【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种靶向线粒体cd147的重组人单链抗体及其表达载体在制备抑制肿瘤转移药物中的应用。
技术介绍
1、肿瘤转移是肿瘤患者预后不良的主要因素，90％肿瘤患者的死亡归因于肿瘤转移。研究发现，虽然90％的肿瘤细胞能脱离原发瘤，但仅不到2％的肿瘤转移细胞能形成微转移灶，仅0.02％的肿瘤转移细胞能产生临床可见的转移灶。由此可见，肿瘤转移效率非常低，并非所有的肿瘤细胞都能完成全部转移过程。最终能形成转移瘤的肿瘤细胞即转移起始细胞(metastasis-initiating cells,mics)既具有无限增殖潜能，又能够克服转移过程的种种关卡，是引起肿瘤转移复发的根源。因此，靶向干预mics是治疗肿瘤转移的关键所在。
2、临床上，大部分肿瘤的转移途径为血液转移，其具体病理过程可分为肿瘤细胞从原发瘤脱落、侵入血管/淋巴管、在血管/淋巴管移行生存、逸出血管/淋巴管定植继发部位、形成微转移灶、大量增殖形成继发肿瘤六个步骤。但就mics起源而言，其可能来源于肿瘤原发灶部位的肿瘤干细胞(cancer stem cells，cscs)，或者源于转移过程中获得起始转移潜能的肿瘤细胞。后一种情况，即起源于肿瘤细胞的mics，其起始转移潜能的获得可能是转移起始与血液运行阶段的失巢、血流冲击以及转移灶周围基质等环境压力条件适应与筛选的结果。
3、有研究报道，乳腺癌病人血液中的循环肿瘤细胞(circulating tumor cells，ctcs)即是重要的mics来源。专利技术人在研究中也发现，乳腺癌
4、肿瘤细胞转移过程中会遭遇多种微环境应激，但mics拥有极强适应能力，可根据微环境的改变选择有利的代谢方式，如重塑营养获取方式及代谢途径，以满足其维持生存、快速生长、获得起始转移潜能等需求。因而，细胞代谢重塑是肿瘤转移的关键环节，也是肿瘤细胞重编程为mics的重要特征与原因。当失巢肿瘤细胞脱离原发瘤并且在血循环中播散转移时，其与细胞外基质结构的联系脱离，细胞内极性分布丢失，葡萄糖转运缺陷；此时，失巢抵抗的肿瘤细胞为维持存活调整了其能量供应来源，以代偿甚至增强线粒体氧化磷酸化(oxphos)代谢活性与atp合成能力。例如，乳腺癌细胞在葡萄糖供应缺失时，转而利用其代谢副产物乳酸作为能量代谢“燃料”。体内示踪研究发现，循环乳酸作为侵袭性肿瘤细胞的主要营养和能量来源，可被肿瘤细胞自主摄取；且与葡萄糖相比，乳酸对三羧酸(tca)循环的贡献占主导地位。类似地，专利技术人在非靶向代谢组学分析与干性潜能研究中发现，在失巢抵抗肿瘤细胞显著摄取利用且排位前5的代谢物中，作为葡萄糖储备代谢物的乳酸浓度水平显著改变，尤其是其血清浓度在乳腺癌病人显著升高并随小鼠转移进程逐渐下降；进而发现，乳酸能诱导失巢乳腺癌细胞重编程，外源乳酸注射显著促进乳腺癌肺转移结节形成、肺转移灶cscs比例、外周血ctc数目及其干性基因sox2表达，但并不影响原发灶乳腺癌细胞生长与干性潜能。由此提示，失巢乳腺癌细胞可能通过利用乳酸维持生存，并且进一步重编程为mics，推动转移进程。进一步，专利技术人对乳酸介导mics重编程的代谢表观遗传学机制进行探讨发现，乳酸进入tca循环后通过转变为tca中间代谢物α-酮戊二酸、抑制dna甲基转移酶dnmt3b的酶活性、降低干性转录因子sox2的甲基化水平，进而促进sox2表达及其介导的干性潜能。因此，乳酸既是链接线粒体oxphos与细胞核表观遗传调控的桥梁，又对肿瘤转移及mics重编程具有促进作用；干预乳酸介导的mics重编程现象因而是对抗乳腺癌转移的重要手段。
5、乳酸不仅可作为肿瘤细胞代谢的燃料；又是重要的信号分子，可通过影响其受体gpr81信号或参与表观遗传修饰调节的组蛋白去乙酰化酶，增加干性基因转录，促进cscs功能。专利技术人通过靶向13c同位素代谢流分析显示，乳酸可被失巢肿瘤细胞摄取并被氧化进入tca循环，参与线粒体oxphos供能；尤其是靶向2h同位素代谢流分析显示，乳酸先被失巢肿瘤细胞摄取进入线粒体，然后再被氧化为丙酮酸，继而掺入tca循环。这些证据充分说明，乳酸摄取氧化进而作为燃料供能的功能而不是其作为信号分子的功能介导了乳酸诱导的mics重编程及其促进肿瘤转移的作用。因而，靶向干预乳酸摄取氧化是阻抑mics失巢重编程及其介导肿瘤转移进程的重要途径。
技术实现思路
1、基于专利技术人的研究发现，本专利技术提供了一种靶向线粒体cd147重组人单链抗体。
2、为此，本专利技术所述抗体的编码基因包含cd147人源化单链抗体的编码基因和线粒体定位靶向序列编码基因；所述cd147人源化单链抗体的编码基因如seq id no：2所示。
3、可选的方案是，所述线粒体定位靶向序列编码基因如seq id no：1所示。
4、可选的方案是，所述抗体的编码基因还包含荧光蛋白的编码基因。
5、可选的方案是，所述荧光蛋白编码基因如seq id no：3所示。
6、本专利技术的靶向线粒体cd147重组人单链抗体包含cd147人源化单链抗体和线粒体定位靶向序列；所述cd147人源化单链抗体序列如seq id no：5所示。
