一种髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法技术

本发明专利技术公开了一种髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法，由酶标板、标准品、样本稀释液、浓缩洗涤液、反应液和放光底物共同组成试剂盒进行检测，具体包括以下步骤：(1)准备；(2)加样定位；(3)加样；(4)洗板；(5)加底物；(6)测定发光值。本发明专利技术灵敏度高，宽的线性动力学范围，光信号持续时间长，分析方法简便快速，结果稳定、误差小，安全性好及使用期长。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及心脑血管疾病检测领域，具体是一种髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法。
技术介绍
髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)又称过氧化物酶，是血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一。，存在于髓系细胞(主要是中性粒细胞和单核细胞)的嗜苯胺蓝颗粒中，是髓细胞的特异性标志，随着对MPO研究的深入，人们发现MPO基因多态性导致个体对一些疾病易感性的差异，与人类多种疾病的发生、发展密切相关，因此越来越受到国内外学者的重视。髓过氧化物酶(MPO)是检测冠状动脉疾病、急性冠脉综合征(ACS)的重要检测标志物，MPO可独立预测健康人未来患心血管疾病的风险，权威杂志新英格兰医学期刊在2003年报道了一项研究，通过检测604名胸痛患者的MPO浓度水平，能预测30天至6个月内发生心血管事件的概率。因此，准确的、定量的检测MPO是临床医学迫切的需求，然而市场上使用的检测试剂盒为胶体金法、酶联免疫法不具备定量功能，其检测灵敏度、线性范围也无法满足MPO作为预测心血管疾病的功能需求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法，由酶标板、标准品、样本稀释液、浓缩洗涤液、反应液和放光底物共同组成试剂盒进行检测，具体包括以下步骤：(1)准备：自4℃冰箱取出试剂，室温平衡15分钟；浓缩洗涤液以1：20稀释成工作液；(2)加样定位：将样品及标准品分别加入酶标板，标准品各浓度各设一孔，另设一孔作空白对照；(3)加样：样品或标准品于相应孔分别加100ul，每孔再各加反应液100ul，在震荡器上混匀一分钟，置37℃恒温反应60分钟；(4)洗板：吸除板孔中的反应液，各孔加入工作液约200ul，静置15-25秒，除去其中液体；如此共洗五次，最后一遍将吸除板中液体拍尽；(5)加底物：开启化学发光检测仪及主控制计算机，设定测定模式与参数；将微孔板置于化学发光检测仪测定室，用加样器加放光底物，每孔50ul，加放光底物时应避免产生气泡；(6)测定发光值：于加底物后的第10分钟测定各孔的发光值RLU；并将数据用化学发光检测仪定量软件进行定量分析。作为本专利技术进一步的方案：步骤(4)在吸除板孔中的反应液后，用洗板机洗板五次。作为本专利技术再进一步的方案：步骤(5)中用内置加样器加放光底物。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术灵敏度高，宽的线性动力学范围，光信号持续时间长，分析方法简便快速，结果稳定、误差小，安全性好及使用期长。附图说明图1为髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法的结构示意图。图2为髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法中灵敏度对比图。图3为髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法中线性范围对比图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。