【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞生物制剂纯化领域，尤其涉及一种对慢病毒纯化过程的中间产物起稳定作用的保护剂及纯化方法。
技术介绍
1、慢病毒是来源于人类免疫缺陷病毒-1(hiv-1)的一种病毒载体，慢病毒包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息，这些遗传信息是慢病毒系统的主要组成部分。慢病毒可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而实现持久表达。此外，慢病毒对分裂和非分裂细胞均具有较强的感染能力，转移基因容量大，不易引发宿主的免疫反应等。近年来，慢病毒在rnai的研究、基因治疗以及转基因动物等研究中扮演着越来越重要的角色。因此，慢病毒已成为基因治疗和体外基因修饰的主要载体。
2、尽管慢病毒的研究有了很大进展，但将慢病毒原液经下游纯化后得到的重组慢病毒制剂的回收率依然不高，约为10～20％，无形中增加了慢病毒生产的成本。因此，亟需一种操作简单、可以在下游纯化过程中对慢病毒料液起到保护作用，进而提高慢病毒终产品的回收率，降低慢病毒生产成本的方法。
技术实现思路
1、基于上述问题，本专利技术所要解决的问题在于提供一种生产成本低、慢病毒终产品回收率高、操作简单，且可以在慢病毒下游纯化过程中对慢病毒料液起到保护作用保护剂以及慢病毒纯化方法。
2、本专利技术提供的慢病毒纯化的保护剂，包括培养基，且培养基中含有终浓度1～10v/v％重组人血清白蛋白、终浓度0.1～1v/v％胆固醇脂质、终浓度0.01～0.1v/v％表面活性剂。
3、较好地，上述保护剂的培养基中，含有终浓
4、较好的，上述慢病毒纯化的保护剂中，所用培养基为无血清dmem培养基。
5、较好的，上述慢病毒纯化的保护剂中，所用表面活性剂为泊洛沙姆，如，p188。
6、本专利技术还提供上述慢病毒纯化的保护剂制备方法，包括如下步骤：
7、分别量取培养基、重组人血清白蛋白、胆固醇脂质和表面活性剂，混合均匀，配置得到含重组人血清白蛋白、胆固醇脂质和表面活性剂的培养基溶液；
8、加入ph值调节剂，调节培养基溶液ph＝6.8～7.4，获得慢病毒纯化的保护剂。
9、本专利技术还提供使用上述保护剂对慢病毒纯化保护的方法，包括如下步骤：
10、获取慢病毒原液；
11、将慢病毒原液与上述保护剂按照100～1000:1体积比预混合处理，获得慢病毒预混液；
12、往慢病毒预混液中加入10～100u/ml核酸酶，去除残留的外源dna，获得慢病毒酶解液；
13、对慢病毒酶解液进行过滤处理，获得纯化的慢病毒浓缩液。
14、较好地，上述慢病毒纯化方法中，所述慢病毒原液通过如下工艺步骤获得：
15、将处于对数生长期的293t细胞采用完全培养基重悬后转入细胞工厂，静置培养；
16、静置培养24小时后，去掉完全培养基，加入无血清培养基，继续孵育；
17、将四质粒、pei和opti-mem混合均匀后进行孵育，随后补充加入无血清培养基，得到质粒转染混合液；
18、细胞工厂孵育293t细胞完成后去掉无血清培养基，接着往所述细胞工厂加入所述质粒转染混合液，进行转染处理；
19、转染处理结束后，去掉所述质粒转染混合液，并加入全新的无血清培养基，静置培养；静置培养过程中，收集慢病毒上清液，获得慢病毒原液。
20、较好地，上述慢病毒纯化方法中，慢病毒酶解液进行过滤处理过程中，还包括如下工艺步骤：
21、将慢病毒酶解液过滤澄清，获得慢病毒澄清液；
22、将慢病毒澄清液进行切向流过滤，获得纯化的慢病毒浓缩液。
23、较好地，上述慢病毒纯化方法中，切向流过滤的剪切力设置为3000g。
24、与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
25、(1)、本专利技术在慢病毒纯化过程中添加了保护剂，可以将慢病毒的总回收率提高到30％～40％；
26、(2)、慢病毒纯化过程中的保护剂均是药用级别，且化学组分明确，能够使慢病毒制剂作为基因治疗药物注射人体，如可满足皮内注射、皮下注射、肌肉注射、血管给药等临床治疗方式的要求。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种慢病毒纯化的保护剂，其特征在于，所述保护剂包括培养基，且培养基中含有终浓度1～10v/v％重组人血清白蛋白、终浓度0.1～1v/v％胆固醇脂质、终浓度0.01～0.1v/v％表面活性剂。
2.根据权利要求1所述的保护剂，其特征在于，所述保护剂包括培养基，且培养基中含有终浓度2v/v％重组人血清白蛋白、终浓度0.4v/v％胆固醇脂质、终浓度0.05v/v％表面活性剂。
3.根据权利要求1或2所述的保护剂，其特征在于，所述培养基为无血清DMEM。
4.根据权利要求1或2所述的保护剂，其特征在于，所述表面活性剂为P188。
5.一种如权利要求1所述保护剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，调节培养基溶液pH＝7.2。
7.一种慢病毒纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
8.根据权利要求7所述的慢病毒纯化方法，其特征在于，所述慢病毒原液通过如下工艺步骤获得：
9.根据权利要求7所述的慢病毒纯化方法，其特征在于，慢病毒酶解液进行过滤处理过
10.根据权利要求9所述的慢病毒纯化方法，其特征在于，切向流过滤时剪切力设置为1000～5000g。
...【技术特征摘要】
1.一种慢病毒纯化的保护剂，其特征在于，所述保护剂包括培养基，且培养基中含有终浓度1～10v/v％重组人血清白蛋白、终浓度0.1～1v/v％胆固醇脂质、终浓度0.01～0.1v/v％表面活性剂。
2.根据权利要求1所述的保护剂，其特征在于，所述保护剂包括培养基，且培养基中含有终浓度2v/v％重组人血清白蛋白、终浓度0.4v/v％胆固醇脂质、终浓度0.05v/v％表面活性剂。
3.根据权利要求1或2所述的保护剂，其特征在于，所述培养基为无血清dmem。
4.根据权利要求1或2所述的保护剂，其特征在于，所述表面活性剂为p188。<...
【专利技术属性】
技术研发人员：马丽雅，江亭，谢海涛，
申请(专利权)人：深圳市先康达生命科学有限公司，
类型：发明
国别省市：
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