【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种重组ⅲ型胶原蛋白pro.c3及其制备方法和应用，属于蛋白表达。
技术介绍
1、胶原蛋白(collagen)是哺乳动物体内含量最多的一类蛋白质，其广泛分布在动物的皮肤、骨骼、肌腱、韧带和血管之中。人体中胶原蛋白含量占总蛋白的25％～30％，是一种重要的结构蛋白，起着保护机体、支撑器官的重要作用。
2、目前已发现胶原蛋白有28种类型，不同类型的胶原蛋白具有不同的功能。一般分为两大类：一类是成纤维胶原蛋白；另一类是非成纤维胶原蛋白；成纤维胶原蛋白包括i、ii、ⅲ、v、vi和xxvi型胶原蛋白，其余均属于非纤维胶原蛋白。人体中含量最多的是i型胶原蛋白，约占85％以上，i型胶原蛋白在骨、皮肤、腱和角膜中含量高，ii型胶原蛋白主要存在于软骨、椎间盘和玻璃体中，ⅲ型胶原蛋白主要存在于血管、新生皮肤和瘢痕组织中。
3、生产胶原蛋白的传统方法是利用酸、碱、酶解法处理动物来源的组织，提取胶原蛋白衍生物。用这些方法提取的胶原蛋白本身已经丧失了原本的生物学活性，无法应用于生物医学领域发挥真正的功能。所以，目前胶原蛋白通常在化妆品和保健品中使用，而无法发挥胶原蛋白的原本生物学功能。
4、由于胶原蛋白以动物组织为来源，提取的天然胶原蛋白是多种不同分子量的胶原蛋白组成的混合物，不溶于水，生物相容性较差；此外，提取的天然胶原蛋白来源于动物组织，对于动物源疾病或者人传染疾病有交叉感染的风险，同时无法与人体相容，会导致出现免疫排斥和过敏症状。
技术实现思路
1、本
2、本专利技术采用的技术方案：
3、一种重组ⅲ型胶原蛋白pro.c3，其氨基酸序列如seq id no.2、seq id no.4、seqidno.6或seq id no.8所示；或者与seq id no.2、seq id no.4、seq id no.6、seq id no.8中任一条具有95％以上的同源性，且细胞黏附活性与seq id no.2、seq id no.4、seq idno.6或seq id no.8所示的蛋白基本相当。或者与seq id no.2、seq id no.4、seq idno.6、seq id no.8中任一条具有99％以上的同源性，且细胞黏附活性与seq id no.2、seqid no.4、seq id no.6或seq id no.8所示的蛋白基本相当。
4、一种重组蛋白，由前述的重组ⅲ型胶原蛋白pro.c3与纤维胶原蛋白通过接头连接而成，其中纤维胶原蛋白的序列如seq id no.10所示。
5、前述的重组蛋白的编码基因。
6、前述的重组蛋白的表达载体。
7、前述的重组蛋白的表达宿主菌。
8、还公开了前述的重组蛋白的制备方法，其步骤包括：
9、(1)构建前述的表达载体，将其转化到表达宿主菌中；
10、(2)培养表达宿主菌，诱导重组蛋白表达；
11、(3)纯化表达产物，得到所需的重组蛋白。
12、本专利技术还公开了一种重组ⅲ型胶原蛋白pro.c3突变体，其氨基酸序列如seq idno.3、seq id no.5、seq id no.7或seq id no.9所示；或者与seq id no.3、seq id no.5、seq idno.7、seq id no.9中任一条具有95％以上的同源性，且细胞黏附活性与seq idno.3、seq id no.5、seq id no.7或seq id no.9所示的蛋白基本相当。或者与seq idno.3、seq idno.5、seq id no.7、seq id no.9中任一条具有99％以上的同源性，且细胞黏附活性与seq id no.3、seq id no.5、seq id no.7或seq id no.9所示的蛋白基本相当。
13、一种重组蛋白突变体，由前述的重组ⅲ型胶原蛋白pro.c3突变体与纤维胶原蛋白连接而成，其中纤维胶原蛋白的序列如seq id no.10所示。
