一种快速制作胰岛素抵抗模型的方法技术

本发明专利技术提供了一种快速制作胰岛素抵抗模型的方法，所述的方法是对体重为３００～４５０ｇ的雄性近交系Ｗｉｓｔａｒ大鼠，禁食不禁水４－６ｈ后，用乌拉坦进行麻醉，迅速建立胰岛素抵抗模型。本发明专利技术采用乌拉坦进行麻醉，９０％以上的大鼠可出现胰岛素抵抗，葡萄糖的输注速率达到，最低值０．１ｍｌ／ｈ，只要有增强胰岛素活性的物质或胰岛素激动剂，胰岛素抵抗现象就明显改变，药物筛选速度快、观察明显、方法简单。

【技术实现步骤摘要】
一种快速制作胰岛素抵抗模型的方法(一)
本专利技术涉及一种快速制作胰岛素抵抗模型的方法。(二)
技术介绍
胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)指体内血液循环中正常浓度的胰岛素引起的生物效应低于正常的状态。II型糖尿病、高血压病、冠心病、肥胖症及脂质代谢紊乱等疾病常伴有胰岛素抵抗。由于IR研究常需要取肝脏、骨胳肌等组织，很不方便，所以制备IR动物模型是非常必要的。现有技术胰岛素抵抗模型的制备中，通常采用戊巴比妥钠麻醉，但是90％以上的大鼠不产生胰岛素抵抗，达到稳定态的葡萄糖输注速率在2～2.5ml/h左右，筛选药物效果不够显著。(三)
技术实现思路
本专利技术即是为了提供一种药物筛选效果显著的快速制作胰岛素抵抗模型的方法。为达到专利技术目的本专利技术采用的技术方案是：一种快速制作胰岛素抵抗模型的方法，所述的方法是对体重为300～450g的雄性近交系Wistar大鼠，禁食不禁水4-6h后，用乌拉坦进行麻醉，迅速建立胰岛素抵抗模型。所述乌拉坦浓度为10～30％，对Wistar大鼠给药量为0.5ml/100g。所述乌拉坦浓度优选为20％。-->所述乌拉坦给药方式为腹腔注射给药。所述雄性近交系Wistar大鼠的体重优选为300～400g。具体的，所述的方法是选用300～450g的雄性近交系Wistar大鼠，禁食不禁水4～6h后，按0.5ml/100g给药量腹腔注射浓度为20％乌拉坦，迅速建立胰岛素抵抗模型。本专利技术所述的快速制作胰岛素抵抗模型的方法的有益效果主要体现在：采用乌拉坦进行麻醉，90％以上的大鼠可出现胰岛素抵抗，葡萄糖的输注速率达到，最低值0.1ml/h，只要有增强胰岛素活性的物质或胰岛素激动剂，胰岛素抵抗现象就明显改变，药物筛选速度快、观察明显、方法简单。(四)说明书附图图1为PPAR激动剂对大鼠胰岛素抵抗模型稳态下的GIR影响；图2为乌拉坦麻醉与戊巴比妥钠麻醉正糖钳试验GIR的比较。(五)具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：实施例1：具体方法：取300～450g的雄性近交系Wistar大鼠，禁食不禁水4～6h后，腹腔注射20％乌拉坦麻醉(0.5ml/100g)。仰位固定于大鼠固定板上，切开颈部正中皮肤。分离右侧颈外静脉，结扎远心端，用眼科剪作切口，向近心端插入连接三通旋塞的插管(插管中预先注入80u/ml肝素生理盐水溶液)。用眼科镊夹住静脉壁和插管，向前行进0.5cm，结扎固定插管。-->分离左侧颈总动脉，结扎远心端，用小动脉夹夹住近心端，用眼科剪作切口，往近心端反向插入连接1ml针筒的插管(插管中预先注入50u/ml肝素生理盐水溶液)。放开小动脉夹，用眼科镊夹住动脉壁和插管，向前行进0.5cm，结扎固定插管。颈静脉注射50ul/ml肝素0.1ml/100g作预防抗凝。三通旋塞的一个进口连接胰岛素输注微量泵另一个进口连接20％葡萄糖输注微量泵，避免管腔中出现气泡。待插管手术和输注装置安装完毕后，开始实验：(1)用1ml针筒从右颈动脉取血0.5ml，用手术钳夹住插管，用OneTouchRUltra血糖仪和试纸测定基础血糖约需5ul，放开手术钳，将剩余血再注回颈总动脉，插管头上加50ul肝素生理盐水溶液。(2)胰岛素以速率为0.6ml/h(10μl/min)恒速输注，胰岛素输注10min后，以(1)同样方法取右颈动脉血测血糖值，如血糖低于基础值，则开始输注20％葡萄糖，每隔5min取血，测定血糖。根据血糖值不断调整葡萄糖输注速率，使血糖维持在5mmol/L上下，一般30～60min可达稳态。达稳态后，每5min取血测血糖，记录稳态下6～8次葡萄糖输注速率的平均值作为GIR(glucose infusion rate)取稳态下6次血糖的平均值作为稳态下的血糖(BG)。