System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 一种用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法技术_技高网

一种用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法技术

技术编号:41192882 阅读:2 留言:0更新日期:2024-05-07 22:22
本发明专利技术公开了一种用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法,属于生物研究领域,步骤如下:步骤一、提取粗蛇毒;步骤二、粗蛇毒中的成份提取和测定,选用神经毒素占总重量的30%‑40%的粗蛇毒或者粗蛇毒制成的蛇毒粉;神经毒素的提取方法如下:将1份粗蛇毒加入到去离子水中,搅拌,离心,得到上清液,按照重量份去离子水为粗蛇毒的2‑50倍;调节所述上清液的PH为6.5~7.5,过滤,得到第一滤液;第一滤液使用纤维超滤膜超滤,得到第二滤液;将所得到的第二滤液采用交换树脂进行纯化,以含有氯化钠的磷酸盐缓冲液进行洗脱,获得不同洗脱液,其中第一洗脱主峰的洗脱液中神经毒素,冷冻干燥,得到产物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及毒蛇研究领域。


技术介绍

1、蛇毒是毒蛇从毒腺中分泌出来的一种液体,主要成份是毒性蛋白质,约占干重的90%至95%。酶类和毒素约含二十多种。此外,还含有一些小分子肽、氨基酸、碳水化合物、脂类、核苷、生物胺类及金属离子等。

2、蛇毒包括神经毒素(蛋白质)、心脏毒素、凝血毒素、出血毒素等,眼镜蛇毒的主要成分之一,是眼镜蛇毒中最主要的致死成分,以突触后神经毒素为主。

3、由于眼镜蛇毒神经毒素止痛无成瘾性,无耐药性,因此在吸毒者戒毒方面前景广阔。现有的对蛇毒的研究通常需要将不同的蛇毒进行混合,不同的蛇毒中的成份比不同,混合后采用相同的提纯方法会影响有效成份的利用率和产品的品质。


技术实现思路

1、本专利技术的目的在于,针对现有技术当中存在不同毒蛇毒液的差异,特别是神经毒素含量不同导致的用统一的方法提取出的神经毒素效果不高,公开了一种用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法,步骤如下:

2、步骤一、从不同蛇中提取粗蛇毒;

3、步骤二、粗蛇毒中的成份提取和测定,选用神经毒素占总重量的30%-40%的粗蛇毒或者粗蛇毒制成的蛇毒粉。

4、作为改进,所述的神经毒素的提取方法如下:将1份粗蛇毒加入到去离子水中,搅拌,离心,得到上清液,按照重量份去离子水为粗蛇毒的2-50倍;调节所述上清液的ph为6.5~7.5,静止0.5小时以上,过滤,得到第一滤液;第一滤液使用纤维超滤膜超滤,其中超滤膜的截留分子量为8kda,浓缩滤液至滤液体积为第一滤液的20%-50%,得到第二滤液;将所得到的第二滤液采用阳离子交换树脂进行纯化,以含有氯化钠的磷酸盐缓冲液进行洗脱,获得不同洗脱液,其中第一洗脱主峰的洗脱液中神经毒素,冷冻干燥,得到产物,计算产物的重量以及产物重量占1份蛇毒粉的重量。

5、作为改进,所述的蛇毒粉的制备方法为:将1份粗蛇毒溶于水、过滤,得到滤液,将滤液置于-80℃冷冻,冷冻干燥2-5小时,形成1份蛇毒粉。

6、作为改进,所述的洗脱为梯度洗脱。

7、作为改进,所述的洗脱方法为:先用ph为7-8,含10mm化钠,10mm的磷酸盐缓冲液进行洗脱;洗脱液吸光度将至0.25以下,用ph为7-8,含20-30mm氯化钠,10mm的磷酸盐缓冲液进行洗脱;洗脱液吸光度将至0.25以下,用ph为7-8,含30-40mm氯化钠,10mm的磷酸盐缓冲液进行洗脱,洗脱液吸光度将至0.25以下,集成各洗脱液。

8、作为改进,洗脱液是粗蛇毒重量的3-10倍。

9、作为改进,提取粗蛇毒的蛇从眼镜蛇科选用。

10、本专利技术的方案针对不同类型的蛇毒差异,能够将特定类型的蛇毒进行混合,进而统一提取,在保持提取率最优的前提下能够达到效率最高。

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【技术保护点】

1.一种用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法,步骤如下:

2.根据权利要求1所述的用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法,其特征在于,所述的神经毒素的提取方法如下:

3.根据权利要求2所述的用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法,其特征在于,所述的蛇毒粉的制备方法为:将1份粗蛇毒溶于水、过滤,得到滤液,将滤液置于-80℃冷冻,冷冻干燥,形成1份蛇毒粉。

4.根据权利要求2所述的用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法,其特征在于,所述的洗脱为梯度洗脱。

5.根据权利要求4所述的用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法,其特征在于,所述的洗脱方法为:先用PH为7-8,含10mM氯化钠、10mM的磷酸盐缓冲液进行洗脱;当洗脱液吸光度将至0.25以下,用PH为7-8,含20-30mM氯化钠、10mM的磷酸盐缓冲液进行洗脱;洗脱液吸光度将至0.25以下,用PH为7-8,含30-40mM氯化钠、10mM的磷酸盐缓冲液进行洗脱,洗脱液吸光度将至0.25以下,集成各洗脱液。

6.根据权利要求4所述的用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法,其特征在于,洗脱液是粗蛇毒重量的3-10倍。

7.根据权利要求1-6任一项所述的用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法,其特征在于,提取粗蛇毒的蛇从眼镜蛇科选用。

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【技术特征摘要】

1.一种用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法,步骤如下:

2.根据权利要求1所述的用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法,其特征在于,所述的神经毒素的提取方法如下:

3.根据权利要求2所述的用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法,其特征在于,所述的蛇毒粉的制备方法为:将1份粗蛇毒溶于水、过滤,得到滤液,将滤液置于-80℃冷冻,冷冻干燥,形成1份蛇毒粉。

4.根据权利要求2所述的用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法,其特征在于,所述的洗脱为梯度洗脱。

5.根据权利要求4所述的用于提取多肽用的蛇毒质量控制方法,其特征在于,所述的洗脱方...

【专利技术属性】
技术研发人员:赖仞容明强谷陟欣龙承波黄彪
申请(专利权)人:成都佩德生物医药有限公司
类型:发明
国别省市:

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