一种在果实中特异表达乙肝病毒表面抗原的植物表达载体制造技术

本发明专利技术涉及一种在果实中特异表达乙肝病毒表面抗原的植物表达载体，该载体利用香蕉果实特异表达的凝集素基因启动子取代植物表达载体ｐＢＩ１２１上的组成型３５Ｓ启动子，以乙肝病毒表面抗原基因置换ｐＢＩ１２１上的ｇｕｓ基因，构建重组植物表达载体ｐＣＡＭＢＩＡ２３００ＨＢＳ。利用农杆菌介导法将该载体转化香蕉，ＰＣＲ检测证明外源基因已插入香蕉基因组中；ＥＬＩＳＡ检测证明香蕉凝集素基因启动子驱动乙肝病毒表面抗原基因在香蕉果实中特异表达。该载体的获得，为在果实中特异表达乙肝病毒表面抗原提供了有利的工具，特别是利用该载体生产乙肝口服疫苗奠定了基础。因此，该载体在今后的转基因研究中具有重要的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种在果实中特异表达乙肝病毒表面抗原的植物表达载体为了培育具有疫苗功能的香蕉果实，我们将乙肝表面抗原基因构建含有果实特 异表达启动子和乙肝表面抗原基因的融合植物表达载体，转化香蕉。本发,明提供的技术方案为 一种在果实中特异表达乙肝表面抗原的植物表达载 体，其特征在于载体中启动子为香蕉凝集素基因启动子，载体中目的基因为乙肝病毒 表面抗原基因。上述在果实中特异表达人类乙肝表面抗原的植物表达载体的构建方法为乙肝 病毒表面抗原基因克隆、香蕉BanLec启动子序列PCR括增、香蕉BanLec启动子序 列与乙肝病毒表面抗原基因连接、连接产物测序、测序正确的连接产物通过酶切连 接反应与植物表达载体pCAMBIA2300构建果实特异表达乙肝表面抗原的融合植物表 达载体pCAMBIA2300HBS。一. 乙肝表面抗原基因克隆根据NCBI中登录的人类乙肝表面抗原基因HBsAg序列设计一对PCR引物(HBS1: ACCGAACA宁GGAGAACAC; HBS2: CGTTTGGTTTTATTAGGG)，以厦门大学赠送的含有乙肝表 面抗原基因的载体YEPFLAG-HBS质粒为模版，进行PCR反应，目的条带进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在果实中特异表达乙肝病毒表面抗原的植物表达载体，其特征在于：　载体中启动子为香蕉凝集素基因启动子。　载体中目的基因为乙肝病毒表面抗原基因。

【技术特征摘要】
1.一种在果实中特异表达乙肝病毒表面抗原的植物表达载体，其特征在于载体中启动子为香蕉凝集素基因启动子。载体中目的基因为乙肝病毒表面抗原基因。2. 根据权利要求1所述的用香蕉凝集素基因启动子替代植物表达载体pBI121 上的CaMV35S启动...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾彩红，徐碧玉，金志强，胡伟，张建斌，刘菊华，谭光兰，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所，农业部热带作物生物技术重点开放实验室，中国热带农业科学院海口实验站，
类型：发明
国别省市：66[]