重组人胞红蛋白复性及其对酒精肝损伤保护的药物用途制造技术

本发明专利技术涉及生物医药领域，提供了一种重组人胞红蛋白表达复性制备方法，以及重组人胞红蛋白对酒精急性肝损伤保护的医药用途。胞红蛋白（Ｃｙｔｏｇｌｏｂｉｎ，ＣＹＧＢ）最初命名为肝星状细胞激活相关蛋白（Ｈｅｐａｔｉｃ？Ｓｔｅｌｌａｔｅ？ｃｅｌｌ？ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ？ｐｒｏｔｅｉｎ，ＳＴＡＰ）。ｒｈＣＹＧＢ经大肠杆菌表达后，通过人工添加血红素辅基复性和采用Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ？Ｓ－２００凝胶层析法纯化，可以提高ｒｈＣＹＧＢ复性和分离纯化效率。重组人胞红蛋白能有效地预防酒精急性肝损伤，可用于预防或治疗酒精中毒和酒精肝损伤。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种重组人胞红蛋白(rhCYGB)表达复性的制备方法及其对酒精肝损伤的保护作用的医药用途，即用于预防或治疗酒精急性肝损伤的用途。
技术介绍
2001年，Kawada等首次从TAA诱导的大鼠肝星状细胞(H印atic stellatecell, HSC)中发现了肝星状细胞激活相关蛋白(Stellate cell activation-associatedprotein, STAP) 。 STAP与血红蛋白(Hemoglobin, HB)和肌红蛋白(Myoglobin, Mb)结构相似，功能相近，因此STAP现被称胞红蛋白(Cytoglobin， CYGB)。人源CYGB由190个氨基酸残基组成，分子量约为21KD。 CYGB是一个较新的蛋白质，现已发现它具有携氧与贮氧、氧感受器和清除自由基等生物学功能。 CYGB具有过氧化物酶、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶(SOD)活性，其清除自由基抗氧化活性受到生物制药研究者的关注。许瑞安等将大鼠体内通过基因治疗方式给予大鼠CYGB基因后，HSC中过量表达CYGB，可减少细胞外基质合成，预示CYGB具有抗肝纤维化作用本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种重组人胞红蛋白（ｈＣＹＧＢ）表达复性制备方法，其特征是采用以下工艺步骤：　　（１）本室构建保存的基因工程菌ｐＥＴ２８ａ／ｈＣＹＧＢ／ＢＬ２１（ＤＥ３），在最佳表达条件（ＩＰＴＧ　０．１ｍＭ至０．５ｍＭ，３７℃诱导表达４小时至８小时）培养后，离心收获细胞。　　（２）每克细胞加入１０ｍｌ裂解液（５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－Ｃｌ，ｐＨ８．０，５０ｍＭ　ＥＤＴＡ，１ｍＭ　ＰＭＳＦ）；细胞经过三步的反复冻融后，再用超声破碎菌体；７０００ｇ，３０ｍｉｎ，４℃离心除去上清，包涵体中加入洗涤液（Ｔｒｉｓ－Ｃｌ，ｐＨ８．０，５ｍＭ　ＥＤＴＡ，２％去氧胆酸）５ｍｌ洗涤，再次离心除去上清。　　（３）包涵体用２ｍｌ（６Ｍ...

【技术特征摘要】
一种重组人胞红蛋白(hCYGB)表达复性制备方法，其特征是采用以下工艺步骤(1)本室构建保存的基因工程菌pET28a/hCYGB/BL21(DE3)，在最佳表达条件(IPTG 0.1mM至0.5mM，37℃诱导表达4小时至8小时)培养后，离心收获细胞。(2)每克细胞加入10ml裂解液(50mM Tris-Cl，pH8.0，50mM EDTA，1mM PMSF)；细胞经过三步的反复冻融后，再用超声破碎菌体；7000g，30min，4℃离心除去上清，包涵体中加入洗涤液(Tris-Cl，pH8.0，5mM EDTA，2％去氧胆酸)5ml洗涤，再次离心除去上清。(3)包涵体用2ml(6M盐酸胍，50mM Tris-Cl，pH7.5，50mM DTT)溶液煮沸5分钟。离心(10000g，10分钟，4℃)除去不溶物，得到上清蛋白质溶液。(4)上述所得蛋白质溶液按总蛋白浓度中含有60％rhCYGB计算，加入1倍至2倍于rhCYGB摩尔浓度的血红素于蛋白质溶液中，轻轻搅拌，室温静置5分钟至20分钟，离心(10000g，10分钟，4℃)除去不溶物。(5)将离心后的上清液...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玉彬，吴梧桐，魏威，接振旺，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：84[]