当大鼠产生胰岛素抵抗时，血糖持续升高，要求葡萄糖的流量更低，将20％葡萄糖溶液改为10％葡萄糖溶液。当血糖继续升高，则再更换为5％葡萄糖溶液。观察大鼠胰岛素抵抗模型稳态下的血糖(BG)和葡萄糖输注速率(GIR)。分为以下四组：空白对照组：0.5％CMC-Na溶液15ml/kg阳性药A组：罗格列酮15mg/kg-->PPAR激动剂B组：15mg/kgPPAR激动剂C组：15mg/kg结果分析：由图1显示，试验大鼠以速率为0.6ml/h(10μl/min)恒速输注胰岛素，大鼠稳态血糖值在5mmol/L上下，空白对照组以1.0ml/h速率始输注20％葡萄糖，为维持稳态血糖，葡萄糖的输注速率(GIR)迅速下降，60min后，大鼠机体组织对胰岛素的敏感性极度低下，葡萄糖输注速率(GIR)降低至0.1ml/h以下，产生胰岛素抵抗，120min后仍未恢复。而给予阳性药A、PPAR激动剂B、PPAR激动剂C组大鼠在稳态血糖下，葡萄糖输注速率(GIR)继续上升，分别达到1.33m1/h、1.34ml/h，1.1ml/h后开始下降，葡萄糖输注60min后达到稳定，葡萄糖输注速率(GIR)最低值分别为0.93ml/h、0.96ml/h、0.87ml/h，90min后葡萄糖输注速率(GIR)回升至初始值，并有继续上升的趋势，大鼠机体组织对胰岛素的敏感性下降不明显，未产生明显的胰岛素抵抗现象，PPAR激动剂B、PPAR激动剂C组与空白对照组比，差异显著(P＜0.01)，其作用效果，PPAR激动剂B与阳性药A相当，PPAR激动剂C的疗效略低于阳性药A，但无显著性差异(P＞0.05)。实施例2：乌拉坦麻醉与戊巴比妥钠麻醉正糖钳试验比较1.实验动物品种：Wistar大鼠80只；级别：清洁级；性别：雄性；重量：350～400g2.实验材料和试剂WZ-50C2型单道微量注射泵；胰岛素注射液；肝素钠注射液；50％葡萄糖注射液；10％葡萄糖注射液；5％葡萄糖注射液；0.9％氯化钠注射液；OneTouchR Ultra血糖仪、试纸；ST-01三通旋塞；PT12(30min)压力管；-->插管制作：静脉输液针剪去针头部分，放入100℃水中，拉长至针头细、冷却，制成约0.2mm直径的插管；小动脉夹；静脉输液针；手术线；眼科剪；眼科镊；一次性1ml注射器；40W手术灯；大鼠固定板；止血钳；20ml一次性注射器；5ml一次性注射器；大鼠灌胃针；分析天平等。3.试验方法3.1手术方法取350～400g左右的雄性Wistar大鼠20只分为2组：20％乌拉坦(0.5ml/100g)麻醉组和3％戊巴比妥钠(0.15ml/100g)麻醉组，每组10只，禁食不禁水5h后，分别腹腔注射20％乌拉坦(0.5ml/100g)麻醉或3％戊巴比妥钠(0.15ml/100g)麻醉.仰位固定于大鼠固定板上，切开颈部正中皮肤。(1)分离右侧颈外静脉，结扎远心端，用眼科剪作切口，向近心端插入连接三通旋塞的插管(插管中预先注入80u/ml肝素生理盐水溶液)。用眼科镊夹住静脉壁和插管，向前行进0.5cm，结扎固定插管。(2)分离左侧颈总动脉，结扎远心端，用小动脉夹夹住近心端，用眼科剪作切口，往近心端反向插入连接1ml针筒的插管(插管中预先注入80u/ml肝素生理盐水溶液)。放开小动脉夹，用眼科镊本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种快速制作胰岛素抵抗模型的方法，其特征在于所述的方法是对体重为３００～４５０ｇ的雄性近交系Ｗｉｓｔａｒ大鼠，禁食不禁水４－６ｈ后，用乌拉坦进行麻醉，迅速建立胰岛素抵抗模型。

【技术特征摘要】
1.一种快速制作胰岛素抵抗模型的方法，其特征在于所述的方法是对体重为300～450g的雄性近交系Wistar大鼠，禁食不禁水4-6h后，用乌拉坦进行麻醉，迅速建立胰岛素抵抗模型。2.如权利要求1所述的快速制作胰岛素抵抗模型的方法，其特征在于所述乌拉坦浓度为10～30％，对Wistar大鼠给药量为0.5ml/100g。3.如权利2所述的快速制作胰岛素抵抗模型的方法，其特征在于所述乌拉坦浓度为20％。4.如权利要求3所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈民利，寿旗扬，林琳，王辉，周卫民，王德军，徐孝平，应华忠，吕建敏，
申请(专利权)人：浙江中医学院，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]