【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域，特别涉及一种西洋参茎叶中皂苷成分的提取方法及应用。
技术介绍
1、西洋参（panax quinquefolius l.），是五加科人参属的多年生草本植物。西洋参的根为圆柱形或纺锤形；叶片广卵形或倒卵形，边缘有粗锯齿；花序是伞形，尊绿色，钟状；花瓣绿白色，花药卵形或矩圆形；浆果扁球形，熟时为鲜红色，花期在7-8月，果期9月。西洋参首次发现于蒙特利尔地区大西洋沿岸丛林，因产地而得名，与人参同属而不同种。
2、西洋参原产北美洲的加拿大南部和美国北部，现分布于吉林、北京、山东、陕西、山西，以及福建、云南等南方省区的高海拔山区。西洋参喜欢荫湿环境，忌强光和高温，宜选土层较厚、排水良好、土质疏松肥沃的微酸性至中性沙质壤土地栽种，繁殖主要以种子繁殖为主。
3、近年来，人参皂苷成为抗癌领域研究的重点。人参皂苷对人smmc-7721细胞、sk-hep-1细胞和bel-7404细胞等肝癌细胞以及肺腺癌、食管癌等都具有良好的作用。西洋参和人参的化学成分和功效基本相同，并且西洋参在我国的种植面积逐渐增多。西洋参茎叶是西洋参庞大的地上资源，在西洋参的开发利用中，大多数人只追求对西洋参根的利用，忽视了对茎叶的开发，造成了资源的大量浪费。有研究表明，西洋参茎叶总皂苷含量明显高于西洋参根和人参中总皂苷含量。此外，市场上的心悦胶囊的主要成分也是西洋参茎叶皂苷，这些都表明西洋参茎叶具有巨大的开发研究价值。
4、目前，常用的提取制备方法有煎煮法、水提醇沉或醇提水沉法、超声法、大孔树脂吸附等等，这些方法提
技术实现思路
1、本专利技术为了弥补现有技术的不足，提供了一种西洋参茎叶中皂苷成分的提取方法。
2、本专利技术是通过如下技术方案实现的：
3、第一方面，本专利技术提供了一种西洋参茎叶中皂苷成分的提取方法，包括以下步骤：
4、（1）为了提升b及l型稀有皂苷含量，以采收的西洋参茎叶为原料，西洋参茎叶与桂圆肉，蒸制5-8 h，剔除桂圆肉，西洋参茎叶烘干，即得西洋参茎叶蒸制品；
5、（2）去色素：取西洋参茎叶蒸制品，粉碎过100-300目筛，用若干个300目袋分包，置索氏提取器中，加体积比0.5:99.5的氨水-乙酸乙酯混合溶液500ml，加热回流1.5小时，弃去氨水-乙酸乙酯混合溶液，残渣挥尽氨水-乙酸乙酯，得去色素后的西洋参茎叶；
6、（3）提取总皂苷：将步骤（2）得到的去色素后的西洋参茎叶重新置索氏提取器中，加体积比0.5:99.5的氨水-甲醇混合溶液1000ml，加热回流提取12h，回收氨水-甲醇混合溶液至干，残渣加正丁醇饱和的水300ml使溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取至少4次，合并正丁醇液；
7、（4）去除杂质：研究表明，皂苷类成分可以用氨性甲醇提取，皂苷类成分溶于正丁醇，用正丁醇萃取纯化，用以去除多糖、淀粉等水溶性的大极性杂质；因此将步骤（3）中得到的正丁醇液用1%盐酸溶液洗涤，弃去盐酸溶液，再用正丁醇饱和的水洗至中性，弃去水洗液，回收正丁醇至干，即得纯度为95%以上的西洋参茎叶总皂苷提取物；
8、（5）三相高速逆流色谱分离纯化：常规高速逆流色谱为两相（液液系统），不适合皂苷等大极性成分分离纯化，mwcnts/omcs的加入可以形成三相，有效放大了不同皂苷成分在体系的分配系数及分配时间差异，从而实现分离；
9、因此，本专利技术以分散有o-羧甲基壳聚糖功能化多壁碳纳米管的水相为固定相，流动相a为水饱和5:1四氯化碳-丙酮，流动相b为水饱和10:1正丁醇-甲醇，设置梯度流速为0min，95%a；60 min，65%a；120 min，35%a；高速逆流色谱仪柱体积为500ml，上样量50 mg，转速900 rpm，流速2ml/min，检测器为蒸发光检测器；