7、可选的方案是，所述线粒体定位靶向序列如seq id no：4所示。
8、可选的方案是，所述抗体的编码基因还包含荧光蛋白。进一步可选的方案是，所述荧光蛋白序列如seq id no：6所示。
9、更优选的，所述的重组人单链抗体包括依次串联的如seq id no.4所示的细胞色素c氧化酶viii亚基的n端线粒体定位靶向序列(mts)或称导肽序列和如seq id no.5所示的cd147人源化单链抗体(scfv)序列。
10、本专利技术还提供一种靶向线粒体cd147重组人单链抗体表达载体，所述表达载体上连接有上述抗体的编码序列。
11、可选的方案是，所述表达载体为在真核表达载体gv469、gv492或gv348中插入上述抗体的编码序列。
12、本专利技术将线粒体定位靶向序列(mts)、cd147人源化单链抗体(scfv)序列插入到表达载体gv469，构建得到特异性靶向线粒体cd147的表达载体；此载体表达制备的靶向线粒体cd147重组人单链抗体能特异性结合线粒体定位的cd147，并且通过有效阻断其介导的乳酸摄取氧化及其引起的氧化磷酸化代谢与干性潜能促进转移，进而抑制乳腺癌体内肺转移灶的形成。提示本专利技术的靶向线粒体cd147重组人单链抗体在阻抑肿瘤转移中具有潜在的应用价值。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种靶向线粒体CD147重组人单链抗体，其特征在于，所述抗体的编码基因包含CD147人源化单链抗体的编码基因和线粒体定位靶向序列编码基因；所述CD147人源化单链抗体的编码基因如SEQ ID NO：2所示。
2.根据权利要求1所述的靶向线粒体CD147重组人单链抗体，其特征在于，所述线粒体定位靶向序列编码基因如SEQ ID NO：1所示。
3.根据权利要求1所述的靶向线粒体CD147重组人单链抗体，其特征在于，所述抗体的编码基因还包含荧光蛋白的编码基因。
4.根据权利要求3所述的靶向线粒体CD147重组人单链抗体，其特征在于，所述荧光蛋白编码基因如SEQ ID NO：3所示。
5.一种靶向线粒体CD147重组人单链抗体，其特征在于，所述抗体包含CD147人源化单链抗体和线粒体定位靶向序列；所述CD147人源化单链抗体序列如SEQ ID NO：5所示。
6.根据权利要求1所述的靶向线粒体CD147重组人单链抗体，其特征在于，所述线粒体定位靶向序列如SEQ ID NO：4所示。
7.根据权利要求1所述的靶向线
8.根据权利要求7所述的靶向线粒体CD147重组人单链抗体，其特征在于，所述荧光蛋白序列如SEQ ID NO：6所示。
9.根据权利要求1所述的靶向线粒体CD147重组人单链抗体，其特征在于，所述的重组人单链抗体包括依次串联的如SEQ ID NO.4所示的细胞色素C氧化酶VIII亚基的N端线粒体定位靶向序列和如SEQ ID NO.5所示的CD147人源化单链抗体序列。
10.一种靶向线粒体CD147重组人单链抗体表达载体，其特征在于，所述表达载体上连接有权利要求1-9任一权利要求所述抗体的编码序列。
11.根据权利要求10所述的靶向线粒体CD147重组人单链抗体表达载体，其特征在于，所述表达载体为在真核表达载体GV469、GV492或GV348中插入权利要求1-9任一权利要求所述抗体的编码序列。
12.权利要求1-9任一所述的靶向线粒体CD147重组人单链抗体及其表达载体用于制备治疗肿瘤转移药物的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向线粒体cd147重组人单链抗体，其特征在于，所述抗体的编码基因包含cd147人源化单链抗体的编码基因和线粒体定位靶向序列编码基因；所述cd147人源化单链抗体的编码基因如seq id no：2所示。
2.根据权利要求1所述的靶向线粒体cd147重组人单链抗体，其特征在于，所述线粒体定位靶向序列编码基因如seq id no：1所示。
3.根据权利要求1所述的靶向线粒体cd147重组人单链抗体，其特征在于，所述抗体的编码基因还包含荧光蛋白的编码基因。
4.根据权利要求3所述的靶向线粒体cd147重组人单链抗体，其特征在于，所述荧光蛋白编码基因如seq id no：3所示。
5.一种靶向线粒体cd147重组人单链抗体，其特征在于，所述抗体包含cd147人源化单链抗体和线粒体定位靶向序列；所述cd147人源化单链抗体序列如seq id no：5所示。
6.根据权利要求1所述的靶向线粒体cd147重组人单链抗体，其特征在于，所述线粒体定位靶向序列如seq id no：4所示。
7.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈志南，李玲，杨向民，朱平，张征，崔洪勇，张佳佳，樊新宇，
申请(专利权)人：中国人民解放军空军军医大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。