TGF-β活化反应阻碍物质制造技术

本发明专利技术的目的在于提供可阻碍ＴＧＦ－β活化反应的物质，特别是提供可阻碍ＴＧＦ－β活化反应的肽。通过本发明专利技术，提供包含１１～５０个氨基酸残基的肽，该肽含有Ｇｌｎ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ（式中Ｘ１至Ｘ４分别独立地表示任意的氨基酸残基，Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４表示Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ以外的、且不被蛋白酶切断的序列）表示的氨基酸序列。

TGF- beta activation inhibitor

The present invention provides a blocking TGF beta activation substance, especially can inhibit TGF beta activation peptide. The invention provides contains 11 ~ 50 amino acid peptide, the peptide containing Gln - Ile - Leu - Ser - X1 - X2 - X3 - X4 - Ala - Ser - Pro (X1 to X4 independently represent amino acid residues, arbitrary type in X1 - X2 - X3 - X4 Lys - Leu - Arg - Leu, and will not be cut off) sequence protease amino acid sequence representation.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及阻碍TGF-(3活化反应的物质。
技术介绍
转化生长因子(Transforming Growth Factor (TGF) -|3) Mil强力促驻间充质细胞的细胞外基质产生同时抑制上皮细胞的增殖，导致肝纤维似肝硬化、动脉硬化、肺纤维症、硬皮症、肾机能不全(肾小球肾炎)、骨髓纤维化等硬化性疾病、类风湿性关节炎、增殖性玻璃体视网膜病变等病态；另外由于其抑制皮肤角化细胞的增殖、机能，诱导凋亡，因此与脱毛关系密切；财卜其也抑制免疫细胞的机能等，是一种表现出多种生物活性的分子量为25kD的同型二聚体多功能细胞因子。由使用针对TGF-J3的中和抗体的动t^莫型的研究可知，Mil抑制TGF-P的功能能够预防、治疗硬化性疾病。例如文献报道可以通过fOTTGF-P的中和抗体、TGF-(3受体的抗体的抗体疗法^M [吏用显性失活TGF-|3受体基因或可溶性TGF-P受体基因的基因治疗狄口制止TGF-(3的作用(日本特开2004-121001号公报；Schuppan等人，Digestion 59:385-390,1998; Qi等人，ProcNatlAcadSciUSA96:2345-2349,1999;Ueno等人，HumGeneTher 11:3342,2000)。但是，在抗体疗法或基因治疗中在必要量和给药方法方面存在问题，不能马上在临床应用。因此，进行了基于TGF-卩的作用机理的低好阻碍齐啲开发。本专利技术的研究者在动物模型上研究发现低分子化合物cytoxazone(iM卜M)l抑制TGF-P的信号传导31^柳制肝脏疾病的病态形成(国际公开^V02005/039570号)，但是尚未鉴定出Cytoxazone直接作用的耙蛋白。另外，着眼于TGF-卩作为潜活形式被产生出来、由于穀U蛋白酶的作用而转换为活性型分子(TGF-P活化反应)，在动物模型上研究显，逝OT低M合成蛋白酶抑制剂(Okuno等人，Gastroenterology 120:18784-1800,2001)或抗体(日本特开2003-252792号公报；Akita等人，Gastroenterology 123:352-364，32002)阻碍TGF-|3的活化反应，有可能能够预防疾病。但是现在的蛋白酶抑制 剂的抑制谱宽，用于人体有可能有副作用。另外现在的抗体由于有效浓度比较 高，用于人时由于必须要大量纯化抗体，费用可能会比駄。另外，本专利技术人在世界范围内首次测定了上述的TGF-卩活化反应时被切断 的部位，成功制备了识别所述切断面的抗体，并且〗顿该抗体证明了在人肝疾 病中蛋白 存TGF-P活化反应在发挥作用(国际公开WO2005/023870号)。过去，报告了一禾中由8-17个氨基酸组成的肽，其能在永生化毛乳头细胞株 中抑制TGF-卩的产生(日本特开2005-239695号公报)，但是没有揭示包括是否 抑制基因表达、是否抑制活化反应的作用机制以及在体内的有效性。另外，美国阿拉巴马大学的Murphy-UMch的研究小组ffl^t糖蛋白血小 板反应蛋白1引起的附着型TGF-I3活化反应的研究发现，血小板反应蛋白1的 第412415的序列KRFK与LAP的第54-57的序列LSKL结合弓|起活化，并且 发现合成肽KRFK活化TGF-卩，而合成肽LSKL抑制TGF-|3活化反应 (Schultz-Cheny等人，J. Biol. Chem. 270:7304-7310, 1995; Crawford等人， Cell 93:1159-1170, 1998;Ribeiro等人，J. Biol. Chem. 274:13586-13593, 1999; Murphy-Ullrich and Poczatek Cytokine & Growth Factor Reviews 11:59-69,2000 )。 