【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，具体涉及一种具有肌肉靶向性的腺相关病毒突变体及其应用。
技术介绍
1、腺相关病毒(adeno-associated virus，aav)是一类包裹着线性单链dna基因组的无包膜小病毒，属于微小病毒科(parvoviridae)依赖病毒属(dependovirus)，需要辅助病毒(通常为腺病毒)参与复制。aav基因组为单链dna片段，包含于非包膜病毒衣壳中，可分成三个功能区域：两个开放阅读框(rep基因、cap基因)和末端反向重复序列(itr)。重组腺相关病毒载体(raav)源于非致病的野生型腺相关病毒，由于其具有宿主范围广、非致病性、低免疫原性、长期稳定表达外源基因、良好的扩散性能和物理性质稳定等优点，作为基因转移载体在基因治疗和疫苗研究中得到广泛应用。在医学研究中raav被用于多种疾病的基因治疗的研究(包括体内、体外实验)，如基因功能研究、构建疾病模型、制备基因敲除鼠等方面。
2、近年来，基因治疗已成为治疗肌肉类疾病的一种新型方法。以杜氏肌营养不良(dmd)为例，它是一种罕见的致命性神经肌肉遗传病，dmd是由编码肌营养不良蛋白的基因中的改变或突变引起的。dmd的症状通常出现在婴幼儿身上，患者会经历发育迟缓，如行走、爬楼梯或从坐姿站立困难。srp-9001(aavrh74.mhck7.micro-dystrophin)是sarepta/罗氏的基因治疗候选产品，利用mhck7启动子与aavrh74载体结合，以递送微型抗肌营养不良蛋白转基因，该基因能够产生较小但起作用的肌营养不良蛋白(称为微肌营养
3、综合上述，虽然aav是目前应用广泛且最安全的基因治疗载体之一，但体内更低剂量的肌肉靶向等方面仍需进一步改进。因此，开发出具有更好治疗效果、降低治疗剂量、减少副作用和使用成本的血清型类型，以满足患者的需求，并推动基于aav的基因治疗方法朝向规模化、社会化应用。这对于提升基因治疗的效益，服务于广大患者具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种腺相关病毒突变体及其应用，该腺相关病毒突变体具有肌肉靶向性，特异性高、安全性好。
2、为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：
3、第一方面，本专利技术提供了一种腺相关病毒衣壳蛋白突变体，所述腺相关病毒衣壳蛋白突变体插入有异源肽；所述异源肽的氨基酸序列为如seq id no.1～4中任一所示的序列。
4、本专利技术的腺相关病毒衣壳蛋白突变体对不同肌肉组织(股四头肌、肱二头肌和腹肌等)有良好的靶向性，与对照组aav9相比，肌肉靶向性最多提高了约10倍，并且肝脏嗜性也低于对照组2～3倍，特异性好。
5、作为本专利技术所述的腺相关病毒衣壳蛋白突变体的优选实施方式，所述异源肽的插入位点位于腺相关病毒衣壳蛋白氨基酸583和591之间。
6、作为本专利技术所述的腺相关病毒衣壳蛋白突变体的优选实施方式，其氨基酸序列为如seq id no.9～12中任一所示的序列。
7、第二方面，本专利技术提供了一种编码腺相关病毒衣壳蛋白突变体的核酸，其核苷酸序列包含如seq id no.5～8所示的异源肽核苷酸序列。
8、作为本专利技术所述的编码腺相关病毒衣壳蛋白突变体的核酸的优选实施方式，其核苷酸序列为如seq id no.13～seq id no.16中任一所示的序列。
9、第三方面，本专利技术提供了一种重组腺相关病毒，包括所述的腺相关病毒衣壳蛋白突变体。
10、本专利技术的腺相关病毒衣壳蛋白突变体构建得到的重组腺相关病毒载体特异性更高，安全性更好，应用范围广
11、作为本专利技术所述的重组腺相关病毒的优选实施方式，还包括异源目的基因。
12、作为本专利技术所述的重组腺相关病毒的优选实施方式，所述异源目的基因编码干扰rna、适配体、内切核酸酶、指导rna中任一种基因产物。
13、第四方面，本专利技术将所述的腺相关病毒衣壳蛋白突变体、所述的重组腺相关病毒在制备用于将基因产物递送至受试者细胞或组织中的药物或制剂中应用。
