一种用于重组腺相关病毒包装的质粒系统及其应用技术方案

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种用于重组腺相关病毒包装的质粒系统及其应用。本发明专利技术用于rAAV包装的质粒系统包括：含两个末端反向重复序列的质粒、腺病毒辅助质粒和rAAV重组包装质粒；所述含两个末端反向重复序列的质粒、腺病毒辅助质粒、rAAV重组包装质粒中的至少一种质粒中插入有基因编辑酶的靶位点序列和/或基因编辑酶序列。本发明专利技术在rAAV生产过程中可以有效降低rAAV中质粒骨架核酸序列残留，提高rAAV产品的纯度，从而极大的提高rAAV产品的成药性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，具体涉及一种用于重组腺相关病毒包装的质粒系统及其应用。

技术介绍

1、重组腺相关病毒(raav)作为基因治疗载体，具有安全性高、转导能力强等特点，目前已有几款基于raav的基因治疗药物上市，还有很多基于raav的基因治疗临床试验正在开展。raav生产系统主要包括基于hek293细胞的质粒转染生产系统、基于昆虫细胞和杆状病毒的生产系统、基于hek293细胞和腺病毒的生产系统。基于hek293细胞的质粒转染生产系统，可贴壁培养以及悬浮培养，同时也包括一质粒或者多质粒转染的方式，简单、快速，是被广泛采用的raav生产系统。以经典的三质粒转染生产系统为例，该生产系统涉及使用三个质粒共转染hek293细胞：一个辅助质粒phelper，提供能够表达腺病毒元件蛋白的核酸序列；一个辅助质粒prep-cap，提供能够表达aav的rep和cap蛋白的核酸序列，其中rep蛋白负责aav基因组的复制与协助aav基因组颗粒的组装，cap蛋白组成aav外壳；一个包括目的序列的质粒，可简称为pgoi，目的序列的上下游各有一个天然aav基因组中的5′itr和3′itr本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于重组腺相关病毒包装的质粒系统，其特征在于，所述质粒系统包括：含两个末端反向重复序列的质粒、腺病毒辅助质粒和rAAV重组包装质粒；所述含两个末端反向重复序列的质粒、腺病毒辅助质粒、rAAV重组包装质粒中的至少一种质粒中插入有基因编辑酶的靶位点序列和/或基因编辑酶序列。

2.根据权利要求1所述的质粒系统，其特征在于，所述基因编辑酶为CRISPR/Cas核酸酶、转录激活子样效应子核酸酶、锌指核酸酶中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的质粒系统，其特征在于，所述基因编辑酶为Cas9核酸酶。

4.根据权利要求1～3任一项所述的质粒系统，其特征在于，...

【技术特征摘要】

1.一种用于重组腺相关病毒包装的质粒系统，其特征在于，所述质粒系统包括：含两个末端反向重复序列的质粒、腺病毒辅助质粒和raav重组包装质粒；所述含两个末端反向重复序列的质粒、腺病毒辅助质粒、raav重组包装质粒中的至少一种质粒中插入有基因编辑酶的靶位点序列和/或基因编辑酶序列。

2.根据权利要求1所述的质粒系统，其特征在于，所述基因编辑酶为crispr/cas核酸酶、转录激活子样效应子核酸酶、锌指核酸酶中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的质粒系统，其特征在于，所述基因编辑酶为cas9核酸酶。

4.根据权利要求1～3任一项所述的质粒系统，其特征在于，所述质粒系统包括插入有所述基因编辑酶的靶位点序列的pgoi、prep-cap、phelper和插入有所述基因编辑酶序列的paavs1。

5.根据权利要求4所述的质粒系统，其特征在于，所述质粒系统包括插入有cas9编辑靶位...

【专利技术属性】
技术研发人员：李华鹏，韩靖鸾，卜晔，陈欢，代志勇，肖丹青，
申请(专利权)人：广州派真生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：