本发明专利技术公开了羟基马桑毒素（ｔｕｔｉｎ）在制备癫痫动物模型所用致痫药物中的应用。实验表明：用人工脑脊液（ＡＣＳＦ）将羟基马桑毒素（ｔｕｔｉｎ）配制成浓度为１０．０～３０．０μｇ／μｌ的注射液，以成年大鼠制备动物模型，从大鼠侧脑室给药，给药的剂量为５μｌ／只，给药后全部大鼠产生了典型的癫痫状态行为发作，脑电图记录到棘波、多棘波群、棘慢综合波、成簇发放的多棘慢综合波以及阵发性高波幅节律等痫样脑电波。因此，羟基马桑毒素（ｔｕｔｉｎ）可作为一种新的致痫化学工具药，用于制备实验性癫痫动物模型。
【技术实现步骤摘要】
羟基马桑毒素在制备癫痫动物模型所用致痫药物中的应用
本专利技术涉及羟基马桑毒素(tutin)的用途，特别是在制备实验性癫痫动物模型所用致痫药物中的应用。
技术介绍
癫痫是发病原因复杂、表现形式多样的脑疾病，全世界大约有超过5千万人患此疾病。利用不同的癫痫动物模型对癫痫发生机制进行研究、对治疗癫痫病的药物进行筛选是进一步阐明癫痫病因、治疗人类癫痫的重要途径之一。癫痫动物模型所用的致痫药物通常为匹罗卡品(pilocarpine)、红藻氨酸(kanic acid，KA)，虽然它们引起动物癫痫状态的表现大致相同，但各自的致痫原因、癫痫发生过程以及致痫机制却不相同。匹罗卡品可致典型的癫痫状态行为和脑电惊厥，兴奋性氨基酸NMDA受体拮抗剂MK-801抑制匹罗卡品所致癫痫动物发作性行为惊厥、脑电惊厥，表明兴奋性氨基酸NMDA受体激活是该种癫痫模型形成的重要因素，此外，抑制性氨基酸γ-氨基丁酸(GABA)受体功能异常是匹罗卡品导致动物惊厥的另一原因(见OrmandyGC，Jope RS，Snead OC.Anticonvulsant actions of MK-801 on the lithium-pilocarpinemodel of status epilepticus in rats.Exp Neurol 1989；106：172-180.)。红藻氨酸(kanic acid，KA)所致的癫痫状态是另一种癫痫模型，当GABA-A受体拮抗剂、MK-801和腺苷受体拟似剂共同作用于红藻氨酸所致的惊厥动物时，可对红藻氨酸引起的兴奋毒性产生明显的神经保护作用(见MacGregor DG，Graham DI，Stone TW.The attenuation ofkainate-induced neurotoxicity by chlormethiazole and its enhancement by dizocilpine，muscimol，and adenosine receptor agonists.Exp Neurol 1997；148：110-123.)。提示不同的递质受体系统参与了红藻氨酸所致的惊厥。上述实验表明，只有不断开发新的致痫药物制备不同类型的癫痫动物模型，才能满足治疗癫痫病的需要。马桑内酯(coriaria lactone，CL)作为致痫剂也有所报道。马桑内酯是从中草药马桑寄生中提取的混合液，其组分主要有马桑毒素、羟基马桑毒素、马桑亭及其它倍半萜内-->酯，由于马桑内酯是一种混合物，发挥作用的有效组分不明，所以阻碍它成为一种公认的致痫工具药。羟基马桑毒素(tutin)是从马桑内酯混合液中分离纯化获得的一种纯化学物质，其结构式如下：周华等对羟基马桑毒素(tutin)的初步研究显示，不同浓度(40μg/ml、30μg/ml和20μg/ml)的羟基马桑毒素(tutin)灌流大鼠海马脑片，均可显著增高由顺向刺激海马Schaffer侧支所诱发的CA1区锥体神经元群体锋电位(population spike，PS)的幅度(周华，郑煜，唐玉红；羟基马桑毒素所致的大鼠海马锥体细胞痫样放电活动；生理学报，June 25，2004；56(3)：341-346)。该现象提示羟基马桑毒素(tutin)可能具有致痫作用，但不能由此推论羟基马桑毒素(tutin)在动物整体情况下能引发癫痫样行为和癫痫样脑电，从而作为制备癫痫动物模型的一种致痫药物。因为，在实验科学领域，人们一致认为，不能简单地把离体实验中得到的结果直接用来推测或解释其在完整机体中的功能或所起的作用(姚泰，绪论，姚泰主编：生理学，人民卫生出版社，2000，北京，1-6)。
