【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学及蛋白质工程，具体涉及一种褐藻胶裂解酶突变体pl7m及其应用。
技术介绍
1、褐藻胶主要存在于褐藻细胞壁及细胞间质，作为一种海洋酸性多糖，褐藻胶主要由甘露糖醛酸和古洛糖醛酸通过糖苷键随机聚合而成。褐藻胶由于分子量大，从而使其具有粘度大、生物利用率低等缺陷。作为褐藻胶的降解产物，褐藻胶寡糖具有良好的溶解性、生物活性以及生物利用率，因此在许多领域具有更好的应用价值。目前褐藻胶寡糖的加工方式主要由化学法和酶法组成。化学法通过强酸强碱分解褐藻胶，具有反应速度快，工艺简单等优势，但是产物结构不完整，副产物多以及环境污染等问题限制其广泛应用。相比化学法，酶法作为一种新型技术目前越来越受到行业的重视，其具有反应条件温和、产物结构完好等优势。
2、因此，为了扩大褐藻胶裂解酶的应用范围，对褐藻胶裂解酶的进一步研究具有重要的现实意义。
技术实现思路
1、基于此，本专利技术提供了一种褐藻胶裂解酶突变体pl7m及其应用，有效提高了酶活力及热稳定性，为下一步产业化应用奠定了坚实基础。
2、为了达到上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种褐藻胶裂解酶突变体pl7m，所述褐藻胶裂解酶突变体pl7m的氨基酸序列如seq id no.1所示。
4、优选地，编码所述氨基酸的序列为多聚核苷酸序列，所述多聚核苷酸序列如seqid no.2所示。
5、本专利技术还提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体包括所述褐藻胶裂解酶突变体p
6、本专利技术还提供了一种重组工程菌，所述重组工程菌包括所述的重组表达载体。
7、优选地，所述重组工程菌以枯草芽孢杆菌工程菌株为宿主。
8、优选地，所述枯草芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌wb800n。
9、本专利技术还提供了一种所述的重组工程菌在制备高酶比活性突变体pl7m中的应用。
10、在前期研究中，通过蛋白质理性设计获得褐藻胶裂解酶pl7aam（专利申请号cn202211412004.1）。褐藻胶裂解酶pl7aam在40℃和45℃水浴处理1小时后，剩余酶活分别为95.2%和42.6%，高于已报道的多种褐藻胶裂解酶。在进一步的研究过程中，我们发现褐藻胶裂解酶pl7aam使用成本高，从而限制其产业化应用。本专利以褐藻胶裂解酶pl7aam为出发模板，通过结定点饱和突变和组合突变，获得酶比活提升的褐藻胶裂解酶突变体pl7m。此外以枯草芽孢杆菌为宿主，实现突变体pl7m高效制备，为其产业化应用奠定基础。
11、本专利技术主要通过以下技术实现：（1）通过同源建模获得褐藻胶裂解酶pl7aam三维结构，通过分子对接获得褐藻胶裂解酶pl7aam与底物结合水解关键氨基酸位点；（2）通过定点饱和突变获得有效突变体s58r、q134f和q246w；（3）通过将有效突变体进行组合突变获得最佳突变体pl7m，其酶比活是出发模板褐藻胶裂解酶pl7aam的1.53倍；（4）以枯草芽孢杆菌为宿主，实现突变体pl7m高效制备。
12、与现有技术相比，本专利技术的技术优势如下：本专利技术通过定点包含突变以及组合突变获得酶比活显著提升的褐藻胶裂解酶突变体pl7m，以枯草芽孢杆菌为宿主实现了突变体pl7m高效表达，为突变体pl7m的产业化应用奠定基础。
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1. 一种褐藻胶裂解酶突变体Pl7M，其特征在于，所述褐藻胶裂解酶突变体Pl7M的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2. 如权利要求1所述的褐藻胶裂解酶突变体Pl7M，其特征在于，编码所述氨基酸的序列为多聚核苷酸序列，所述多聚核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一种重组表达载体，其特征在于，包括权利要求2所述褐藻胶裂解酶突变体Pl7M的多聚核苷酸序列。
4.一种重组工程菌，其特征在于，包括权利要求3所述的重组表达载体。
5.如权利要求4所述的重组工程菌，其特征在于，以枯草芽孢杆菌工程菌株为宿主。
6.如权利要求5所述的重组工程菌，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌包括枯草芽孢杆菌WB800N。
7.一种如权利要求4-6任一项所述的重组工程菌在制备高酶比活性突变体Pl7M中的应用。
【技术特征摘要】
1. 一种褐藻胶裂解酶突变体pl7m，其特征在于，所述褐藻胶裂解酶突变体pl7m的氨基酸序列如seq id no.1所示。
2. 如权利要求1所述的褐藻胶裂解酶突变体pl7m，其特征在于，编码所述氨基酸的序列为多聚核苷酸序列，所述多聚核苷酸序列如seq id no.2所示。
3.一种重组表达载体，其特征在于，包括权利要求2所述褐藻胶裂解酶突变体pl7m的多聚核...
【专利技术属性】
技术研发人员：王建荣，祝木金，陈微，王平，钟斌，高美芳，曹革，
申请(专利权)人：深圳润康生态环境股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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