一种胰岛素抵抗动物模型的构建方法技术

本发明专利技术涉及一种胰岛素抵抗动物模型的构建方法，具体指利用SD大鼠，尾静脉注射葡萄糖氧化酶（400U/kg体重）诱导产生胰岛素抵抗。对糖耐量和胰岛素耐量的统计分析以及胰岛素信号传导的测定表明：本发明专利技术利用葡萄糖氧化酶构建的胰岛素抵抗大鼠模型是可行的，可作为胰岛素抵抗以及2型糖尿病的发病机制和药物作用机理的研究模型。与现有的模型构建技术相比，本发明专利技术构建的胰岛素抵抗大鼠模型具有造模方法简单、成模率高、成本低、周期短、及重现性好等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及，具体说，是涉及一种大鼠胰岛素抵抗模型的构建方法。
技术介绍
动物模型的构建是医学研究中的一项很重要的技术。构建与人类发病相似的疾病模型，可以克服人类本身发生疾病潜伏期长、影响因素多、发生发展缓慢、发病机制复杂等因素的制约，更好地反应疾病发生、发展的规律，并有利于研究不便于在人类本身进行研究的疾病。常用的动物模型主要包括自发性动物模型、转基因动物模型和实验性动物模型。 自发性动物模型、转基因动物模型应用价值较高，但其造模成本高、技术饲养条件要求高等特点限制了这些动物模型的普遍应用。实验性动物模型操作简单、成本低、成模率较高，目前，这类动物模型被广泛使用。近年来，随着人们生活方式的转变，糖尿病的发病率逐年增加。美国糖尿病协会推测，至2030年，全球将有35亿人患有糖尿病及其并发症。最近，我国的一项调查显示，目前我国糖尿病患病人数已达9200万，仅次于印度。糖尿病对全球尤其是发展中国家的经济发展产生了巨大的压力，据统计，发展中国家用于糖尿病方面的费用支出超出了卫生费用预算的10%。糖尿病患者中90%以上是2型糖尿病患者，胰岛素抵抗是2型糖尿病的基本特征。 胰岛素抵抗是指肝、肌肉、脂肪等胰岛素作用的靶组织，不能响应胰岛素导致胰岛素的功能减弱甚至缺失的病理状态。除2型糖尿病之外，胰岛素抵抗还与高血压、动脉粥样硬化、代谢综合征的发生发展密切相关。因此，对胰岛素抵抗的发病机制及防治研究显得尤为重要。 目前，胰岛素抵抗的发病机制还不明确，但可以确定的是，氧化应激在胰岛素抵抗的发生中扮演着重要的角色。在正常的胰岛素信号传导中，胰岛素与其受体结合启动胰岛素信号，激活受体内源性蛋白酪氨酸激酶活性，导致受体细胞质一侧的酪氨酸磷酸化。激活的受体，又募集并磷酸化一系列底物分子。进而激活磷脂酰肌醇-3-激酶(Ph0Sph0in0Sitide-3-kinase，PI3K) /蛋白激酶B (Protein kinase B，Akt)。蛋白激酶B是胰岛素信号传导过程中的一种重要的激酶，胰岛素刺激条件下其磷酸化水平的高低常被用来作为胰岛素信号传导是否正常的指标。胰岛素抵抗发生时，胰岛素刺激的蛋白激酶B磷酸化水平明显降低。现有的胰岛素抵抗动物模型主要是以高脂饮食长期喂养诱导，实验周期过长，不适于进行大量胰岛素抵抗防治药物的筛选。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供成模率高，它造模周期短以及成本低的。为实现上述专利技术目的，本专利技术的技术方案如下，其特征在于尾静脉注射葡萄糖氧化酶诱导动物产生氧化应激，得到胰岛素抵抗动物模型。所述的胰岛素抵抗动物模型的构建方法，它包括以下步骤(1)选用SD大鼠，清洁级，雄性，体重180 士 220 g，动物自由摄食饮水。(2)以400 U/kg体重的剂量尾静脉注射葡萄糖氧化酶，连续给药三天后，得到动物模型。所述的选用SD大鼠，清洁级、雄性、体重180 士 220 g，分别标记；尾静脉注射葡萄糖氧化酶(400 U/kg)，对照组注射等量生理盐水，自由摄食饮水。连续给药3天后，进行腹腔注射糖耐量和胰岛素耐量试验，得到动物模型。上述方法所得到的动物模型的验证方法包括测定腹腔注射糖耐量、胰岛素耐量水平以及胰岛素刺激的蛋白激酶B的磷酸化水平。血糖水平采用常规方法进行测定。腹腔注射葡萄糖耐量试验(Intraperitoneal glucose tolerance test, IPGTT)的试验方法为分别将正常对照组和模型组动物禁食6 小时，测定空腹血糖值，以100mg/ml葡萄糖溶液腹腔注射，葡萄糖用量为lg/kg体重，分别于30分钟、60分钟、120分钟测定各组动物的血糖值。