作为LAP的第54-57的序列的LSKL，与本专利技术人测定的纤溶酶切断部位 K56-L57 —致。血小板反应蛋白1 M31与该部分结合^l过蛋白酶切断该部分 阻碍该部分与活性型TGF-pi肝间糊哄价结合，结果活性型TGF-pi肝从 潜 复合体中释放出来，即该部分为引起TGF-(31活化反应的部分。但是，通 过本专利技术的研究者的重复i(验，没有再现合劍太KRFK诱导TGF-(3活化反应以 及合成肽LSKL抑制TGF-P活化反应。Muiphy-Ullrich等揭示了血小板反应蛋 白1依存附着型TGF-P活化反应与肺^I夷脏的病态形成的关系，但是没有研究 与肝病的关系。
技术实现思路
本专利技术的课题在于解决上述现有技术的问题。即本专利技术要解决的技术问题 是提供能够阻碍TGF-(3活化反应的物质，特别是提供育,阻碍TGF-P活化反应本专利技术人为解决战技术问^it行了深入研究，在本专利技术人的TGF-(3在肝脏通过称为纤溶酶、血浆mi太释放酶的蛋白酶被活化，从而发挥生物活性这一 过去的发现基础上，成功地合成了會嫩在低浓度稳定地抑制纤溶隞血浆激肽释放謝衣存性TGF-(3活化反应的肽，从而完成了本专利技术。艮P， M31本专利技术提供(1) 包含11~50个氨基酸残基的肽，该肽含有 Gln-Ile-Leu-Ser-Xl-X2-X3-X4-Ala-Ser-Pro (式中XI至X4分别独立地表示任意 的氨基酸残基，XI-X2-X3-X4新Lys-Leu-Arg-Leu以外的、且不被蛋白酶切断 的序列)表示的氨基,列。(2) 如(1)所述的肽，其中X1和X3为碱性氨基酸以外的氨基酸残基。(3) 包含ll 50个氨基l^戋基的肽，其含有下记的(i)至(iv)中的任意的 氨基酸序列。<formula>formula see original document page 5</formula>(4) 如(1) ~ (3)中任一项所述的肽，其长度为11 20个氨基^^基。(5) 肽，其包含Gln-Ue-Leu-Ser-Xl-X2-X3-X4-Ala-Ser-Pro (式中XI至X4 分别独立i條示任意的氨基酸残基，Xl-X2-X3-X4标Lys-Leu-Arg-Leu以外 的、且不被蛋白酶切断的序列)表示的氨基,列。(6) 活性型TGF-P生成抑制剂，其含有(1) (5)中任一项所述的肽。(7) 用于治疗和/或预防与TGF-卩相关的病态的药物，其含有(1) (5) 中任一项所述的肽。(8) 肝再生 剂或肝纤维化抑制剂，其含有(1) (5)中任一项所述的肽。在活体内，特别是在肝脏疾病的病态形成过程中，TGF-P的特定部位被蛋 白酶切断，释放出活性型TGF-P。活性型TGF-P诱导肝纤维俗肝硬化，抑制肝 细胞的增殖、即肝再生。本专利技术的肽作为作用于该切断部位的蛋白酶的诱饵， 竞争性地抑制TGF-P活化反应，能够高效地抑制与TGF-P相关的病态的形成。附图说明图1表示QP肽、QPA肽和T200肽。图2表示来自TGF-P活化蛋白酶切断序列的月M肝星状细胞的活化抑制。 图3 g来自TGF-p活化蛋白酶切断序列的月树肝再生不全的改善(照片)。 图4 g来自TGF-P活化蛋白酶切断序列的月树肝再生不全的改善(数值化)。图5表示QPQ肽的序列。图6表示QP肽和QPQ肽对LAP切断反应的抑制。本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含１１～５０个氨基酸残基的肽，该肽含有Ｇｌｎ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４－Ａｌａ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ（式中Ｘ１至Ｘ４分别独立地表示任意的氨基酸残基，Ｘ１－Ｘ２－Ｘ３－Ｘ４表示Ｌｙｓ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ以外的、且不被蛋白酶切断的序列）表示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
JP 2007-3-8 2007-0582221.包含11～50个氨基酸残基的肽，该肽含有Gln-Ile-Leu-Ser-X1-X2-X3-X4-Ala-Ser-Pro(式中X1至X4分别独立地表示任意的氨基酸残基，X1-X2-X3-X4表示Lys-Leu-Arg-Leu以外的、且不被蛋白酶切断的序列)表示的氨基酸序列。2. 权利要求1所述的肽，其中XI和X3为碱性氨基酸以外的氨基酸残基。3. 包含ll 50个氨基^gl基的肽，其含有下记(1) (4)中的任意的氨基,列，<formula>formula see original documen...

【专利技术属性】
技术研发人员：小岛聪一，寺冈龙太郎，
申请(专利权)人：独立行政法人理化学研究所，
类型：发明
国别省市：JP[日本]