【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物工程，尤其涉及cey17_04535突变体及其应用。
技术介绍
1、谷氨酰胺的化学名称为2-氨基-4-氨甲酰基丁酸，是一种非必需氨基酸，也是蛋白质合成中的编码氨基酸，可促进蛋白质的合成，抑制蛋白质的分解，可用于治疗胃及十二指肠溃疡，在医药行业具有重要作用。
2、目前，谷氨酰胺最常用的生产方法为发酵法，主要以谷氨酸棒杆菌(corynebacterium glutamicum)为生产菌进行发酵生产。谷氨酸棒杆菌是异养需氧型微生物，为革兰氏阳性菌，具有生长速度快、非致病、对自身代谢物降解能力弱的特性。发酵法具有原料来源广泛、生产成本低、产品质量可控、产物单一等优点。但目前生产谷氨酰胺的菌种的发酵性能仍较差，谷氨酰胺的产量和转化率仍不理想，工业上对谷氨酰胺的需求量较高，现有的菌种无法满足大规模工业化生产的需求。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种cey17_04535蛋白突变体及其应用。
2、具体地，本专利技术提供以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供一种cey17_04535蛋白突变体，所述cey17_04535蛋白突变体与谷氨酸棒杆菌野生型cey17_04535蛋白相比，含有第65位的苏氨酸突变为除苏氨酸以外的氨基酸的突变。
4、上述除苏氨酸以外的氨基酸包括但不限于异亮氨酸(i)、精氨酸(r)或丙氨酸(a)。
5、优选地，所述cey17_04535蛋白突变体与谷氨酸棒杆菌野生型cey17_04
6、进一步优选地，所述cey17_04535蛋白突变体与谷氨酸棒杆菌野生型cey17_04535蛋白相比的突变为第65位的苏氨酸突变为异亮氨酸、精氨酸或丙氨酸。
7、以上所述的谷氨酸棒杆菌野生型cey17_04535蛋白的氨基酸序列，本领域技术人员可通过公开的数据库获得，其中，谷氨酸棒杆菌atcc 14067的cey17_04535蛋白的登录号为cey17_04535，其编码基因的核苷酸序列如seq id no.4所示。
8、进一步优选地，所述cey17_04535蛋白突变体的氨基酸序列如seq id no.1、seqid no.2或seq id no.3所示。
9、seq id no.1：
10、mqaspefgelrskfrsfafpmtvafflwyvvyvlvasfasewmatpvfgainiglifgflqfvtifiityiyvmfanknleprqaairqkmeg。
11、seq id no.2：
12、mqaspefgelrskfrsfafpmtvafflwyvvyvlvasfasewmatpvfgainiglifgflqfvtrfiityiyvmfanknleprqaairqkmeg。
13、seq id no.3：
14、mqaspefgelrskfrsfafpmtvafflwyvvyvlvasfasewmatpvfgainiglifgflqfvtafiityiyvmfanknleprqaairqkmeg。
15、以上所述的cey17_04535蛋白突变体能够显著提高微生物的谷氨酰胺生产能力，进而有效提升谷氨酰胺的产量。
16、第二方面，本专利技术提供一种核酸分子，所述核酸分子编码以上所述的cey17_04535蛋白突变体。
17、根据cey17_04535蛋白突变体的氨基酸序列和密码子规则，本领域技术人员能够获得编码cey17_04535蛋白突变体的核酸分子的核苷酸序列。
18、在本专利技术的一些实施方式中，编码以上所述的cey17_04535蛋白突变体的核酸分子的核苷酸序列为在seq id no.4所示序列的基础上将第65位苏氨酸对应的密码子突变为异亮氨酸、精氨酸或丙氨酸的密码子。
19、第三方面，本专利技术提供包含以上所述的核酸分子或表达以上所述的cey17_04535蛋白突变体的生物材料。
20、以上所述的生物材料包括表达盒、载体或宿主细胞。
21、其中，所述表达盒为将所述核酸分子与转录或翻译调控元件可操作性地连接得到的重组核酸分子。
22、所述载体包括但不限于质粒载体、病毒载体、转座子。
23、所述宿主细胞包括微生物细胞，优选为棒状杆菌属细菌、埃希氏菌属细菌或芽孢杆菌属细菌。
24、第四方面，本专利技术提供以上所述的cey17_04535蛋白突变体或以上所述的核酸分子或所述生物材料的以下任一种应用：
25、(1)在生产谷氨酰胺或其衍生物中的应用；
26、(2)在构建用于生产谷氨酰胺或其衍生物的微生物中的应用。
27、本专利技术还提供以上所述的cey17_04535蛋白突变体或以上所述的核酸分子或所述生物材料在提高微生物的谷氨酰胺生产能力中的应用。
28、以上所述的生产能力提高可表现为谷氨酰胺的产量和/或转化率提高。
