【技术实现步骤摘要】
本专利技术主要涉及乂人生物体液才羊本中富集与才企测稀有细胞的整 合方法。
技术介绍
自/人美国国家食品药品管理局于2004年审批通过美国 Immunicon/Veridex (Philadelphia, USAV^司的直4妄4乾获人外周血中 循环胂瘤细胞的技术后,有关获取及检测循环肺瘤细胞，循环内皮细 胞，肿瘤干细胞，以及某些免疫细胞的重要的科研及临床意义已不 断的4皮广泛才艮道(Cristofanilli et al, 2004 7Vew丑wg / MeJ. 351:781; Braim and Marth, 2004脸w/ Med 351:824).然而这种利用抗体偶联磁珠直接捕获循环胂瘤细胞的方法有 着尽人皆^口的击夹,存、(Mocellin et al, 2006 7Ve(is1 Mo/ecw/ar Afed/c/we 12:130):鉴于肺瘤细胞表面标志表达的异质性，所以许多肿瘤细胞 不能被此种方法所捕获，这已被许多临床病例所证明；除此之外， 由于肿瘤细胞被抗体偶联的磁珠触及并被刺激，致使这些捕获 的被大量免疫颗粒包被的肿瘤细胞已不再是处于自然状态...
【技术保护点】
一种从生物体液样本中富集稀有细胞的整合方法，包括： ａ）通过离心去除血浆蛋白， ｂ）可选加入红细胞裂解液进行红细胞裂解以去除红细胞， ｃ）加免疫微球或免疫吸附剂进行孵育， ｄ）进行基于独特的细胞分离介质的密度离心，用 于分离所述稀有细胞与去除红细胞后的剩余红细胞及结合于所述免疫微球上的白细胞。
【技术特征摘要】
1.一种从生物体液样本中富集稀有细胞的整合方法，包括a)通过离心去除血浆蛋白，b)可选加入红细胞裂解液进行红细胞裂解以去除红细胞，c)加免疫微球或免疫吸附剂进行孵育，d)进行基于独特的细胞分离介质的密度离心，用于分离所述稀有细胞与去除红细胞后的剩余红细胞及结合于所述免疫微球上的白细胞。2. 根据权利要求1所述的方法，其中，从人或动物收集的所述生 物体液标本包括但并不局限于以下来源外周循环血，脐带血， 尿液，精液，骨髓，羊水，脊髓及胸腔积液，腹水，痰液，处 理过并/或匀浆化的人或动物组织，培养的人或动物细月包。3. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述免疫微球由特异性识 别白细胞标示物的抗体与微球表面进行共价或非共价偶联而 形成，所述孩求的表面经过或没有经过4匕学处理以适于与蛋白 质相偶联，所述樣支球的直径介于10纳米-100纟效米，所述樣史 球包含或部分包含任何一种下列成〗分二氧化硅，右旋糖普， 琼脂糖，或交联葡聚糖。4. 根据权利要求3所述的方法，其中，用于制备所述免疫微球的 微球为磁性或非磁性的。5. 4艮据权利要求1所述的方法，其中，所述免疫吸附剂是将任何 经过或没有经过化学处理的适宜结合蛋白的固体表面，如石圭玻璃片，与配体或特异的单克隆或多克隆抗体包^T抗白细月包表面标示物，如CD45的抗体，进^f于共1介或非共〗介偶联而制备而成。6. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述独特的细胞分离介质 在20。C温度下比重范围介于1.07256-1.07638克/毫升，所述 细胞分离介质包含下列任何一种或任意两种或两种以上的试 剂成份聚乙烯吡咯烷包被的胶质二氧化硅；多聚糖加泛影酸 钠或其衍生物；由蔗糖和表氯醇组成的非离子聚合物；或任何 一种含糖的溶液，如右旋糖苷或蔗糖；》典化小分子化合物(如 甲泛影酰胺)；或任意蛋白溶液，所述细胞分离介质的比重可 用任何渗透压介于280-320 mOsm/kg H20， pH 6.8-7.8的緩沖 液在20。C温度下调制在1.07256-1.07638克/毫升范围内。7. 根据权利要求1所述的方法，其中，还包括，将通过基于所述 细胞分离介质的离心得到的沉积细胞以上的所有上清液全部收集。8. 4艮据4又利要求1所述的方法，其中，所述稀有细月包是指其在采 集的生物体液冲羊本内的所有有核细月包中的占有比例小于 0.1%,它们包括循环肿瘤细胞，循环内皮细胞，胂瘤干细胞， 干细月包，及某些免疫细胞，其中所述循环肺瘤细月包来自于具有 或不具有上皮来源的任何实体瘤，如黑色素瘤等。9. 根据权利要求1至8中任一项所述的方法富集的稀有细胞在以 下方面的应用在通过免疫荧光或免疫组化加荧光或普通光学 显微镜或可见光扫描仪对所述富集的稀有细胞的计数；PCR; 流式细胞仪才企测；基因表达i普分析；蛋白表达镨分析；酶学测 定；肿瘤病人体外化疗药物的筛选；有关肿瘤病人化疗方案的 制定与指导化疗的进行；对肿瘤病人体内的肿瘤细胞使用化疗 药物及/或一种或多种治疗肺瘤抗体效果的评估；体内或体外培养所述富集的稀有细胞；在所述...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。