【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及对cd47具有特异性的人源化抗体及包含其的用于预防或治疗cd47相关疾病的药物组合物，更详细地，涉及对cd47具有特异性的人源化抗体、包含上述人源化抗体的用于预防或治疗由过表达cd47的细胞介导的疾病的药物组合物。
技术介绍
1、cd47也称为整联蛋白结合蛋白(iap)，为在细胞表面广泛表达的跨膜蛋白，属于免疫球蛋白超家族(immunoglobulin superfamily)。cd47作为细胞表面的非常重要的标记物，分子量为47kd～55kd之间，结构包括一个氨基酸末端的细胞外可变区、一个由3个～5个高疏水性跨膜片段构成的跨膜区以及一个亲水性羧基末端细胞质尾区(cytoplasmictail)。它与整联蛋白、sirpα(信号调节蛋白α)、sirpγ以及血小板反应蛋白(thrombospondin)等多种配体相互作用。
2、sirpα主要在包括巨噬细胞、颗粒细胞、骨髓系统树突细胞(dcs)、肥大细胞及造血干细胞(hscs)等细胞的前体在内的骨髓细胞中表达。sirpα抑制巨噬细胞对宿主细胞的吞噬作用，通过宿主靶向细胞上表达的cd47的巨噬细胞上的sirpα连接(ligation)生成由shp-1介导的抑制信号，从而将吞噬作用调节为阴性。
3、在先天免疫系统中，cd47通过与骨髓细胞中表达的sirpα的结合来发挥功能，在生理条件下，cd47广泛表达的作用在于防止健康细胞被先天免疫系统清除。
4、然而，肿瘤细胞却可以有效逃避通过cd47的过表达形成的免疫筛查。近几年来，cd47及cd4
5、抗cd47抗体对肿瘤的治疗涉及多种机制。首先，抗cd47抗体通过阻断肿瘤细胞上的cd47与巨噬细胞上的sirpα的结合来使肿瘤细胞吞噬。并且，抗cd47抗体可以诱导与自然杀伤(nk)细胞相关的肿瘤细胞的细胞毒性，可以通过直接诱导细胞凋亡来清除肿瘤细胞。最后，抗cd47抗体可以激活cd8+t细胞，引起获得性t细胞免疫反应来进一步杀伤肿瘤细胞。
6、为了治疗或诊断这样的表达cd47的肿瘤细胞或与cd47的过表达相关的疾病等，开发了对cd47具有特异性的抗体，在国际公开专利第wo2018-075857号、国际公开专利第wo2017-121771号及国际公开专利第wo2013-119714号中公开了有关多种抗cd47抗体的内容。
7、为了生产上述用于治疗的抗体，主要利用小鼠来生产单克隆抗体(monoclonalantibody)。然而，小鼠源性单克隆抗体等非人类抗体在人体内被看作外来抗原，诱发免疫反应而且半衰期短，因此具有治疗效果受限的问题。
8、为了解决上述问题，开发了除抗体的与抗原结合的cdr部位以外的其余部分都取代为人类抗体的人源化抗体。现在使用的将小鼠抗体取代为人源化抗体的方法为选择与所要取代的抗体最为相似的人类抗体基因后，通过称为cdr移植的方法仅将小鼠抗体的cdr部位取代为人类抗体cdr位置。这样的人源化抗体的基因的大部分为人源化，具有可以在人体内减少免疫反应的优点。
技术实现思路
1、技术问题
2、为了减少在人体内的免疫反应，本专利技术选择与cd47结合的抗体(3a5)，利用其制备人源化的抗cd47抗体。确认到本专利技术中制备的人源化的抗cd47抗体与cd47抗原特异性结合，确认到不仅有效阻断cd47-sirpα(信号调节蛋白α)结合，还诱导白血病外周型来源的t细胞(jurkat细胞(jurkat cell))的细胞凋亡(apoptosis)并有效抑制肿瘤生长，从而完成本专利技术。
3、因此，本专利技术的目的在于，提供与cd47特异性结合的人源化抗体、编码上述抗体的多核苷酸、表达上述抗体的载体、由上述载体转化的重组细胞。
4、本专利技术的另一目的在于，提供包含上述与cd47特异性结合的人源化抗体的用于预防或治疗由过表达cd47的细胞介导的疾病的药物组合物。
5、技术方案
6、为了实现上述目的，本专利技术提供由如下部分构成的与cd47特异性结合的人源化抗体或其片段：(1)由序列11的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列12的氨基酸序列表示的轻链可变区；(2)由序列17的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列18的氨基酸序列表示的轻链可变区；(3)由序列23的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列24的氨基酸序列表示的轻链可变区；(4)由序列29的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列30的氨基酸序列表示的轻链可变区；(5)由序列35的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列36的氨基酸序列表示的轻链可变区；(6)由序列41的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列42的氨基酸序列表示的轻链可变区；(7)由序列47的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