一种包含HPV多组多型别的多肽链组合及制备方法技术

技术编号：41331027 阅读：3 留言：0更新日期：2024-05-20 09:52

本发明专利技术提供了一种包含HPV多组多型别的多肽链组合，包括扩增寡核苷酸，所述扩增寡核苷酸包含HPV‑6、HPV‑11、HPV‑16、HPV‑18、HPV‑31、HPV‑33、HPV‑35、HPV‑39、HPV‑45、HPV‑51、HPV‑52、HPV‑56、HPV‑58、HPV‑59、HPV‑66、HPV‑68多肽组成的HPV序列；所述扩增寡核苷酸还包括多肽表位的结合位点，相邻多肽的结合位点之间通过靶向肽键连接。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种多肽合成制备技术，特别是一种包含hpv多组多型别的多肽链组合。

技术介绍

1、宫颈癌是妇女中最主要的肿瘤疾病之一，全球发病率仅次于乳腺癌。宫颈癌发生的一个主要病因是人类乳头瘤病毒(hpv)的感染。根据流行病学和生化数据，将hpv分为两组。hpv的高危人群最常见的hpv类型包括hpv-6、11、16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68。专利号为kr1020220155712a的专利公开了一种人乳头瘤病毒和宫颈癌检测用多克隆抗体及其制备方法，该方法将hpv-6、11、16、18涉及的多肽组合在一起。但是该技术对于其他类型的hpv多肽并未组合在一起，当进行检测时需要用多组抗原试剂进行检测。

2、人乳头瘤病毒(hpv)组合是非常关键的行为，常见的位点包括pou5f1b、fhit、klf12、klf5、lrp1b和leprel1。但是这些位点在200多种hpv类型的多肽进行组合过程中，还是过少，对于常见的多肽整合而言，也存在技术上的困难。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种包含hpv多组多型别的多肽链组合和制备方法，将16中常见的hpv病毒涉及的多肽进行组合。

2、一种包含hpv多组多型别的多肽链组合，包括扩增寡核苷酸，所述扩增寡核苷酸包含hpv-6、hpv-11、hpv-16、hpv-18、hpv-31、hpv-33、hpv-35、hpv-39、hpv-45、hpv-51、hpv-52、hpv-

3、进一步地，所述多肽表位的结合位点包括下述的至少一个：agtr2(4，int4)、dmd(4，gen4)、lrp1b(6，gen6)、cdh7(4，int4)、fhit(9，gen9)、dcc(4，gen2，int2)、cadm2(4，gen2，int2)、hs3st4(4，gen3，int1)、leprel1(5，gen3，int2)、klf5(7，int7)、klf12(8，int8)、hmga2(8，gen1，int7)、msx2(4，int4)、pou5f1b(10，int10)、cpne8(4，gen2，int2)、dlg2(5，gen5)、sema3d(5，int5)、c9orf85(4，gen4)。

4、一种制备包含hpv多组多型别的多肽链组合的方法，采用fmoc固相多肽合成法进行合成，包括以下步骤：

5、步骤s100，以fmoc氨基树脂为载体，hpv-6、hpv-11、hpv-16、hpv-18、hpv-31、hpv-33、hpv-35、hpv-39、hpv-45、hpv-51、hpv-52、hpv-56、hpv-58、hpv-59、hpv-66、hpv-68多肽按照fmoc固相合成策略偶联合成若干片段；

6、步骤s200，对每个片段进行酪氨酸硫酸化；

7、步骤s300，从c端到n端依次缩合fmoc保护氨基酸，获得线性肽氨基树脂；采用二甲基酰胺和甲基亚砜基作为保护基；

8、步骤s400，分离多肽和fmoc氨基树脂，脱出保护基；

9、步骤s500，过滤、旋干、萃取、离心、冻干，得到线性肽粗品；

10、步骤s600，进一步分离纯化，得到线性肽；

11、步骤s700，氧化折叠所得线性肽，形成二硫键，得到多肽。

12、进一步地，步骤s100中多肽表位的结合位点包括下述的至少一个：gtr2(4，int4)、dmd(4，gen4)、lrp1b(6，gen6)、cdh7(4，int4)、fhit(9，gen9)、dcc(4，gen2，int2)、cadm2(4，gen2，int2)、hs3st4(4，gen3，int1)、leprel1(5，gen3，int2)、klf5(7，int7)、klf12(8，int8)、hmga2(8，gen1，int7)、msx2(4，int4)、pou5f1b(10，int10)、cpne8(4，gen2，int2)、dlg2(5，gen5)、sema3d(5，int5)、c9orf85(4，gen4)；每一位点中至少包含一个半胱氨酸残基。

13、进一步地，二甲基酰胺作为半胱氨酸侧链的保护基，甲基亚砜基作为酪氨酸侧链的硫酸根保护基。

14、进一步地，步骤s400中，脱除二甲基酰胺的试剂为乙酸铵、氢化铝锂、二氯甲烷混合试剂；脱除甲基亚砜基的试剂为氢化铝锂、二氯甲烷混合试剂。

15、一种包含hpv多组多型别的多肽链组合的试剂，包括dna提取试剂、pcr扩增用试剂和引物；其中dna提取试剂包含hpv-6、hpv-11、hpv-16、hpv-18、hpv-31、hpv-33、hpv-35、hpv-39、hpv-45、hpv-51、hpv-52、hpv-56、hpv-58、hpv-59、hpv-66、hpv-68多肽组成的hpv序列；引物由seq id no：1至seq id no：150所示的核苷酸序列。

