超临界ＣＯ２流体制备纳米脂质体的方法技术

本发明专利技术公开了一种超临界ＣＯ２流体制备纳米脂质体的方法，该方法包括步骤：１）在超临界反应釜内将一定量的脂质膜材与助表面活性剂溶解于超临界ＣＯ２中，并增溶一定量的蒸馏水形成超临界微乳液；２）将所述超临界微乳液在设定的压力、温度条件下预膨胀后，以一定流速通过喷嘴快速喷射至超临界收集釜内的水相介质中，经分散并沉析，形成脂质体混悬液；３）将ＣＯ２持续通过超临界收集釜，溶解并除去脂质体混悬液中的残余乙醇，经转子计量计计量后排空，收集超临界收集釜内的脂质体混悬液。该技术利用脂质膜材在超临界ＣＯ２中形成的微乳液作为脂质体组装的模板，并结合超临界快速膨胀技术收集脂质体，为纳米脂质体的制备提供了一条新途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物制剂领域，具体涉及超临界微乳液耦合快速膨胀技术制备纳米脂 质体的方法。
技术介绍
纳米脂质体是以磷脂为药物载体，将药物包封于磷脂双分子层而制得的粒径小于 IOOnm的小单室脂质体(small unilamellar vesicles，SUVs)。相比于普通脂质体，纳米脂 质体具有突出的纳米效应，即小尺寸效应与表面效应，有利于改善难溶性药物的生物利用 度和吸收稳定性，提高药物的靶向作用，降低或减少药物对正常组织的损害，特别适合注射 给药。脂质体采用的制备方法有薄膜分散法、薄膜_超声波分散法、熔融法、冻融法、注 入法、逆相蒸发法、复乳法等。由于这些方法需要使用大量的有机溶剂，需要进行复杂的后 处理。更为关键的是，按传统方法制备的脂质体存在粒径较大，粒度分布不易控制等问题。超临界流体快速膨胀法(RESS)是一种新型超细粒子制备与包覆技术，其过程是 先将药物溶解在超临界CO2中，再通过喷嘴雾化喷出，经快速膨胀减压后，溶质因过饱和而 析出固体微粒。由于磷脂必须分散在水溶液中才能自发形成脂质体，常规RESS过程并不适 用脂质体形成，限制了其在脂质体形成的应用。中国专利“药物靶向脂质体的制备方法”(CN 1218746C)先将SOD药物形成乳浊液后，再利用超临界流体溶胀沉析药物。中国专利“化 妆品脂质体制备方法”(CN1254550A)、“脂溶性药物脂质体生产工艺及榄香烯脂质体注射 液” (CN1221607A)、“脂质体的生产工艺及设备” (CN148596A)都是将磷脂等原料等溶解在超 临界CO2中后，释放压力之形成微粒后，在常压下加入分散液中以形成脂质体。上述专利尽 管使用到了超临界CO2，但是脂质体膜材的溶解与分散是独立的两个步骤，未能充分利用超 临界CO2高流动性、连续过程的优势。申请者提出一种苍术酮脂质体的制备方法(苍术酮脂 质体及其制备方法，CN101703549A)，将脂质体膜材与苍术酮溶解于超临界CO2/乙醇中，溶 液经膨胀后分散缓冲溶液中，形成脂质体混悬液，使得超临界CO2介质中脂质体膜材、被包 封药物的膨胀与分散一步完成。但是，受限于超临界CO2与水的相容性问题，单纯利用RESS 技术在减小脂质体粒径还有一定局限，所制备脂质体的平均粒径在IOOnm左右，如进一步 减小脂质体的粒径，直至50nm以下，还有一定困难。超临界CO2微乳是把超临界CO2与微乳技术相结合而出现的一个崭新的领域。含 有双尾结构的磷脂可在超临界CO2中自发形成反胶团，进而增溶少量水，形成热力学稳定的 W/C(C02包水)的微乳液，微乳粒子大小在10 IOOnm之间，其质点大小可受超临界CO2参 数控制，从而为纳米材料的制备提供了模板。磷脂同时是构成脂质体的主要膜材，将磷脂在 CO2中形成的W/C微乳液经过超临界快速膨胀后喷射进水相介质中，可在超临界CO2介质中 均勻分散在水相中，获得分散性好、粒度分布均勻、平均粒度控制在IOOnm以下的纳米脂质 体混悬液。本申请将超临界流体微乳集成快速膨胀技术制备来制备纳米脂质体，相比于传统3方法具有优势在于(1)使用化学惰性的CO2为溶剂，操作条件温和，可以防止磷脂的氧化 降解；(2)可以调节超临界CO2参数来控制微乳的质点大小或聚集分子层的厚度，为纳米脂 质体形成提供了有效模板；(3)超临界流体的快速膨胀质量传递特性(如高扩散度和低粘 度)，有利于纳米级、粒度均勻的脂质体的分散、析出与收集。整体看来，该技术将超临界微 乳模板技术与超临界快速膨胀沉析收集技术耦合起来，为超临界CO2介质中纳米脂质体的 自组装和收集提供了一条新途径，具有技术与应用的新颖性和创造性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种超临界CO2流体制备纳米脂质体的方法。