一种新型双层蛋白链霉亲和素磁珠的构建方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种新型双层蛋白链霉亲和素磁珠的构建方法及应用，构建方法包括：首先将惰性蛋白引入到磁珠表面，形成第一层亲水层；然后再利用惰性蛋白上的活性基团包被链霉亲和素，得到双层蛋白链霉亲和素磁珠。本发明专利技术通过两层蛋白包被，尽最大可能的包裹住磁珠上的疏水位点，达到降低反应本底的目的；相对仅具有常规活性基团的磁珠，惰性蛋白上丰富的氨基或添加的生物素会起到一个活性基团数量放大的功能，以此在磁珠上提供更多的链霉亲和素；链霉亲和素和磁珠之间加大了距离，使得蛋白更加暴露在水相环境当中，也可以起到降低本底的作用，该方案可最大程度的降低非特异性吸附并提高信号值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于化学检测，涉及一种新型双层蛋白链霉亲和素磁珠的构建方法及应用。

技术介绍

1、磁性微球(一般也称磁珠)的应用非常广泛，可以与细胞、药物、蛋白质(包括各种抗体、抗原、酶等)、核酸通过共价化学反应结合或非特异性吸附结合，应用于各种生物学提取、检测，甚至临床的体内实验，比如药物传递、磁共振成像(mri)造影剂和热疗等。其应用最广泛的还是临床上的各种体外诊断技术，以及科研领域生物分子的纯化应用，比如细胞和外泌体分离、核酸提取、生物药物的靶点鉴定及代谢性质研究、蛋白纯化与免疫层析等等。

2、在免疫化学发光检测试剂中，磁珠一般要配合抗体或其他特异性蛋白一起使用，最终形成磁珠-捕获抗体/蛋白-被检测物-检测抗体/蛋白+发光基团的结构。在现有的链霉亲和素(sa)磁珠构建中，可以采用化学活性基团，如羧基-cooh，甲苯磺酰基(tosyl)、环氧基(epoxy)、氨基(-nh2)，甚至比较不活泼的羟基-oh；然后在这些基团上通过各种方式活化后直接偶联链霉亲和素。这种磁珠在下游的应用中满足了部分需求。下游的使用方式往往是把生物素化的抗体和各种结合蛋白通本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种新型双层蛋白链霉亲和素磁珠的构建方法，包括：首先将惰性蛋白引入到磁珠表面，形成第一层亲水层；然后再利用惰性蛋白上的活性基团包被链霉亲和素，得到双层蛋白链霉亲和素磁珠。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述磁珠包括有活性基团和无活性基团的磁珠，有活性基团的磁珠通过活性基团连接惰性蛋白和非特异性吸附惰性蛋白；无活性基团的磁珠通过非特异性吸附惰性蛋白。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述的活性基团包括羧基、甲苯磺酰基、环氧基、氨基。

4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，非特异性吸附的惰性蛋白需经过特殊处理，处理...

【技术特征摘要】

1.一种新型双层蛋白链霉亲和素磁珠的构建方法，包括：首先将惰性蛋白引入到磁珠表面，形成第一层亲水层；然后再利用惰性蛋白上的活性基团包被链霉亲和素，得到双层蛋白链霉亲和素磁珠。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述磁珠包括有活性基团和无活性基团的磁珠，有活性基团的磁珠通过活性基团连接惰性蛋白和非特异性吸附惰性蛋白；无活性基团的磁珠通过非特异性吸附惰性蛋白。

3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述的活性基团包括羧基、甲苯磺酰基、环氧基、氨基。

4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，非特异性吸附的惰性蛋白需经过特殊处理，处理方式为加热使蛋白去折叠以暴漏疏水位点，以增强惰性蛋白和磁珠的吸附稳定性。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述惰性蛋白在结合磁珠之前可以是生物素化或非生物素化。

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【专利技术属性】
技术研发人员：李沛，许秀坤，周超，田腾飞，
申请(专利权)人：苏州派博思生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：