【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种重组血清白蛋白pro.sa及其制备方法和应用，属于蛋白表达。
技术介绍
1、血清白蛋白(human serum albumin,hsa)由585个氨基酸残基、一个巯基和17个二硫键组成，分子量为66.5kda。hsa包含了三个结构域：domain i、domain ii和domain iii。每个结构域包括a、b两个亚区，以槽口相对的方式形成一个圆筒状结构，从而使hsa的结构相对比较柔韧。hsa是人体血浆中含量最多的蛋白质，占血浆总蛋白的60％左右。在人的机体内，has具有运输激素、脂肪酸和其他化合物、维持机体营养和渗透压等功能，具有重要的生理功能。
2、过去hsa制剂主要通过从人血浆中分离纯化获得，但由于面临监管严格、采血站数量下降、血液传染病病毒泛滥和价格昂贵等问题，严重限制了hsa的来源，供不应求。然而，随着基因工程技术的成熟，且生产重组人血清白蛋白具有可大规模生产、来源不受病原体污染，过敏反应少等优点，已逐步成为人血清白蛋白市场的主要来源，深受消费者的认可。
3、现如今，hsa主要通过毕赤酵母即真核表达方式进行生产，原核表达虽然成本低廉，但该系统存在容易形成包涵体、获得的蛋白生物学活性较低等缺陷，而本专利技术构建的表达体系实现了重组hsa在大肠杆菌中的可溶性表达，克服了过去大肠杆菌表达系统中hsa表达产物形成包涵体和难以正确复性的问题。
4、基于此，为了控制重组血清白蛋白pro.sa产品的内毒素含量，我们进一步表征了其在低内毒素lpxm、pagp基因缺陷型大肠杆菌bl
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种重组血清白蛋白pro.sa。
2、本专利技术采用的技术方案：
3、一种重组血清白蛋白pro.sa，其氨基酸序列如seq id no.2或seq id no.3所示。seq idno.3所示的重组血清白蛋白的氨基酸序列是在seq id no.2所示的血清白蛋白氨基酸序列的基础上，具有h39s、y150f、l250s、d269s、e297s和e450s的氨基酸位点突变。
4、上述的重组血清白蛋白pro.sa的编码基因。
5、优选的，其dna序列如seq id no.1或seq id no.8所示。
6、本专利技术还公开了一种重组血清白蛋白pro.sa表达载体，含有上述的编码基因，还含有促溶标签。
7、优选的，所述促溶标签为sumo、mbp或gst。
8、优选的，所述载体为pet30a。
9、本专利技术还公开了一种重组血清白蛋白pro.sa表达宿主菌，为将上述的表达载体转化到宿主菌中而成。
10、优选的，所述宿主菌为大肠杆菌bl21(de3)，或者lpxm、pagp基因缺陷型大肠杆菌bl21(de3)。
11、本专利技术还公开了上述的重组血清白蛋白pro.sa的制备方法，其步骤包括：
12、(1)构建上述的表达载体，将其转化到表达宿主菌中，同时转化伴侣质粒，所述伴侣质粒为ptf16伴侣质粒、pgro7伴侣质粒或pkje7伴侣质粒；
13、(2)培养表达宿主菌，诱导重组血清白蛋白pro.sa的表达；
14、(3)纯化表达产物，得到上述的重组血清白蛋白pro.sa。
15、上述的重组血清白蛋白pro.sa在体外清除自由基中的应用。
16、本专利技术的有益效果：
17、本专利技术将未突变和突变的血清白蛋白基因根据大肠杆菌密码子偏好性进行密码子优化，构入含有促溶标签的pet30a载体上，且将载体转入含有伴侣质粒的大肠杆菌中表达，克服了过去大肠杆菌表达只形成包涵体的问题。本专利技术表达的重组血清白蛋白具有良好的生物学活性，且突变后的血清白蛋白其可溶性表达能力相较于未突变的血清白蛋白明显提高。
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1.一种重组血清白蛋白Pro.SA，其氨基酸序列如SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示。
2.权利要求1所述的重组血清白蛋白Pro.SA的编码基因。
3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于其DNA序列如SEQ ID No.1或SEQIDNo.8所示。
4.一种重组血清白蛋白Pro.SA表达载体，其特征在于表达权利要求1所述的重组血清白蛋白Pro.SA。
5.根据权利要求4所述的重组血清白蛋白Pro.SA表达载体，其特征在于所述载体中还构建有促溶标签，所述促溶标签为SUMO、MBP或GST。
6.根据权利要求4或5所述的重组血清白蛋白Pro.SA表达载体，其特征在于所述载体为pet30a。
7.一种重组血清白蛋白Pro.SA表达宿主菌，为将权利要求4-6中任一项所述的表达载体转化到宿主菌中而成。
8.根据权利要求7所述的重组血清白蛋白Pro.SA表达宿主菌，其特征在于所述宿主菌为大肠杆菌BL21(DE3)，或者lpxM、pagP基因缺陷型大肠杆菌BL21(DE3)。
10.权利要求1所述的重组血清白蛋白Pro.SA在体外清除自由基中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种重组血清白蛋白pro.sa，其氨基酸序列如seq id no.2或seq id no.3所示。
2.权利要求1所述的重组血清白蛋白pro.sa的编码基因。
3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于其dna序列如seq id no.1或seqidno.8所示。
4.一种重组血清白蛋白pro.sa表达载体，其特征在于表达权利要求1所述的重组血清白蛋白pro.sa。
5.根据权利要求4所述的重组血清白蛋白pro.sa表达载体，其特征在于所述载体中还构建有促溶标签，所述促溶标签为sumo、mbp或gst。
6.根...
【专利技术属性】
技术研发人员：田江杰，李声平，
申请(专利权)人：广州普言生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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