请参阅图1，本专利技术实施例中，一种髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法，由酶标板、标准品、样本稀释液、浓缩洗涤液、反应液和放光底物共同组成试剂盒进行检测，具体包括以下步骤：(1)准备：自4℃冰箱取出试剂，室温平衡15分钟；浓缩洗涤液以1：20稀释成工作液；(2)加样定位：将样品及标准品分别加入酶标板，标准品各浓度各设一孔，另设一孔作空白对照；(3)加样：样品或标准品于相应孔分别加100ul，每孔再各加反应液100ul，在震荡器上混匀一分钟，置37℃恒温反应60分钟；(4)洗板：吸除板孔中的反应液，各孔加入工作液约200ul，静置15-25秒，除去其中液体；如此共洗五次，最后一遍将吸除板中液体拍尽；或在吸除板孔中的反应液后，用洗板机洗板五次；(5)加底物：开启化学发光检测仪及主控制计算机，设定测定模式与参数；将微孔板置于化学发光检测仪测定室，用加样器或内置加样器加放光底物，每孔50ul，加放光底物时应避免产生气泡；用内置加样器时，操作详见化学发光检测仪操作指南；(6)测定发光值：于加底物后的第10分钟测定各孔的发光值RLU；并将数据用化学发光检测仪定量软件进行定量分析。本专利技术与其他方法的优缺点对比表如下：本专利技术解决了MPO临床检测准确度不高的问题，化学发光法比市场上使用的更高的灵敏度和检测准确度，同时具备定量检测功能。免疫学检测主要是利用抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段，由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对检测信号进行放大和显示，因此常被用于检测蛋白质、激素等微量物质。化学发光免疫分析方法是在放射免疫分析(Radioimmunoassay，RIA)和酶联免疫分析(enzymeimmunoassay，EIA)两种方法基础上改进的一种新方法，无放射性和致畸物质，兼具有以上两种方法的优点，且产品有效期长、对环境无污染、对人体无毒无害，是目前体外诊断试剂检测方法中的佼佼者，在技术上具有明显的优势。综上所述，化学发光法检测MPO试剂盒解决了临床医学对于MPO检测的需求。当该产品匹配专用化学发光免疫分析仪时，能够达到最佳检测效果。化学发光免疫分析能够检出胶体金免疫层析分析和酶联免疫分析等方法无法检出的MPO，对心血管疾病的早期诊断具有十分重要的意义。最高灵敏度可达10-18mol/L。如图2所示。化学发光免疫分析能够比胶体金免疫层析分析和酶联免疫分析等方法检测更准确，线性范围可达0-105mol/L。如图3所示。对于本领域技术人员而言，显然本专利技术不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本专利技术的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本专利技术。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本专利技术的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本专利技术内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法，其特征在于，由酶标板、标准品、样本稀释液、浓缩洗涤液、反应液和放光底物共同组成试剂盒进行检测，具体包括以下步骤：(1)准备：自4℃冰箱取出试剂，室温平衡15分钟；浓缩洗涤液以1：20稀释成工作液；(2)加样定位：将样品及标准品分别加入酶标板，标准品各浓度各设一孔，另设一孔作空白对照；(3)加样：样品或标准品于相应孔分别加100ul，每孔再各加反应液100ul，在震荡器上混匀一分钟，置37℃恒温反应60分钟；(4)洗板：吸除板孔中的反应液，各孔加入工作液约200ul，静置15‑25秒，除去其中液体；如此共洗五次，最后一遍将吸除板中液体拍尽；(5)加底物：开启化学发光检测仪及主控制计算机，设定测定模式与参数；将微孔板置于化学发光检测仪测定室，用加样器加放光底物，每孔50ul，加放光底物时应避免产生气泡；(6)测定发光值：于加底物后的第10分钟测定各孔的发光值RLU；并将数据用化学发光检测仪定量软件进行定量分析。

【技术特征摘要】
1.一种髓过氧化物酶定量检测的化学发光免疫分析方法，其特征在于，由酶标板、
标准品、样本稀释液、浓缩洗涤液、反应液和放光底物共同组成试剂盒进行检测，具体包
括以下步骤：
(1)准备：自4℃冰箱取出试剂，室温平衡15分钟；浓缩洗涤液以1：20稀释成工作
液；
(2)加样定位：将样品及标准品分别加入酶标板，标准品各浓度各设一孔，另设一孔
作空白对照；
(3)加样：样品或标准品于相应孔分别加100ul，每孔再各加反应液100ul，在震荡器
上混匀一分钟，置37℃恒温反应60分钟；
(4)洗板：吸除板孔中的反应液，各孔加入工作液约200ul，静置15-25秒，除去其
中液体；如此...

【专利技术属性】
技术研发人员：李志华，段年丰，
申请(专利权)人：杭州检康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33