16、进一步地，所述dna提取试剂中的每一多肽包括下述的至少一个位点：agtr2(4，int4)、dmd(4，gen4)、lrp1b(6，gen6)、cdh7(4，int4)、fhit(9，gen9)、dcc(4，gen2，int2)、cadm2(4，gen2，int2)、hs3st4(4，gen3，int1)、leprel1(5，gen3，int2)、klf5(7，int7)、klf12(8，int8)、hmga2(8，gen1，int7)、msx2(4，int4)、pou5f1b(10，int10)、cpne8(4，gen2，int2)、dlg2(5，gen5)、sema3d(5，int5)、c9orf85(4，gen4)。

17、本专利技术与现有技术相比，具有以下优势：(1)将常见的16中hpv类型的多肽组合在一起，在检测场景下，方便对患者进行测试；(2)结合位点从常见的6中提升到18中，大大增加了hpv多肽组合的可能性。

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【技术保护点】

1.一种包含HPV多组多型别的多肽链组合，其特征在于，包括扩增寡核苷酸，所述扩增寡核苷酸包含HPV-6、HPV-11、HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-66、HPV-68多肽组成的HPV序列；

2.根据权利要求1所述的组合，其特征在于，所述多肽表位的结合位点包括下述的至少一个：AGTR2(4，INT4)、DMD(4，GEN4)、LRP1B(6，GEN6)、CDH7(4，INT4)、FHIT(9，GEN9)、DCC(4，GEN2，INT2)、CADM2(4，GEN2，INT2)、HS3ST4(4，GEN3，INT1)、LEPREL1(5，GEN3，INT2)、KLF5(7，INT7)、KLF12(8，INT8)、HMGA2(8，GEN1，INT7)、MSX2(4，INT4)、POU5F1B(10，INT10)、CPNE8(4，GEN2，INT2)、DLG2(5，GEN5)、SEMA3D(5，INT5)、C9orf85(4，GEN4)。

3.一种制备包含HPV多组多型别的多肽链组合的方法，其特征在于，采用Fmoc固相多肽合成法进行合成，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤S100中多肽表位的结合位点包括下述的至少一个：GTR2(4，INT4)、DMD(4，GEN4)、LRP1B(6，GEN6)、CDH7(4，INT4)、

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，二甲基酰胺作为半胱氨酸侧链的保护基，甲基亚砜基作为酪氨酸侧链的硫酸根保护基。

6.根据权利要求3或5所述的方法，其特征在于，步骤S400中，脱除二甲基酰胺的试剂为乙酸铵、氢化铝锂、二氯甲烷的混合试剂；脱除甲基亚砜基的试剂为氢化铝锂、二氯甲烷的混合试剂。

7.一种包含HPV多组多型别的多肽链组合的试剂，其特征在于，包括DNA提取试剂、PCR扩增用试剂和引物；其中

8.根据权利要求7所述的试剂，其特征在于，所述DNA提取试剂中的每一多肽包括下述的至少一个位点：AGTR2(4，INT4)、DMD(4，GEN4)、LRP1B(6，GEN6)、CDH7(4，INT4)、FHIT(9，GEN9)、DCC(4，GEN2，INT2)、CADM2(4，GEN2，INT2)、HS3ST4(4，GEN3，INT1)、LEPREL1(5，GEN3，INT2)、KLF5(7，INT7)、KLF12(8，INT8)、HMGA2(8，GEN1，INT7)、MSX2(4，INT4)、POU5F1B(10，INT10)、CPNE8(4，GEN2，INT2)、

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【技术特征摘要】

1.一种包含hpv多组多型别的多肽链组合，其特征在于，包括扩增寡核苷酸，所述扩增寡核苷酸包含hpv-6、hpv-11、hpv-16、hpv-18、hpv-31、hpv-33、hpv-35、hpv-39、hpv-45、hpv-51、hpv-52、hpv-56、hpv-58、hpv-59、hpv-66、hpv-68多肽组成的hpv序列；

2.根据权利要求1所述的组合，其特征在于，所述多肽表位的结合位点包括下述的至少一个：agtr2(4，int4)、dmd(4，gen4)、lrp1b(6，gen6)、cdh7(4，int4)、fhit(9，gen9)、dcc(4，gen2，int2)、cadm2(4，gen2，int2)、hs3st4(4，gen3，int1)、leprel1(5，gen3，int2)、klf5(7，int7)、klf12(8，int8)、hmga2(8，gen1，int7)、msx2(4，int4)、pou5f1b(10，int10)、cpne8(4，gen2，int2)、dlg2(5，gen5)、sema3d(5，int5)、c9orf85(4，gen4)。

3.一种制备包含hpv多组多型别的多肽链组合的方法，其特征在于，采用fmoc固相多肽合成法进行合成，包括以下步骤：

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步...

【专利技术属性】
技术研发人员：骆峻，刘雅丹，何纪科，
申请(专利权)人：江苏卫生健康职业学院，
类型：发明
国别省市：

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