化合物。也存在对相对于一种或多种rhTPO和rhIL具有降低的免疫原性以及相对于一种或多种rhTPO和rhIL-11具有增加的药物代谢动力学分布的小分子TPO模拟化合物的需求。专利技术概述本专利技术的目的是提供一种增加受试者的HSC产生的方法，包括将TPO模拟化合物施用于该受试者的步骤。TPO模拟化合物可单独地或在药用载体中给药于受试者。TPO模拟化合物可单独施用或与一种或多种其它的模拟化合物和/或其它可增强干细胞由骨髓中流动的试剂结合施用，包括例如G-CSF、SCF、IL-3和/或Flt-3。因此，本专利技术的另一个目的是提供含有有效量的TPO模拟化合物和药用载体的TPO模拟物的药物组合物。当施用TPO模拟化合物时，有效量的TPO模拟化合物增强受试者骨髓内干细胞群体的扩展和/或增强干细胞流动到受试者的外周循环中。本专利技术的目的也在于给受试者提供HSCs的方法。该方法可包括将TPO模拟化合物施用于受试者以增强骨髓内干细胞群体的扩展和/或使干细胞流动到外周循环中的步骤。其次，该方法可包括由受试者的骨髓或者外周循环收集一种或多种干细胞，然后将收集的一种或多种干细胞植入受试者。本专利技术的目的也在于由供体受试者给受体受试者提供HSCs的方法。附图的简要说明附图说明图1为化合物的列表，其可适用于本专利技术的方法中。图2为表示根据本专利技术的方法调控血小板和HSC产生的示意图。专利技术详述在这里引用的专利公开和文献的有关部分被引入作为参考。在一个实施方案中，本专利技术的目的是通过将TPO肽、TPO模拟化合物给药于受试者而增加HSC的产生，所述的TPO模拟化合物包括但不限于在图1中列举的化合物以及图1所列举化合物的PEG化的形式。用于将图1中所示的化合物PEG化的方法描述在美国专利No.5,869,451中。在一个实施方案中，本专利技术的目的是通过将TPO肽给药于受试者而增加HSC的产生，如相应的美国申请号_______(代理人案号038073-5005 PR)，于2003年8月28申请的，其全部内容在此处引作参考。根据此实施方案，TPO肽为一种化合物，其具有(1)小于约5000道尔顿的分子量，以及(2)用IC50表示的与TPO受体结合亲合力不多于约100μM，其中肽的从零到所有的-C(O)NE-键已被选自由下述键组成的组的键取代-CH2OC(O)NR-键；膦酸酯键；-CH2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种增加受试者中造血干细胞产生的方法，包括将ＴＰＯ模拟化合物施用于所述受试者的步骤。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：K考尚斯基，BR麦唐纳，
申请(专利权)人：奥索麦克尼尔药品公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]