14、前述的重组蛋白突变体的编码基因。
15、前述的重组蛋白突变体的表达载体。
16、优选的，载体骨架为pet30a。
17、以及前述的重组蛋白突变体的表达宿主菌。
18、优选的，所述宿主菌为大肠杆菌。
19、以及前述的重组ⅲ型胶原蛋白pro.c3、重组蛋白或者重组ⅲ型胶原蛋白pro.c3突变体、重组蛋白突变体在辅助细胞培养中的应用。可以将其添加到细胞培养基中，提高细胞贴壁率。
20、本专利技术的有益效果：
21、本专利技术的重组ⅲ型胶原蛋白pro.c3，其突变氨基酸序列具有稳固三螺旋结构，具有良好的生物活性，其生物活性接近人体ⅲ型胶原蛋白。本专利技术所制备的重组ⅲ型人源化胶原蛋白pro.c3的氨基酸序列源自天然胶原蛋白氨基酸序列，可以与其余蛋白复配成为组织工程产品、化妆品、保健品或药物的原材料。且可用原核系统来进行表达，表达体系简单，成本低，产量高。
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1.一种重组Ⅲ型胶原蛋白Pro.C3，其特征在于其氨基酸序列如SEQ ID No.2、SEQIDNo.4、SEQ ID No.6或SEQ ID No.8所示；或者与SEQ ID No.2、SEQ ID No.4、SEQ IDNo.6、SEQ ID No.8中任一条具有95％以上的同源性，且细胞黏附活性与SEQ IDNo.2、SEQ IDNo.4、SEQ ID No.6或SEQ ID No.8所示的蛋白基本相当。
2.一种重组蛋白，其特征在于由权利要求1所述的重组Ⅲ型胶原蛋白Pro.C3与纤维胶原蛋白通过接头连接而成，其中纤维胶原蛋白的序列如SEQ ID No.10所示。
3.权利要求2所述的重组蛋白的编码基因。
4.权利要求2所述的重组蛋白的表达载体。
5.权利要求2所述的重组蛋白的制备方法，其特征在于其步骤包括：
6.一种重组Ⅲ型胶原蛋白Pro.C3突变体，其特征在于其氨基酸序列如SEQ ID No.3、SEQID No.5、SEQ ID No.7或SEQ ID No.9所示；或者与SEQ ID No.3、SEQ ID
7.一种重组蛋白突变体，其特征在于由权利要求6所述的重组Ⅲ型胶原蛋白Pro.C3突变体与纤维胶原蛋白通过接头连接而成，其中纤维胶原蛋白的序列如SEQ ID No.10所示。
8.权利要求7所述的重组蛋白突变体的编码基因。
9.权利要求7所述的重组蛋白突变体的表达载体。
10.权利要求1、2、6、7中任一项所述的蛋白在辅助细胞培养中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种重组ⅲ型胶原蛋白pro.c3，其特征在于其氨基酸序列如seq id no.2、seqidno.4、seq id no.6或seq id no.8所示；或者与seq id no.2、seq id no.4、seq idno.6、seq id no.8中任一条具有95％以上的同源性，且细胞黏附活性与seq idno.2、seq idno.4、seq id no.6或seq id no.8所示的蛋白基本相当。
2.一种重组蛋白，其特征在于由权利要求1所述的重组ⅲ型胶原蛋白pro.c3与纤维胶原蛋白通过接头连接而成，其中纤维胶原蛋白的序列如seq id no.10所示。
3.权利要求2所述的重组蛋白的编码基因。
4.权利要求2所述的重组蛋白的表达载体。
5.权利要求2所述的重组蛋白的制备方法，其特征在于其步骤包括：
6.一种重组...
【专利技术属性】
技术研发人员：田江杰，余冬飞，谢丽晶，
申请(专利权)人：广州普言生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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