一种人前列腺特异抗原表达载体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种人前列腺特异抗原表达载体及其应用，目的是提供一种人前列腺特异抗原表达载体及导入该载体的重组酵母细胞，以及利用该重组细胞生产制备人前列腺特异抗原活性片断的方法。该表达载体是含有人前列腺特异抗原基因和Ｈｉｓ－ｔａｇ基因的酵母表达载体。表达人前列腺特异抗原的方法，包括重组酵母细胞的构建，甲醇诱导表达及利用金属亲和层析分离纯化人前列腺特异抗原的步骤。本发明专利技术的人前列腺特异抗原表达载体通过同源重组使人前列腺特异抗原基因整合入酵母细胞基因组中，进行稳定表达，使生产成本大大降低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及遗传工程领域，特别涉及用基因重组的方法制备前列腺特异抗原表达载 体，以及利用该表达载体生产人前列腺特异抗原的方法。二. 技术背景前列腺特异抗原(prostate specific antigen, PSA)是一种存在于精液中，由前列腺 腺管和腺泡上皮细胞在雄性激素调控下分泌的一种丝氨酸蛋白酶，属于激肽释放酶家族成 员，具有类胰凝乳蛋白酶、类胰蛋白酶和类脂酶活性。在血清中，总PSA (t-PSA)包括 两种形式游离PSA (f-PSA)和f-PSA与a 1-抗糜蛋白酶或a 2-巨球蛋白形成的复合 物(c-PSA)，半衰期很短。PSA的主要功能是水解精浆中来源于精囊、具有抑制精子活动 功能的Semenogelin I、 II和纤维连接蛋白，使精液发生液化，精子才能前向运动。天 然人PSA由244个氨基酸组成，N端的氨基酸是异亮氨酸，C端的氮基酸是脯氨酸。这种 含7%碳水化合物的单链糖蛋白由于有许多异构体，等电点较宽为pH6.8 7.2。由前列腺 分泌的PSA最初呈酶原形式，无活性，其活化过程必须由精桨中的蛋白酶进一步修饰，切 除其氨基端的前7个氨基酸，才能表现其活性状本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人前列腺特异抗原表达载体，是转化了人前列腺特异抗原基因和Ｈｉｓ－ｔａｇ基因的巴斯德毕赤酵母表达载体；所述巴斯德毕赤酵母表达载体为ｐＰＩＣ９Ｋ、ｐＰＩＣ３Ｋ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：穆海东，汪宁梅，刘纲，
申请(专利权)人：上海裕隆生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]