一种rh-FSH的提纯方法技术

技术编号：41007001 阅读：11 留言：0更新日期：2024-04-18 21:43

本发明专利技术公开了一种rh‑FSH的提纯方法，包括：S100：将重组人卵泡刺激素粗料和醋酸钠溶液混合，然后亲和层析吸附，洗脱，得到第一洗脱料；S200：将第一洗脱料过100kD超滤膜，得到超滤料；S300：将超滤料过羧甲基阳离子交换层析柱，洗脱，得到第二洗脱料；S400：将第二洗脱料和乙醇溶液混合，沉淀、离心、干燥，得到纯化后重组人卵泡刺激素料。通过该方法能够有效的对重组人卵泡刺激素粗料进行纯化，而且步骤工艺简单，能有效的降低成本。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及促卵泡激素，具体而言，涉及一种rh-fsh的提纯方法。

技术介绍

1、促卵泡激素(fsh)，与黄体生成素统称促性腺激素，具有促进卵泡发育成熟作用，与黄体生成素一起促进雌激素的分泌。促卵泡激素在人体内呈脉冲式分泌，女性随月经周期而改变。促卵泡激素的主要作用是使颗粒细胞增生，内膜细胞分化,卵泡液形成，卵泡腔扩大，从而使卵泡生长和发育，提高成熟卵泡的有效率，进而提高排卵率与妊娠率。由于fsh合成和分泌不足所致的fsh浓度过低是女性和男性不育的主要原因。在女性中，这一状态的特征表现为不排卵或排卵异常；在男性中，可能会由于没有足够量的有活力的精子产生而导致不育。在不孕不育的诊断和治疗中，fsh是发挥着重要作用的生物活性分子，在人类辅助生殖技术中fsh扮演着重要的角色，是目前市场上常见的用于治疗男女不孕症的主要药物之一。

2、应用dna重组技术生产的重组人卵泡刺激素(rh-fsh)具有标准化的分子量和生物学活性，避免了由尿源提取的fsh在糖基结构上的差异而造成的fsh异构体生物活性上的差异，可以提高产品的质量和产量，同时rh-fsh还具有优良的安全特性。但是由于重组人卵泡刺激素的生产步骤复杂、成本昂贵，导致重组人卵泡刺激素的推广受到很大的阻碍。

技术实现思路

1、本专利技术提供一种rh-fsh的提纯方法，通过该方法能够有效的对重组人卵泡刺激素粗料进行纯化，而且步骤工艺简单，能有效的降低成本。

2、本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种rh-fsh的提纯方法，包括：

3、s100：将重组人卵泡刺激素粗料和醋酸钠溶液混合，然后亲和层析吸附，洗脱，得到第一洗脱料；

4、s200：将第一洗脱料过100kd超滤膜，得到超滤料；

5、s300：将超滤料过羧甲基阳离子交换层析柱，洗脱，得到第二洗脱料；

6、s400：将第二洗脱料和乙醇溶液混合，沉淀、离心、干燥，得到纯化后重组人卵泡刺激素料。

7、进一步地，s100中，将质量份之比为(1-3)：(10-15)的重组人卵泡刺激素粗料和醋酸钠溶液混合。

8、进一步地，s100中，使用质量分数为5％-8％的醋酸钠溶液。

9、进一步地，s100中，使用质量分数为15％-30％的盐酸溶液进行洗脱。

10、进一步地，s100中，选用glutathione sepfast亲和层析柱吸附。

11、进一步地，s300中，控制上料速率在1.5bv/h、上料量在6bv。

12、进一步地，s300中，使用包含质量份之比为(1.5-2.5)：(4-6)的醋酸钠和氯化钠的洗脱液进行洗脱。

13、进一步地，s300中，控制洗脱的速度在2bv/h。

14、进一步地，s400中，将体积比为(0.9-1.1)：(2-3)的第二洗脱料和乙醇溶液混合。

15、进一步地，s400中，以12000r/min-15000r/min的速率离心10min-20min。

16、与现有技术相比，本专利技术的优点是：通过亲和层析以及羧甲基阳离子交换层析柱进行双重吸附，同时还配合使用100kd超滤膜，能够有效的将重组人卵泡刺激素分离纯化出来，最后还通过乙醇沉淀以及离心分离，进一步的将成分纯化，能够制备得到高纯度的重组人卵泡刺激素。

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【技术保护点】

1.一种rh-FSH的提纯方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述S100中，将质量份之比为(1-3)：(10-15)的所述重组人卵泡刺激素粗料和醋酸钠溶液混合。

3.如权利要求2所述的提纯方法，其特征在于，所述S100中，使用质量分数为5％-8％的醋酸钠溶液。

4.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述S100中，使用质量分数为15％-30％的盐酸溶液进行洗脱。

5.如权利要求4所述的提纯方法，其特征在于，所述S100中，选用Glutathione SepFast亲和层析柱吸附。

6.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述S300中，控制上料速率在1.5BV/h、上料量在6BV。

7.如权利要求6所述的提纯方法，其特征在于，所述S300中，使用包含质量份之比为(1.5-2.5)：(4-6)的醋酸钠和氯化钠的洗脱液进行洗脱。

8.如权利要求7所述的提纯方法，其特征在于，所述S300中，控制洗脱的速度在2BV/h。

9.如权利要求1所述的提纯

10.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述S400中，以12000r/min-15000r/min的速率离心10min-20min。

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【技术特征摘要】

1.一种rh-fsh的提纯方法，其特征在于，包括：

2.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述s100中，将质量份之比为(1-3)：(10-15)的所述重组人卵泡刺激素粗料和醋酸钠溶液混合。

3.如权利要求2所述的提纯方法，其特征在于，所述s100中，使用质量分数为5％-8％的醋酸钠溶液。

4.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于，所述s100中，使用质量分数为15％-30％的盐酸溶液进行洗脱。

5.如权利要求4所述的提纯方法，其特征在于，所述s100中，选用glutathione sepfast亲和层析柱吸附。

6.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：任瑶，宋智，王超，邰会波，王玉霞，李双双，安潇潇，
申请(专利权)人：长春博德生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：

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