【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生化检测，涉及一种准确定量包被抗体后磁珠的浓度的方法。
技术介绍
1、磁性微球(一般也称磁珠)的应用非常广泛，可以与细胞、药物、蛋白质(包括各种抗体、抗原、酶等)、核酸通过共价化学反应结合，应用于各种生物学提取、检测，甚至临床的体内实验，比如药物传递、磁共振成像(mri)造影剂等。但应用最广泛的还是临床上的各种体外诊断技术，以及科研领域生物分子的纯化应用，比如细胞和外泌体分离、核酸提取、生物药物的靶点鉴定及代谢性质研究、蛋白纯化与免疫层析等等。
2、磁珠作为重要的固相载体，其表面往往含有各种活性基团，如羧基、甲苯磺酰基、环氧基、氨基等等。在使用前，往往在其表面通过共价偶联的形式包被上抗体或抗原等，在偶联包被的过程中，由于反复洗涤，磁珠会有损失，从而导致最初磁珠的投入量与最终实际磁珠的含量有着较大的差别。不同的批次，不同的操作环境，包被过程中磁珠的损失量也会不同。而且其状态由原来固态变成液态，磁珠表面包覆蛋白本身也有重量等，都给磁珠的准确定量带来一定的难度。如果后续磁珠的使用场景对磁珠的浓度定量有很高的要求，如化学发光试剂，会影响试剂批间的稳定性，从而影响检测试剂的结果。
3、目前没有很好的、能实现准确定量的磁珠定量方法，尤其是针对包被蛋白以后磁珠。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的是提供一种准确定量包被抗体后磁珠的浓度的方法。在通过称重法对磁珠进行物理定量前，使用特殊组合的缓冲液依次进行清洗，减少包覆的抗体对磁珠浓度定量产生的影响，从而使
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：
3、一种准确定量包被抗体后磁珠的浓度的方法，包括：
4、1)取n个干净的玻璃容器，烘干，冷却至室温后，称量每个空容器的重量a；
5、2)用移液管移取等量充分混匀的包被抗体后的磁珠溶液至n个容器中，称量每个容器的重量，并记录重量b；
6、3)计算这n个玻璃容器中移取的磁珠的重量偏差cv％＝sd/mean，如果cv<5％，则继续下一步操作；如果cv％≥5％，则重复上述步骤1)和2)；
7、4)用磁铁吸附磁珠溶液，并小心的将每个容器中的澄清液体吸出；
8、5)加入缓冲液1至每个容器中，涡旋并充分混匀后，用磁铁吸附用缓冲液1充分混匀过的磁珠溶液，并小心的将每个容器中的澄清液体吸出；所述的缓冲液1为tris缓冲液，且含有不低于1ml/l的triton x-100；
9、6)加入缓冲液2至每个容器中，涡旋并充分混匀后，用磁铁吸附用缓冲液2充分混匀过的磁珠溶液，并小心的将每个容器中的澄清液体吸出，重复该步骤不少于2次；所述的缓冲液2中含有不低于1g/l的sds；
10、7)将玻璃容器烘干，冷却至室温，称量各容器的重量c；
11、8)通过减重法间接计算容器中磁珠的重量，并计算n个玻璃容器中磁珠的平均值，得到磁珠的重量m，即m＝(c-a)/n，包被抗体后的磁珠溶液中的磁珠的含量c＝m/v，v表示包被抗体后的磁珠溶液的体积。
12、优选地，步骤1)和7)中，均将玻璃容器置于微波炉中微波烘干，所述微波炉的额定功率不低于700w，微波时调至高火烘干7至10分钟。
13、优选地，步骤1)和7)中，将试管冷却至室温的冷却时间均不少于10分钟。
14、优选地，步骤2)中，所述的磁珠溶液为包被蛋白后的磁珠溶液，混匀时间不少于30分钟。
15、优选地，步骤4)，步骤5)和步骤6)中用磁铁吸附磁珠的时间不少于5分钟。
16、优选地，所述的缓冲液1中含有：tris base 2.25g/l，tris hcl 4.95g/l，氯化钠8.77g/l，triton x-1001～5ml/l。
17、优选地，所述的缓冲液2中含有sds1～5g/l。
18、优选地，步骤1)中，所述的玻璃容器采用玻璃试管。
19、优选地，步骤2)中，所述的磁珠溶液中磁珠的含量不低于5mg。
20、进一步地，每ml包被抗体后的磁珠溶液中的磁珠的含量c＝m/v，v表示包被抗体后的磁珠溶液的体积。
21、优选地，玻璃容器的数目n为3～5个。
22、本专利技术的有益效果在于：
23、(一)能够实现包被抗体以后磁珠溶液中磁珠含量的准确定量；
24、(二)定量过程中的处理方法可以减少甚至忽略蛋白、细胞或核酸等对于磁珠重量的影响。
25、(三)在后续的使用过程中，知道不同批次间磁珠的具体浓度，可以帮助控制批间差。
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1.一种准确定量包被抗体后磁珠的浓度的方法，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)和7)中，均将玻璃容器置于微波炉中微波烘干，所述微波炉的额定功率不低于700W，微波时调至高火烘干7至10分钟。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)和7)中，将试管冷却至室温的冷却时间均不少于10分钟。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，包被抗体后的磁珠溶液混匀时间不少于30分钟。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)，步骤5)和步骤6)中用磁铁吸附磁珠的时间不少于5分钟。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的缓冲液1中含有：Tris Base2.25g/L，Tris HCl 4.95g/L，氯化钠8.77g/L，Triton X-1001～5mL/L。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的缓冲液2中含有SDS1～5g/L。
8.根据权利要求1～7任意一项所述的方法，其特征在于，步骤1)中，所述的玻璃容器采用玻璃试管。>
9.根据权利要求1～7任意一项所述的方法，其特征在于，步骤2)中，所述的磁珠溶液中磁珠的含量不低于5mg。
...【技术特征摘要】
1.一种准确定量包被抗体后磁珠的浓度的方法，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)和7)中，均将玻璃容器置于微波炉中微波烘干，所述微波炉的额定功率不低于700w，微波时调至高火烘干7至10分钟。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)和7)中，将试管冷却至室温的冷却时间均不少于10分钟。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中，包被抗体后的磁珠溶液混匀时间不少于30分钟。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)，步骤5)和步骤6)中用磁铁吸附磁...
【专利技术属性】
技术研发人员：李沛，许秀坤，田腾飞，
申请(专利权)人：苏州派博思生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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