14、作为本专利技术所述的应用的优选实施方式，所述细胞为肌肉细胞；所述组织为肌肉组织。
15、第五方面，本专利技术将所述的腺相关病毒衣壳蛋白突变体、所述的重组腺相关病毒在制备用于预防和/或治疗肌肉类疾病的药物递送工具中应用。
16、第六方面，本专利技术将所述的腺相关病毒衣壳蛋白突变体、所述的重组腺相关病毒在制备肌肉类疾病治疗药物中应用。
17、作为本专利技术所述的应用的优选实施方式，所述肌肉类疾病包括但不限于杜氏肌营养不良(dmd)、becker型肌营养不良症(bmd)、x连锁肌小管性肌病(xlmtm)、肢带型肌营养不良(lgmd)、强直性肌营养不良症、面肩肱型肌营养不良症中的任意一种。
18、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
19、本专利技术采用基于特定基序的方法构建小型aav病毒库，通过单次筛选过程就能发掘出有效的aav变体，筛选精度高，无需进行多轮的重复筛选及验证。本专利技术获得了4个具有肌肉特异性的aav9突变体，从mrna和蛋白表达水平验证了其在股四头肌，肱二头肌，腹肌等肌肉组织中效果良好(与对照组aav9相比，肌肉靶向性最多提高了约10倍)，并且肝嗜性低(低于对照组2～3倍)，特异性良好。为肌肉疾病的基因治疗提供更多有用、可选的载体工具，造福于广大患者，具有巨大的临床价值和商业应用场景。
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1.一种腺相关病毒衣壳蛋白突变体，其特征在于，其氨基酸序列为如SEQ IDNo.12所示。
2.一种编码腺相关病毒衣壳蛋白突变体的核酸，其特征在于，其核苷酸序列为如SEQID No.16所示。
3.一种重组腺相关病毒，其特征在于，包括权利要求1所述的腺相关病毒衣壳蛋白突变体。
4.根据权利要求3所述的重组腺相关病毒，其特征在于，还包括异源目的基因。
5.根据权利要求4所述的重组腺相关病毒，其特征在于，所述异源目的基因编码干扰RNA、适配体、内切核酸酶、指导RNA中任一种基因产物。
6.权利要求1所述的腺相关病毒衣壳蛋白突变体、权利要求3～5任一项所述的重组腺相关病毒在制备用于将基因产物递送至受试者细胞或组织中的药物或制剂中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述细胞为肌肉细胞；所述组织为肌肉组织。
8.权利要求1所述的腺相关病毒衣壳蛋白突变体、权利要求3～5任一项所述的重组腺相关病毒在制备用于预防和/或治疗肌肉类疾病的药物递送工具中的应用。
9.权利要求1所述的腺相关病
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于，所述肌肉类疾病包括但不限于杜氏肌营养不良、Becker型肌营养不良症、X连锁肌小管性肌病、肢带型肌营养不良、强直性肌营养不良症、面肩肱型肌营养不良症中的任意一种。
...【技术特征摘要】
1.一种腺相关病毒衣壳蛋白突变体，其特征在于，其氨基酸序列为如seq idno.12所示。
2.一种编码腺相关病毒衣壳蛋白突变体的核酸，其特征在于，其核苷酸序列为如seqid no.16所示。
3.一种重组腺相关病毒，其特征在于，包括权利要求1所述的腺相关病毒衣壳蛋白突变体。
4.根据权利要求3所述的重组腺相关病毒，其特征在于，还包括异源目的基因。
5.根据权利要求4所述的重组腺相关病毒，其特征在于，所述异源目的基因编码干扰rna、适配体、内切核酸酶、指导rna中任一种基因产物。
6.权利要求1所述的腺相关病毒衣壳蛋白突变体、权利要求3～5任一项所述的重组腺相关病毒在制备用于将基因产物递送...
【专利技术属性】
技术研发人员：李华鹏，卜晔，钟育健，张有为，代志勇，潘越，陈欢，
申请(专利权)人：广州派真生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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