10、收集30min-60min洗脱液，蒸干溶剂，得原人参二醇型皂苷：西洋参皂苷rb1、西洋参皂苷rb2、西洋参皂苷rb3；
11、收集90min-120min洗脱液，蒸干溶剂，得c-17 侧链异构型皂苷：西洋参皂苷 l1、西洋参皂苷 l2、西洋参皂苷 l3。
12、进一步的，步骤（1）中西洋参茎叶100g，桂圆肉100g；步骤（2）中西洋参茎叶蒸制品100g。
13、进一步的，步骤（5）中，原人参二醇型皂苷：西洋参皂苷rb1、西洋参皂苷rb2、西洋参皂苷rb3的比例为5:2:15。
14、进一步的，步骤（5）中，c-17 侧链异构型皂苷：西洋参皂苷 l1、西洋参皂苷 l2、西洋参皂苷 l3的比例为3:5:8。
15、第二方面，本专利技术提供了一种利用上述的提取方法制备的原人参二醇型皂苷在制备治疗肝癌药物中的应用。
16、第三方面，本专利技术提供了一种利用上的提取方法制备的c-17 侧链异构型皂苷在制备治疗肝癌药物中的应用。
17、与现有技术相比，本专利技术的有益之处为：
18、1、本专利技术以西洋参茎叶为原料，采用与桂圆肉炮制，索式提取器去色素、提取总皂苷的方法，得到纯度95%以上的总皂苷，再用三相高速逆流色谱分离纯化，得到原人参二醇型皂苷：西洋参皂苷rb1、西洋参皂苷rb2、西洋参皂苷rb3的比例为5:2:15；c-17 侧链异构型皂苷：西洋参皂苷 l1、西洋参皂苷 l2、西洋参皂苷 l3的比例为3:5:8，其中l型西洋参总皂苷为本专利技术首次在西洋参茎叶制备，本专利技术所得到的皂苷类成分在治疗肝癌中有重要的作用。
19、2、本专利技术首次以分散有o-羧甲基壳聚糖功能化多壁碳纳米管的水相为固定相引入，形成三相，有效放大了不同皂苷成分在体系的分配系数及分配时间差异，从而实现分离。
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1.一种西洋参茎叶中皂苷成分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1）中西洋参茎叶100g，桂圆肉100g；步骤（2）中西洋参茎叶蒸制品100g。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（5）中，原人参二醇型皂苷：西洋参皂苷Rb1、西洋参皂苷Rb2、西洋参皂苷Rb3的比例为5:2:15。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（5）中，C-17 侧链异构型皂苷：西洋参皂苷 L1、西洋参皂苷 L2、西洋参皂苷 L3的比例为3:5:8。
5.一种利用权利要求1所述的提取方法制备的原人参二醇型皂苷在制备治疗肝癌药物中的应用。
6.一种利用权利要求1所述的提取方法制备的C-17 侧链异构型皂苷在制备治疗肝癌药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种西洋参茎叶中皂苷成分的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（1）中西洋参茎叶100g，桂圆肉100g；步骤（2）中西洋参茎叶蒸制品100g。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤（5）中，原人参二醇型皂苷：西洋参皂苷rb1、西洋参皂苷rb2、西洋参皂苷rb3的比例为5:2:15。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：曹斌，田景振，邵成雷，张传吉，刘玉娟，
申请(专利权)人：唐宁医药科技济南有限公司，
类型：发明
国别省市：
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