【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于活性肽制备，具体涉及一种具有降尿酸活性的黄嘌呤氧化酶抑制肽及其制备方法和应用。
技术介绍
1、高尿酸血症(hyperuricemia，hua)是一种嘌呤代谢紊乱疾病，主要是体内尿酸生成量增加或尿酸排泄不足而引起的血液中尿酸浓度过高。人体血液中过多的尿酸会导致尿酸钠结晶盐在关节的沉积，从而诱发痛风。此外，大量流行病学与临床研究表明，高尿酸血症还极易引发糖尿病、心血管疾病、慢性肾脏疾病和高血压等其他并发症，已是继高血压、高血脂和高血糖的第四“高”。所以，及时预防和治疗高尿酸血症至关重要。尿酸(uricacid，ua)是由黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase，xo)催化次黄嘌呤和黄嘌呤氧化形成的，是人体内嘌呤代谢的产物，其中xo是嘌呤代谢途径的关键酶。目前，临床医学主要通过控制尿酸合成与促进尿酸排泄来治疗高尿酸血症，其中抑制尿酸合成的作用靶点大多数是降低xo的活性。抑制xo活性可有效减少体内尿酸的生成量，降低高尿酸血症和痛风的风险。非不索坦和别嘌呤醇是常见的xo抑制剂药物，在临床上表现出较好的降尿酸活性。但是，这些化学合成类药物会给人体带来头晕、呕吐和肝脏损伤等毒副作用。所以，寻求安全、有效、天然的xo抑制剂对治疗高尿酸血症具有重要意义。
2、食物来源的生物活性肽因其生物活性高、无毒副作用的特点，在预防和改善慢性病的药物研究和功能食品开发领域备受关注。近年来，从植物蛋白中发现了具有较高xo抑制活性的肽，如大米(氨基酸序列：aaaagakar)、核桃粕(氨基酸序列：wppkn和adiyte)和辣木叶(
3、中国是世界上最大的茶叶生产国。随着茶饮料市场规模的不断扩大，作为加工副产物的茶渣，其生成量也出现逐年剧增趋势，但目前茶渣主要作为废弃物丢弃，并未得到有效利用。据不完全统计，中国茶加工行业每年的湿茶渣产量高达2-3亿公斤，可作为一个良好的再利用资源。茶渣中含有18-20％的粗蛋白，其氨基酸组成丰富，是优质的植物蛋白。目前，关于茶叶中活性成分的研究大多集中于水溶性活性成分的研究，而对于茶渣中茶蛋白的高值化应用研究还较少。近年来，已有关于茶蛋白生物活性肽的报道，如降压肽、降血脂肽、抗氧化肽和降血糖肽。然而，关于茶蛋白来源的降尿酸肽还未见报道。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的不足和缺点，本专利技术的首要目的在于提供一种具备降尿酸活性的黄嘌呤氧化酶抑制肽。
2、本专利技术的另一目的在于提供上述黄嘌呤氧化酶抑制肽的制备方法。
3、本专利技术的再一目的在于提供上述黄嘌呤氧化酶抑制肽在制备降尿酸产品中的应用。
4、本专利技术的目的通过下述技术方案实现：
5、一种具备降尿酸活性的黄嘌呤氧化酶抑制肽，其氨基酸序列为pdeavayg；
6、所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽的制备方法，包含如下步骤；
7、直接采用体外固相合成上述黄嘌呤氧化酶抑制肽或者以茶渣为原料，通过碱提酸沉提取、中性蛋白酶水解、纯化得到具备降尿酸活性的黄嘌呤氧化酶抑制肽；
8、所述的中性蛋白酶水解的条件优选为：在39℃、ph 7.5条件下水解3.4h；
9、所述的中性蛋白酶水解的底物浓度优选为2％(m/v)、酶底比优选为0.3％(m/m)；
10、所述的纯化包含超滤分离和液相色谱分离等步骤；
11、所述的超滤分离的具体操作为：
12、采用超滤管对茶蛋白酶解液进行分离，收集分子量<3kda组分；
13、所述的液相色谱分离的具体操作为：
14、采用制备型反相c18玻璃柱对茶蛋白酶解液<3kda的超滤组分进行高效液相色谱分离纯化；收集活性组分，旋转蒸发浓缩并进行冷冻干燥，得到具备降尿酸活性的黄嘌呤氧化酶抑制肽；
15、所述的液相色谱的条件优选为：流动相a：超纯水+0.1％tfa；流动相b：甲醇+0.1％tfa；进样量5ml；洗脱流速10ml/min；检测波长214nm和280nm；时间程序：0～20min 6％～25％b，20～40.00min 25％～70％ b，40～60min 70％～90％ b，以上百分比均为体积百分比；
16、所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽在制备抑制黄嘌呤氧化酶产品中的应用；
17、所述的抑制黄嘌呤氧化酶产品可以为具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的食品或营养补充剂；
18、所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽在制备降尿酸产品中的应用；
19、所述的降尿酸产品可以为具有降尿酸活性的药物、食品或营养补充剂；
20、一种黄嘌呤氧化酶抑制剂，包含上述黄嘌呤氧化酶抑制肽、含有上述黄嘌呤氧化酶抑制肽的茶蛋白中性蛋白酶水解物和含有上述黄嘌呤氧化酶抑制肽的水解物中的至少一种作为活性成分；
21、所述的黄嘌呤氧化酶抑制剂中还包含药物学上可接受的载体或辅料；
22、所述药学上可接受的载体或辅料包括助溶剂、保湿剂、表面活性剂、基质、乳化剂、防腐剂和溶剂等中的至少一种；
23、一种降尿酸药物，包含上述黄嘌呤氧化酶抑制肽、含有上述黄嘌呤氧化酶抑制肽的茶蛋白中性蛋白酶水解物和含有上述黄嘌呤氧化酶抑制肽的水解物中的至少一种作为活性成分；
24、所述的降尿酸药物中还包含药物学上可接受的载体或辅料；