列48的氨基酸序列表示的轻链可变区；(8)由序列53的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列54的氨基酸序列表示的轻链可变区；(9)由序列59的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列60的氨基酸序列表示的轻链可变区；(10)由序列65的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列66的氨基酸序列表示的轻链可变区；(11)由序列71的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列72的氨基酸序列表示的轻链可变区；(12)由序列77的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列78的氨基酸序列表示的轻链可变区；(13)由序列83的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列84的氨基酸序列表示的轻链可变区；(14)由序列89的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列90的氨基酸序列表示的轻链可变区；(15)由序列95的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列96的氨基酸序列表示的轻链可变区；或者(16)由序列101的氨基酸序列表示的重链可变区及由序列102的氨基酸序列表示的轻链可变区。
7、在本专利技术一优选实施例中，上述抗体可以为单克隆抗体，优选地，可以为scfv(单链可变片段(single-chain variable fragment))。
8、并且，本专利技术提供编码上述与cd47特异性结合的人源化抗体或其片段的多核苷酸。
9、并且，本专利技术提供包含编码上述与cd47特异性结合的人源化抗体或其片段的多核苷酸的载体。
10、并且，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种与CD47特异性结合的人源化抗体或其片段，其特征在于，包括：
2.一种多核苷酸，其特征在于，编码权利要求1所述的与CD47特异性结合的人源化抗体或其片段。
3.一种载体，其特征在于，包含编码权利要求1所述的与CD47特异性结合的人源化抗体或其片段的多核苷酸。
4.一种重组细胞，其特征在于，生产由权利要求3所述的载体转化的与CD47特异性结合的人源化抗体或其片段。
5.一种用于预防或治疗由过表达CD47的细胞介导的疾病的药物组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的与CD47特异性结合的人源化抗体或其片段。
6.根据权利要求5所述的用于预防或治疗由过表达CD47的细胞介导的疾病的药物组合物，其特征在于，上述组合物中包含的与CD47特异性结合的人源化抗体或其片段防止CD47与信号调节蛋白α的相互作用，或者促进对于CD47过表达细胞的巨噬细胞介导的吞噬作用。
7.根据权利要求5所述的用于预防或治疗由过表达CD47的细胞介导的疾病的药物组合物，其特征在于，上述组合物还包含免疫检查点抑制剂。
8.根据
9.根据权利要求5所述的用于预防或治疗由过表达CD47的细胞介导的疾病的药物组合物，其特征在于，上述由过表达CD47的细胞介导的疾病为过表达CD47的癌症或肿瘤。
10.根据权利要求9所述的用于预防或治疗由过表达CD47的细胞介导的疾病的药物组合物，其特征在于，上述癌症或肿瘤选自由血液癌、卵巢癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌、骨髓瘤、神经母细胞诱导的中枢神经系统肿瘤、单核细胞白血病、B细胞诱导的白血病、T细胞诱导的白血病、B细胞诱导的淋巴瘤、T细胞诱导的淋巴瘤及肥大细胞诱导的肿瘤组成的组中。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种与cd47特异性结合的人源化抗体或其片段，其特征在于，包括：
2.一种多核苷酸，其特征在于，编码权利要求1所述的与cd47特异性结合的人源化抗体或其片段。
3.一种载体，其特征在于，包含编码权利要求1所述的与cd47特异性结合的人源化抗体或其片段的多核苷酸。
4.一种重组细胞，其特征在于，生产由权利要求3所述的载体转化的与cd47特异性结合的人源化抗体或其片段。
5.一种用于预防或治疗由过表达cd47的细胞介导的疾病的药物组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的与cd47特异性结合的人源化抗体或其片段。
6.根据权利要求5所述的用于预防或治疗由过表达cd47的细胞介导的疾病的药物组合物，其特征在于，上述组合物中包含的与cd47特异性结合的人源化抗体或其片段防止cd47与信号调节蛋白α的相互作用，或者促进对于cd47过表达细胞的巨噬细胞介导的...
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