【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及psma纳米抗体制备，尤其涉及一种制备高亲和力psma纳米抗体的方法。
技术介绍
1、前列腺癌是男性最常见的癌症，仅次于肺癌，而且发病随年龄而增长，随着人口老龄化的到来，前列腺癌也必将迎来爆发期。2012年我国肿瘤登记前列腺癌发病就达到了近10万，统计发现早期前列腺癌患者可以通过根治性手术或者根治性放疗等方式，达到良好的治疗效果。
2、前列腺特异性膜抗原(psma)是一种非分泌性膜酶，具有羧肽酶和叶酸水解酶的活性，具有较大的细胞外结构域。psma受体在前列腺癌细胞中具有致癌信号作用。它在90％的转移性前列腺癌中过表达，而在正常组织中生理表达水平较低，所以是早期前列腺癌的筛查的重要指标。
3、在过去的几年中，已经证明了靶向psma放射性配基治疗的有效性。目前，针对放射性药物靶向性的改进以及与其他肿瘤药物的联合正在研究中，以进一步提高其治疗效果。以psma为靶点的其他疗法的发展，特别是psmacar-t细胞治疗，成为研究的热点。
4、专利号为cn105622755a的专利技术专利公开了一种抗前列腺特异性膜抗原胞外区的纳米抗体，该纳米抗体未经动物主动免疫，与抗原的亲和力较低，为此需要研发一种制备高亲和力psma纳米抗体的方法。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提出了一种制备高亲和力psma纳米抗体的方法。
2、本专利技术的技术方案是这样实现的：本专利技术提供了一种制备高亲和力psma纳米抗体的方法，包括如下步骤：
...【技术保护点】
1.一种制备高亲和力PSMA纳米抗体的方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种制备高亲和力PSMA纳米抗体的方法，其特征在于：所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
3.如权利要求1所述的一种制备高亲和力PSMA纳米抗体的方法，其特征在于：所述纳米抗体的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
4.如权利要求1所述的一种制备高亲和力PSMA纳米抗体的方法，其特征在于：交叉免疫方法为：第一次免疫用LNCaP细胞加强化完全佐剂，隔1-2周后再用重组PSMA蛋白加弗氏不完全佐剂加强一次，之后每隔1-2周用LNCaP细胞加强化完全佐剂和重组PSMA蛋白加弗氏不完全佐剂交替加强一次；共免疫6-8次。
5.如权利要求4所述的一种制备高亲和力PSMA纳米抗体的方法，其特征在于：所述强化完全佐剂是在sigma完全佐剂的基础上添加硬脂酸铝、甘油葡萄糖苷和异鼠李素。
6.如权利要求5所述的一种制备高亲和力PSMA纳米抗体的方法，其特征在于：所述硬脂酸铝的质量浓度为1％-3％，甘油葡萄糖苷的浓度为1-2mg
7.如权利要求5所述的一种制备高亲和力PSMA纳米抗体的方法，其特征在于：取LNCaP细胞，用PBS清洗后重悬，然后与强化完全佐剂乳化完全后冷冻保存。
8.如权利要求5所述的一种制备高亲和力PSMA纳米抗体的方法，其特征在于：取重组PSMA蛋白，用PBS重悬，然后与弗氏不完全佐剂乳化完全后冷冻保存。
9.如权利要求1所述的一种制备高亲和力PSMA纳米抗体的方法，其特征在于：所述重组PSMA蛋白制备方法为：取PMSA蛋白胞外区44-750aa作为免疫源，插入哺乳动物细胞表达载体pTT5，转染293f细胞表达免疫原得到重组PSMA蛋白。
10.如权利要求9所述的一种制备高亲和力PSMA纳米抗体的方法，其特征在于：所述重组PSMA蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
...【技术特征摘要】
1.一种制备高亲和力psma纳米抗体的方法，其特征在于：包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种制备高亲和力psma纳米抗体的方法，其特征在于：所述纳米抗体的氨基酸序列如seq id no：1所示。
3.如权利要求1所述的一种制备高亲和力psma纳米抗体的方法，其特征在于：所述纳米抗体的核苷酸序列如seq id no：2所示。
4.如权利要求1所述的一种制备高亲和力psma纳米抗体的方法，其特征在于：交叉免疫方法为：第一次免疫用lncap细胞加强化完全佐剂，隔1-2周后再用重组psma蛋白加弗氏不完全佐剂加强一次，之后每隔1-2周用lncap细胞加强化完全佐剂和重组psma蛋白加弗氏不完全佐剂交替加强一次；共免疫6-8次。
5.如权利要求4所述的一种制备高亲和力psma纳米抗体的方法，其特征在于：所述强化完全佐剂是在sigma完全佐剂的基础上添加硬脂酸铝、甘油葡萄糖苷和异鼠李素。
6.如权利要求5所述的一种制备高...
【专利技术属性】
技术研发人员：冷毅斌，兰萍，胡治勇，徐佳文，李涛军，
申请(专利权)人：武汉戴安生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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