25、所述药学上可接受的载体或辅料包括助溶剂、保湿剂、表面活性剂、基质、乳化剂、防腐剂和溶剂等中的至少一种；
26、一种营养补充剂，包含上述黄嘌呤氧化酶抑制肽、含有上述黄嘌呤氧化酶抑制肽的茶蛋白中性蛋白酶水解物和含有上述黄嘌呤氧化酶抑制肽的水解物中的至少一种作为活性组分；
27、本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：
28、(1)本专利技术对具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的茶蛋白水解物进行分离和表征，利用分子对接技术筛选出具有良好xo抑制作用的活性肽，结合体外胃肠模拟消化研究茶蛋白xo抑制肽的生物稳定性。基于hk-2高尿酸血症细胞模型评价活性肽的降尿酸活性，并通过转录组生物技术研究活性肽在基因水平的作用机制。通过以上研究，筛选出高活性xo抑制肽。
29、(2)本研究基于前期工艺参数酶解制备茶蛋白水解物，随后采用超滤、rp-hplc和hplc-ms/ms技术对具有黄嘌呤氧化酶抑制活性的茶蛋白水解物进行分离、纯化、表征鉴定，同时利用分子对接技术筛选出具有良好xo抑制作用的活性肽，并结合体外胃肠模拟消化研究茶蛋白xo抑制肽的生物稳定性；基于hk-2高尿酸血症细胞模型评价目标肽段的降尿酸活性，并通过转录组生物技术对目标肽段的降尿酸活性和作用机制进行了深入研究。结果表明，本专利技术获得的一个新肽段pdeavayg(820.3602da)具有良本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种具备降尿酸活性的黄嘌呤氧化酶抑制肽，其特征在于其氨基酸序列为PDEAVAYG。
2.权利要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽的准备方法，其特征在于包含如下步骤：
3.根据权利要求2所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽的准备方法，其特征在于：
4.根据权利要求3所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽的准备方法，其特征在于：
5.权利要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽在制备抑制黄嘌呤氧化酶产品中的应用。
6.权利要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽在制备降尿酸产品中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：
8.一种黄嘌呤氧化酶抑制剂，其特征在于包含权利要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽、含有权利要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽的茶蛋白中性蛋白酶水解物和含有权利要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽的水解物中的至少一种作为活性成分。
9.一种降尿酸药物，其特征在于包含权利要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽、含有权利要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽的茶蛋白中性蛋白酶水解物和含有权利要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽的水解物中的至少一种作为
10.一种营养补充剂，其特征在于包含权利要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽、含有权利要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽的茶蛋白中性蛋白酶水解物和含有权利要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽的水解物中的至少一种作为活性组分。
...【技术特征摘要】
1.一种具备降尿酸活性的黄嘌呤氧化酶抑制肽，其特征在于其氨基酸序列为pdeavayg。
2.权利要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽的准备方法，其特征在于包含如下步骤：
3.根据权利要求2所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽的准备方法，其特征在于：
4.根据权利要求3所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽的准备方法，其特征在于：
5.权利要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽在制备抑制黄嘌呤氧化酶产品中的应用。
6.权利要求1所述的黄嘌呤氧化酶抑制肽在制备降尿酸产品中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：
8.一种黄嘌呤氧化酶抑制剂，其特征在于包含权...
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