以各个时间点的血糖值做糖耐量曲线，对模型组和正常对照组各时间点进行t检验，进行统计分析。胰岛素耐量试验(Insulin tolerance test, ITT)的试验方法为分别将正常对照组和模型组动物禁食4小时，测定空腹血糖值，腹腔注射胰岛素，注射剂量为0. 75U/kg体重，分别于30分钟、60分钟、120分钟测定各组动物的血糖值。以各个时间点的血糖值做胰岛素耐量曲线，对模型组和正常对照组各时间点进行t检验，进行统计分析。胰岛素刺激的蛋白激酶B磷酸化水平由Western blot进行测定。本专利技术构建的胰岛素抵抗动物模型的测定结果表明模型组动物糖耐量和胰岛素耐量与正常对照组动物有显著差异，模型组动物胰岛素刺激的蛋白激酶B磷酸化水平显著降低，表明模型组动物已经发生明显的胰岛素抵抗，从而验证了本专利技术建立的胰岛素抵抗动物模型。本专利技术方法的特点为使用葡萄糖氧化酶在动物体内产生过量自由基，诱导氧化应激损伤，进而诱导胰岛素抵抗的发生。应用本方法构建的胰岛素抵抗动物模型具有与人类胰岛素抵抗相似的特征表现，是研究胰岛素抵抗和2型糖尿病发病机制以及进行防治药物筛选的理想模型。与现有技术相比，本专利技术构建的大鼠胰岛素抵抗模型，具有造模方法简单、成模率高、成本低、周期短、及重现性好等优点。附图说明下面结合实施例附图对本专利技术做进一步说明图1腹腔注射葡萄糖耐量试验中，模型组与正常组相比，各时间点血糖显示图； 图2胰岛素耐量试验中，模型组与正常组相比，各时间点血糖显示图； 图3与正常对照相比，模型组胰岛素刺激的蛋白激酶B磷酸化显示图。具体实施例方式下面通过实例对本专利技术做进一步说明，其目的在于更好的理解本专利技术的内容，而非限制本专利技术的保护范围。实施例1(1)选用SD大鼠，清洁级，雄性，体重180 士 220 g，动物自由摄食饮水。(2)以400 U/kg体重的剂量尾静脉注射葡萄糖氧化酶，连续给药三天后，得到动物模型。所述的选用SD大鼠，清洁级、雄性、体重180 士 220 g，分别标记；尾静脉注射葡萄糖氧化酶(400 U/kg)，对照组注射等量生理盐水，自由摄食饮水。连续给药3天后，进行腹腔注射糖耐量和胰岛素耐量试验，得到动物模型。上述方法所得到的动物模型的验证方法包括测定腹腔注射糖耐量、胰岛素耐量水平以及胰岛素刺激的蛋白激酶B的磷酸化水平。血糖水平采用常规方法进行测定。腹腔注射葡萄糖耐量试验(Intraperitoneal glucose tolerance test, IPGTT)的试验方法为分别将正常对照组和模型组动物禁食6 小时，测定空腹血糖值，以100mg/ml葡萄糖溶液腹腔注射，葡萄糖用量为lg/kg体重，分别于30分钟、60分钟、120分钟测定各组动物的血糖值。以各个时间点的血糖值做糖耐量曲线，对模型组和正常对照组各时间点进行t检验，进行统计分析。实施例21.实验仪器血糖测定仪(美国强生公司)、精密电子天平、Iml注射器等。2.实验动物与材料2.1实验动物SD大鼠，清洁级，雄性，体重180 士 220 g，有第四军医大学实验动物中心提供。2.2实验材料葡萄糖氧化酶、生理盐水、苦味酸、血糖试纸、胰岛素、葡萄糖。3.实验方法30只SD大鼠随机分为正常对照组和模型组，各15只。以400U/kg的剂量尾静脉注射葡萄糖氧化酶(生理盐水溶解，600U/ml)，对照组注射相同体积生理盐水。连续给药三天后， 于第4天，正常对照组和模型组各取10只动物，进行腹腔注射葡萄糖耐量试验和胰岛素耐量试验。腹腔注射葡萄糖耐量试验(Intraperitoneal glucose to本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种胰岛素抵抗动物模型的构建方法，其特征在于：尾静脉注射葡萄糖氧化酶诱导动物产生氧化应激，得到胰岛素抵抗动物模型。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王欣，海春旭，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：87