根据本专利技术的目的，本方法利用脂质膜材在超临界CO2中形成的微乳液作为纳米 脂质体组装的模板，并结合超临界快速膨胀技术收集脂质体，避免纳米脂质体在收集过程 中的聚集现象，实现了纳米脂质体组装与收集过程的连续完成，以解决现有技术存在的脂 质体容易团聚的不足之处。本专利技术所述制备纳米脂质体的方法，包括以下步骤1)在超临界反应釜内将一定量的脂质膜材与助表面活性剂溶解于超临界CO2中， 并增溶一定量的蒸馏水形成超临界微乳液；2)将所述超临界微乳液在设定的压力、温度条件下预膨胀后，以一定流速通过喷 嘴快速喷射至超临界收集釜内的水相介质中，经分散并沉析，形成脂质体混悬液；3)将CO2持续通过超临界收集釜，溶解并除去脂质体混悬液中的残余乙醇，经转子 计量计计量后排空，收集超临界收集釜内的纳米脂质体混悬液。所述脂质体膜材为磷脂酰胆碱；所述助表面活性剂为乙醇；所述水相介质为中性 磷酸盐缓冲溶液(PBS)。所述脂质膜材的用量为磷脂酰胆碱在CO2中的摩尔分数[χ (PC)]计为3. 8 X 10_4 2. 3 X 1(Γ3，优选 6. 9 XlCT4 1.9Χ10_3。所述蒸馏水的用量为水在CO2中的摩尔分数[X(H2O)]计为0 3. IX 10、优选 9. 4Χ1(Γ2 2. 3X1CT1。所述助表面活性剂的用量为乙醇在CO2中的摩尔分数[X(CH3CH2OH)]计为0 1.9X 10、优选 9. 7XlCT2 1.5Χ10Λ所述预膨胀压力为10 30MPa，优选为25 30MPa。所述预膨胀温度为323 343K，优选为333 338K。所述超临界微乳液是以2 lOL/min的流速喷射至PBS缓冲溶液，优选流速为2 5L/min。所述脂质体平均粒径为28 774nm，在优选工艺条件下制备的脂质体的平均粒径 在IOOnm以下，粒度分布窄而均勻。与现有技术相比，本专利技术的特点和优点在于1)以磷脂为表面活性剂在超临界CO2中形成微乳，微乳液一方面作为脂质体形成 的膜材，另一方面为脂质体的组装提供有效模板，通过调节超临界CO2参数来控制微乳的质 点大小，进一步将脂质体粒径控制在IOOnm以内。2)直接将磷脂的超临界溶液直接喷射进水相中能制备符合药典要求的脂质体，但 是进一步制备粒径更小的纳米脂质体存在一定的困难。由于磷脂在CO2中形成的W/C微乳4液与水、CO2亲和性较好，强化了 CO2与水溶液的混合传质作用，解决了脂质膜材在缓冲液中 不易扩散的问题，显著改善脂质体团聚现象，所制备的脂质体粒度分布窄而均勻。3)将超临界微乳液与超临界CO2快速膨胀耦合起来，使脂质体的制备与收集在超 临界CO2介质中连续完成，为进一步包封热敏性、不稳定药物创造了条件。附图说明图1显示本专利技术制备纳米脂质体的方法的一种实施方式的流程图，其中ICO2钢 瓶；2热交换器1 ；3冷机；4高压泵1 ；5热交换器2 ；6反应釜；7液体储罐；8高压泵2 ；9回 压调节阀；10热交换器3 ； 11喷嘴；12收集釜；13转子流量计；14量筒图2显示根据本专利技术方法制备的纳米脂质体的微观结构的透射电镜(TEM)图；图3显示根据本专利技术方法制备的纳米脂质体的表面微观结构的扫描电镜(SEM) 图； 图4显示根据本专利技术方法制备的纳米脂质体的粒度分布图。 具体实施例方式为了更好地理解本专利技术的实质，以下实施例用于详细说明本专利技术的
技术实现思路
，但 不应理解为对本专利技术保护范围的限制。实施例1纳米脂质体的制备与测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
一种超临界CO2流体制备纳米脂质体的方法，包括以下步骤1)在超临界反应釜内将一定量的脂质膜材与助表面活性剂溶解于超临界CO2中，并增溶一定量的蒸馏水形成超临界微乳液；2)将所述超临界微乳液在设定的压力、温度条件下预膨胀后，以一定流速通过喷嘴快速喷射至超临界收集釜内的水相介质中，经分散并沉析，形成脂质体混悬液；3)将CO2持续通过超临界收集釜，溶解并除去脂质体混悬液中的残余乙醇，经转子计量计计量后排空，收集超临界收集釜内的脂质体混悬液。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述脂质膜材为磷脂酰胆碱(PC)；所述助表面活 性剂为乙醇；所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：文震，刘波，郑宗坤，游新奎，蒲一涛，刘剑洪，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：94