29、本专利技术中，谷氨酰胺的衍生物包括但不限于精氨酸、色氨酸等。
30、以上所述的应用中，所述微生物为棒状杆菌属细菌、埃希氏菌属细菌或芽孢杆菌属细菌。
31、优选地，所述棒状杆菌属为谷氨酸棒杆菌。所述埃希氏菌属细菌为大肠杆菌。所述芽孢杆菌属细菌为枯草芽孢杆菌。
32、第五方面，本专利技术提供一种修饰的微生物，所述修饰的微生物表达以上所述的cey17_04535蛋白突变体。
33、优选地，所述修饰的微生物的染色体原位cey17_04535蛋白基因突变为编码以上所述的cey17_04535蛋白突变体的基因。
34、优选地，所述微生物为棒状杆菌属细菌、埃希氏菌属细菌或芽孢杆菌属细菌。
35、进一步优选地，所述棒状杆菌属为谷氨酸棒杆菌。所述埃希氏菌属细菌为大肠杆菌。所述芽孢杆菌属细菌为枯草芽孢杆菌。
36、在本专利技术的一些实施方式中，提供一种修饰的谷氨酸棒杆菌，所述修饰的谷氨酸棒杆菌表达所述cey17_04535蛋白突变体或含有所述cey17_04535蛋白突变体的编码基因。
37、以上所述的修饰的谷氨酸棒杆菌的谷氨酰胺产量较未修饰的谷氨酸棒杆菌显著提高。
38、在能够合成谷氨酰胺的微生物中导入cey17_04535蛋白突变体的编码基因，使其表达cey17_04535蛋白突变体，由此构建的修饰的微生物的谷氨酰胺的产量显著提升。
39、在本专利技术的一些实施方式中，所述修饰的微生物为表达cey17_04535蛋白突变体的野生型微生物(野生型谷氨酸棒杆菌或野生型大肠杆菌)。
40、在本专利技术的一些实施方式中，所述修饰的微生物还包含以下修饰中的一种或多种：
41、1)弱化odha基因的表达；
42、2)增强丙酮酸羧化酶的表本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种CEY17_04535蛋白突变体，其特征在于，所述CEY17_04535蛋白突变体与谷氨酸棒杆菌野生型CEY17_04535蛋白相比，含有第65位的苏氨酸突变为除苏氨酸以外的氨基酸的突变。
2.根据权利要求1所述的CEY17_04535蛋白突变体，其特征在于，所述CEY17_04535蛋白突变体与谷氨酸棒杆菌野生型CEY17_04535蛋白相比，含有第65位的苏氨酸突变为异亮氨酸、精氨酸或丙氨酸的突变；
3.核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1或2所述的CEY17_04535蛋白突变体。
4.生物材料，其特征在于，所述生物材料包含权利要求3所述的核酸分子或表达权利要求1或2所述的CEY17_04535蛋白突变体。
5.权利要求1或2所述的CEY17_04535蛋白突变体或权利要求3所述的核酸分子或权利要求4所述的生物材料的以下任一种应用：
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述微生物为棒状杆菌属细菌、埃希氏菌属细菌或芽孢杆菌属细菌。
7.一种修饰的微生物，其特征在于，所述修饰的微生
8.根据权利要求7所述的修饰的微生物，其特征在于，所述修饰的微生物的染色体原位CEY17_04535蛋白基因突变为编码权利要求1或2所述的CEY17_04535蛋白突变体的基因。
9.根据权利要求7或8所述的修饰的微生物，其特征在于，所述微生物为棒状杆菌属细菌、埃希氏菌属细菌或芽孢杆菌属细菌。
10.一种发酵生产谷氨酰胺的方法，其特征在于，所述方法包括：培养权利要求7～9任一项所述的修饰的微生物获得培养物，从所述培养物中收集谷氨酰胺。
...【技术特征摘要】
1.一种cey17_04535蛋白突变体，其特征在于，所述cey17_04535蛋白突变体与谷氨酸棒杆菌野生型cey17_04535蛋白相比，含有第65位的苏氨酸突变为除苏氨酸以外的氨基酸的突变。
2.根据权利要求1所述的cey17_04535蛋白突变体，其特征在于，所述cey17_04535蛋白突变体与谷氨酸棒杆菌野生型cey17_04535蛋白相比，含有第65位的苏氨酸突变为异亮氨酸、精氨酸或丙氨酸的突变；
3.核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1或2所述的cey17_04535蛋白突变体。
4.生物材料，其特征在于，所述生物材料包含权利要求3所述的核酸分子或表达权利要求1或2所述的cey17_04535蛋白突变体。
5.权利要求1或2所述的cey17_04535蛋白突变体或权利要求3所述的核...
【专利技术属性】
技术研发人员：栾明月，姚嘉琪，吴涛，赵津津，李岩，
申请(专利权)人：廊坊梅花生物技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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