本发明专利技术提供了五价重组人乳头瘤病毒疫苗，它包括活性成分以及佐剂、可药用的赋型剂、稳定剂等辅料，其中活性成分包括重组ＨＰＶ的Ｌ１蛋白五聚体，所述ＨＰＶ型为ＨＰＶ６、ＨＰＶ１１、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８、ＨＰＶ３３。该疫苗能够预防９５％的尖锐湿疣和７５％的子宫颈癌。本发明专利技术所述的疫苗与目前已有的疫苗相比，质量稳定、成本低廉，防治范围更大。
Pentavalent recombinant human papillomavirus vaccine
The present invention provides pentavalent recombinant human papillomavirus vaccine, which comprises an active ingredient and adjuvant, pharmaceutically acceptable excipient and stabilizer, wherein the active ingredients include recombinant HPV L1 protein five precursor, the HPV type is HPV6, HPV11, HPV16, HPV18, HPV33. The vaccine could prevent 95% of condyloma acuminata and 75% of cervical cancer. Compared with the existing vaccine, the vaccine of the invention has the advantages of stable quality, low cost and wide control range.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及人乳头瘤病毒感染的预防和治疗领域。具体地，本专利技术涉及五价(HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV33)重组人乳头瘤病毒联合疫苗及其应用。背暴按术子宫颈癌(Cervical Cancer)每年直接造成约超过30万成年女性死亡(国 际卫生组织资料)，成为世界范围内仅次于乳腺癌的威胁妇女生命健康的第二 号杀手。科学研究证实，导致宫颈陴的罪魁祸首是一种名为人乳头瘤病毒 (Human Papill(MMvirus，简称H+V)的DNA致癌病毒。该病毒主要通过两 性接触传染，专性侵染人体上皮细l胞特别是生殖器官，部分病毒携带者在反 复感染后表现出多种临床症状。女性受高危险型(HPV16、 HPV18等)病毒感 染后，小部分患者由最初的宫颈细胞学异常，发展成I - III的宫颈内皮细胞 瘤样变(CIN I-III )和浸润性宫颈癌变(ICC)，最终发展成致命的子宫颈癌。 部分低危险型(HPV6、 HPV11)病毒感染可导致男女两性生殖器官部位的尖锐 湿疣。最新研究表明HPV除了直接导致宫颈癌，还与支气管肺癌、直肠癌、口腔癌和皮肤癌有重大关系。根据国际卫生组织冊O的有关资料，除了导致官 颈癌，HPV感染还可能解释60。/。的皮肤癌，60%的食管癌，50%的肺癌、50 %的乳腺癌、25%的口腔癌等人类重大癌症。HPV病毒在长期的进化中形成了上百种变异类型，其中HPV16、 HPV18等 13种高危险型确认能够导致宫颈癌症。HPV6、 HPV11等低危险型是造成男女 生殖部位尖锐湿疣的关键病原体。为获得良好的疗效，能同时预防多种HPV 型感染的多价疫苗成为发展方向。
技术实现思路
3(一) 要解决的技术问题本专利技术的目的之一是提供五价(HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和 HPV33)重组人乳头瘤病毒联合疫苗；本专利技术的另一目的是提供该重组人乳头瘤病毒疫苗在制备药物中的应用。(二) 技术方案本专利技术所述的五价重组人乳头瘤病毒联合疫苗，它包括活性成分以及佐 剂、可药用的赋型剂、稳定剂等辅料，其特征在于所述的活性成分包括重组 HPV的L1蛋白五聚体，所述HPV型为HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和 HPV33。所述辅料中的佐剂包括铝盐、3-0-去酰化单磷酸类脂(3D-MPL)、脂质A衍生物。所述辅料中的赋型剂包括生理盐水及其它药物上可接受的赋型剂。所述辅料中的稳定剂包括基于磷酸盐的生理缓冲液。所述HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV33的Ll蛋白五聚体含量 均为20-50yg/支疫苗。本专利技术所述的疫苗还可包括HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV33 的L2蛋白、其它能与HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV33蛋白五聚 体结合的蛋白，例如HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV33的E6/E7蛋 白。一种生产所述疫苗的方法，它包括如下步骤(1) 表达、分离、纯化重组HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV33的L1蛋白五聚体；(2) 将所得L1蛋白五聚体与辅料混合制剂，得到五价重组人乳头瘤病 毒疫苗。