一种用高效液相色谱－荧光法同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸的方法技术

本发明专利技术涉及一种用高效液相色谱－荧光法同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸的方法。步骤包括：ａ、采用Ｈｙｐｅｒｓｉｌ?Ｃ１８?２５０ｍｍ×４．６ｍｍ?ｉ．ｄ，７μｍ色谱柱；ｂ、每升流动相中含醋酸锌０．２ｍｏｌ、醋酸８．３ｍｍｏｌ和２．５ｖ／ｖ％的乙腈；ｃ、流速为１．５ｍｌ／ｍｉｎ，进样量：２０μｌ，柱温２５℃；ｄ、可调波长的设定为：０－１１ｍｉｎ激发光波长３６５ｎｍ，发射光波长为４８０ｎｍ；１１－１５．５ｍｉｎ激发光波长３４４ｎｍ，发射光波长为４０４ｎｍ；１５．５－２０ｍｉｎ激发光波长２５４ｎｍ，发射光波长为４０４ｎｍ条件下检测。方法操作简单，分离快速，无需柱前柱后衍生，灵敏度高，结果真实准确，能同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分析化学领域。涉及一种色谱检测的方法，具体涉及高效液相色谱荧光法同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸的方法，即利用在线衍生、可调波长的高效液 相色谱荧光法同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸的方法。
技术介绍
色氨酸(tryptophan, Trp)是人体必需的氨基酸之一。摄入体内的Trp主要经 犬尿氨酸(ky皿renine， Kyn)途径代谢即Trp在色氨酸2，3双加氧酶(L-tryptophan 2， 3-dioxygenase， TD0)或喷哚胺2，3双加氧酶(indoleamine2， 3-dioxygenase， ID0)的作 用下生成甲酰犬尿氨酸，后者迅速在犬尿氨酸甲酰胺酶的作用下生成Kyn， Kyn在犬尿氨酸 氨基转移酶的作用下进一步生成犬尿喹啉酸(ky皿renic acid， Kyna)。高效液相色谱法 (HPLC)技术作为一种集分离和测定于一体的分析技术，具有良好的敏感性和特异性，是测 定色氨酸(Trp)、犬尿氨酸(Kyn)和犬尿喹啉酸(Kyna)最常用的方法，根据联用的检测器不 同又分为高效液相色谱荧光法(HPLC-FD)、高效液相色谱_电化学法(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用高效液相色谱荧光法同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：ａ、采用ＨｙｐｅｒｓｉｌＣ１８２５０ｍｍ×４．６ｍｍｉ．ｄ，７μｍ色谱柱；ｂ、流动相的配制：每升流动相中含醋酸锌０．２ｍｏｌ、醋酸８．３ｍｍｏｌ和２．５ｖ／ｖ％的乙腈；ｃ、流速为１．５ｍｌ／ｍｉｎ，进样量：２０μｌ，柱温２５℃；ｄ、可调波长的设定为：０－１１ｍｉｎ激发光波长３６５ｎｍ，发射光波长为４８０ｎｍ；１１－１５．５ｍｉｎ激发光波长３４４ｎｍ，发射光波长为４０４ｎｍ；１５．５－２０ｍｉｎ激发光波长２５４ｎｍ，发射光波长为４０４ｎｍ。

【技术特征摘要】
一种用高效液相色谱荧光法同时测定色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤a、采用Hypersil C18 250mm×4.6mm i.d，7μm色谱柱；b、流动相的配制每升流动相中含醋酸锌0.2mol、醋酸8.3mmol和2.5v/v％的乙腈；c、流速为1.5ml/min，进样量20μl，柱温25℃；d、可调波长的设定为0-11min激发光波长365nm，发射光波长为480nm；11-15.5min激发光波长344nm，发射光波长为404nm；15.5-20min激发光波长254nm，发射光波长为404nm2. 根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐爱国，项忠元，罗昔波，肖乐东，皮兰敢，周前选，任亚萍，
申请(专利权)人：中南大学湘雅二医院，
类型：发明
国别省市：43[中国|湖南]