技术实现思路
本专利技术的目的是为制备癫痫动物模型提供一种新的致痫药物，促进癫痫发生机制的研究和癫痫病治疗药物的筛选。本专利技术通过实验证明：用人工脑脊液(ACSF)将羟基马桑毒素(tutin)配制成浓度为10.0～30.0μg/μl的注射液，以成年大鼠制备动物模型，从大鼠侧脑室给药，给药的剂量为5μl/只，给药后全部大鼠产生了典型的癫痫状态行为发作，脑电图记录到棘波、多棘波群、棘慢综合波、成簇发放的多棘慢综合波以及阵发性高波幅节律等痫样脑电波。-->因此，羟基马桑毒素(tutin)可作为一种新的致痫化学工具药，用于制备实验性癫痫动物模型。癫痫行为观察采用摄像机录像记录，并与Racine点燃模型的分级标准(Racine RJ.Modification of seizure activity by electrical stimulation.II.Motor seizure.Electroencephalography and Clinical Neurophysiology 1972b；32：281-294)和癫痫状态(status epilepticus，SE)的发作类型(参照Brandt(Brandt C，Glien M，Potschka H，VolkHolger and Lscher W.Epileptogenesis and neuropathology after different types of statusepilepticus induced by prolonged electrical stimulation of the basolateral amygdale in rats.Epilepsy Res 2003；55：83-103)〕进行对照比较。痫样脑电活动变化采用脑电图(electroencephalogram，EEG)记录电极、记录装置和生物机能实验系统记录、显示、贮存和分析，并与常见痫波的脑电图(解学孔，癫痫的脑电图表现，解学孔主编：癫痫病学。人民卫生出版社，1995，北京，350-385)进行对照比较。本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术为已知物质羟基马桑毒素发掘了新的用途，开拓了一个新的应用领域。2、本专利技术为制备癫痫动物模型提供了一种新的致痫药物，此种致痫药物不仅致痫作用较强，而且动物死亡率较低。3、经侧脑室单次微量注射羟基马桑毒素(tutin)液可制成一种新的大鼠急性癫痫状态模型，有利于癫痫发生机制的研究和癫痫病治疗药物的筛选。4、对实验大鼠注射羟基马桑毒素液时采用侧脑室局部给药，不仅给药量小，而且可避免血脑屏障对药物进入脑脊液的阻碍作用。 附图说明图1是实验大鼠侧脑室微量注射人工脑脊液(ACSF)前、后的脑电波图，其中，A为注射人工脑脊液(ACSF)前的脑电波图，B为注射人工脑脊液(ACSF)后的脑电波图，他们均为正常脑电波，未见痫样放电。图2是实验大鼠注射浓度为12.5μg/μl的羟基马桑毒素液后5～10分钟所出现的棘波放电脑电图，其中，A为注射羟基马桑毒素前的正常脑电波型图，B1为常见的癫痫大鼠棘波放电的脑电波型图(箭头所指)，B2为连续、反复出现的单个棘波图(线段所示)，B3为连续出现的多棘波群图(箭头所指)。本文档来自技高网...
【技术保护点】
羟基马桑毒素在制备癫痫动物模型所用致痫药物中的应用。
【技术特征摘要】
1、羟基马桑毒素在制备癫痫动物模型所用致痫药物中的应用。2、根据权利要求1所述的应用，其特征在于致痫药物用羟基马桑毒素和人工脑脊液配制，羟基马桑毒素的浓度...
【专利技术属性】
技术研发人员：周华，郑煜，唐玉红，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]
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