其中，表达、分离、纯化重组HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV33 的Ll蛋白五聚体的具体方法参见专利PCT/CN2008/000314 、 CN200810055700.5，得到纯度均为95%以上的Ll蛋白五聚体。4本专利技术公开了所述疫苗在制备用于预防和/或治疗由HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV33引起的感染和疾病的药物中的应用。本专利技术还公开了所述疫苗在制备用于预防和/或治疗由于抗体交叉反应 而由HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV33以外的其它一种或多种HPV 型引起的感染和疾病的药物中的应用。前述的感染和疾病包括子宫颈癌、尖锐湿疣、乳腺癌、支气管肺癌、直 肠癌、食道癌、咽癌、口腔癌、皮肤癌及其它与HPV密切相关的疾病。优选地，所述的感染和疾病是尖锐湿疣和子宫颈癌。本专利技术所述的疫苗可釆用多种方法作用于人体，包括肌肉和皮下注射。该疫苗在能引发对L1蛋白免疫反应的有效剂量范围内使用。用于增强免疫反应的复合物的特定剂量依照Ll复合物不同而变化。 一般而言，Ll五聚体的用量在l-5pg/Kg体重之间。上述剂量范围并不排除更高或更低剂量的可能。例如，具体的剂量会根据是否伴随有其他药物剂量而定，或取决于个人的药代动力学、药物积累和代谢速率。 (三)有益效果本专利技术所述的疫苗能够预防95 %的尖锐湿疣和75 %的子宫颈癌。该疫苗 的活性成分为HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV33L1蛋白的五聚体,该五 聚体与HPV Ll蛋白的VLP (类病毒颗粒，为HPV Ll蛋白的七十二聚体)具 有相同的免疫原性和抗原性，且相对于VLP而言具有结构更稳定、工业成本 大幅降低的优点。本专利技术所述的疫苗与目前已有的疫苗相比，质量稳定、成 本低廉，防治范围更大。具体实施例方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例l五价重组人乳头瘤病毒疫苗的制备以下步骤中涉及的基因克隆、修饰等的操作参见PCT/CN2008/000314、 CN200810055700. 5。一、HPV6 Ll五聚体的制备1、 克隆HPV6 Ll衣壳蛋白基因，克隆到T-Easy vector质粒(购自美国 Promega生物试剂公司)上。2、 修饰HPV6L1衣壳蛋白基因，并在大肠杆菌中表达将含有碱基替代 突变的载有HPV6 Ll基因插入片段的表达质粒pGEX - 6-l通过热激法导入大肠 杆菌BL21细胞之后，使用LB培养基(配方见《分子克隆》第三版，科学出版 社，2002年8月出版)进行摄氏37度培养，菌种接入后生长12小时开始用表达 诱导剂IPTG (购自美国Promega公司)诱导，9小时后收获细胞，细胞用Niro Soavi NS2006型高压匀质机在800bar下重复破碎细胞2次，显微镜检査细胞破 碎率达到90%以上。3、 HPV6L1蛋白五聚体的分离、纯化上清溶液中的L1蛋白经亲和色谱 纯化蛋白预装谷胱甘肽-琼脂糖树脂(Amersham公司生产的Glutathione S印harose 4 B)色谱柱，取浓度为50%的Glutathione Sepharose 4 B匀浆 放入色谱柱中(每200ml蛋白清液需要5-10ml匀浆)。用5-10倍的柱床体积的 缓冲液A(组分为50mmol/LTric-HCl， 200画1/L NaCl， lmmol/L EDTA ， pH 8.0)洗涤树脂，将蛋白清液加入色谱柱中，与树脂混合均匀并在室温下作用 20分钟后放出滤过液，用10倍柱床体积的缓冲液A洗涤树脂柱。用电镜观察纯 化产物，得到HPV6 Ll的五聚体。二、 釆用与前述相同的方法制备HPVll、 HPV16、 HPV18和HPV33 Ll蛋白 的五聚体。三、 活性成分与辅料混合将纯化的HPV16 Ll的五聚体与含有100mMNaCl 的标准磷酸缓冲液(见《分子克隆实验指南》第三版，)通过缓冲液置换(buffe本文档来自技高网...
【技术保护点】
五价重组人乳头瘤病毒联合疫苗，它包括活性成分以及佐剂、可药用的赋型剂、稳定剂等辅料，其特征在于所述的活性成分包括重组ＨＰＶ的Ｌ１蛋白五聚体，所述ＨＰＶ型为ＨＰＶ６、ＨＰＶ１１、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８和ＨＰＶ３３。
【技术特征摘要】
1、五价重组人乳头瘤病毒联合疫苗，它包括活性成分以及佐剂、可药用的赋型剂、稳定剂等辅料，其特征在于所述的活性成分包括重组HPV的L1蛋白五聚体，所述HPV型为HPV6、HPV11、HPV16、HPV18和HPV33。2、 根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于所述辅料中的佐剂包括 铝盐、3D-MPL、脂质A衍生物。3、 根据权利要求l所述的疫苗，其特征在于所述辅料中的稳定剂包括基 于磷酸盐的生理缓冲液。4、 根据权利要求l所述的疫苗，其特征在于所述重组HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18、 HPV33的Ll蛋白五聚体含量均为20 - 50 u g/支疫苗。5、 一种生产如权利要求1-4之任一所述疫苗的方法，它包括如下步骤(1) 表达、分离、纯化重组HPV6、 HPVll、 HPV16、 HPV18...
【专利技术属性】
技术研发人员：马润林，陈小江，
申请(专利权)人：北京康乐卫士生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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