AAV转染助转剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种AAV转染助转剂及其应用；该转染助转剂包括完全培养基及添加在完全培养基中含终浓度1μM～30μM的Emricasan和终浓度1μM～30μM的M3814。该助转剂中，组分Emricasan可有效抑制细胞表面凋亡标记物Caspase

【技术实现步骤摘要】
AAV转染助转剂及其应用


[0001]本专利技术涉及细胞病毒转染
，尤其涉及一种电穿孔后细胞转染的AAV转染助转剂及其应用。

技术介绍

[0002]随着免疫治疗产业的发展，细胞基因免疫疗法已经成为肿瘤治疗中最有前途的治疗策略之一。尤其是过继性T细胞疗法(Adoptive transfer of T cells,AT)已经在血液肿瘤等治疗方面取得了很好的疗效。过继性T细胞疗法是指从病人体内分离提取T细胞，在体外对其进行基因编辑，赋予其特异性识别肿瘤细胞的能力，并扩增至一定数量，再回输入病人体内，识别和杀伤肿瘤细胞。包括两种形式，一种是直接从患者肿瘤组织分离肿瘤浸润的淋巴细胞(Tumor
‑
infiltrating lymphocyte,TIL)，经体外培养增殖后再输入患者体内；另外一种是从患者体内分选出T细胞，利用基因编辑技术，使其具备识别癌细胞表面特定抗原的能力，然后培养扩增至一定规模，再输入患者体内，包括嵌合抗原受体T细胞疗法和T细胞受体疗法(TCR
‑
T)。
[0003]现阶段，基因编辑核酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种AAV转染助转剂，其特征在于，包括完全培养基及添加在所述完全培养基中含终浓度1μM～30μM的Emricasan和终浓度1μM～30μM的M3814。2.根据权利要求1所述的AAV转染助转剂，其特征在于，在所述完全培养基中，Emricasan的终浓度为10μM、M3814的含终浓度为4μM。3.根据权利要求1或2所述的AAV转染助转剂，其特征在于，所述完全培养基包含X
‑
VIVO培养基，且该X
‑
VIVO培养基中含终浓度5％的人AB血清及终浓度1.5％的IL
‑
2。4.一种AAV转染助转染方法，其特征在于，包括如下步骤：从外周血中分选出免疫细胞；第0天，取无血清培养基重悬免疫细胞，同时磁珠激活免疫细胞，获得激活免疫细胞悬液；并根据MOI＝7，往所述激活免疫细胞转染悬液中加入慢病毒，进行慢病毒转染；第1天，慢病毒转染完成后，加入权利要求1所述的完全培养基，对慢病毒转染的免疫细胞进行培养；第3天，首先，去掉磁珠，对慢病毒转染后的免疫细胞离心、去上清，并往离心管中加入2％FBS与DPBS的混溶液重悬沉淀液，得到重悬液；接着，对重悬液离心、去上清，获得细胞沉淀；随后，往离心管中的细胞沉淀加入电转缓冲液并重悬，获得细胞悬液，并将细胞悬液转移至16孔电转孔板；其次，每孔加入电转体系液，并对细胞悬液中的免疫细胞进行电转穿孔，获得穿孔免疫细胞；再其次，往穿孔免疫细胞中加入预热的DPBS，置于培养氛围为37℃、5％CO2的培养箱中静置孵育1h；最后，静置孵育结束后，将孵育后的穿孔免疫细胞转移至24孔板，并依次加入权利要求1所述AAV转染助转剂及AAV病毒，获得AAV病毒转染的基因编辑细胞；第4天，将AAV病毒转染的基因编辑细胞离心、去上清，将离心沉淀细胞转移至24孔板，每孔加入完全培养基并对AAV病毒转染的免疫细胞进行培养，直至第13天结束。5.根据权利要求4所述的AAV转染助转染方法，其特征在于，第0天，所述无血清培养基为X
‑
VIV...

【专利技术属性】
技术研发人员：马丽雅，谢海涛，张凯文，
申请(专利权)人：深圳市先康达生命科学有限公司，
类型：发明
国别省市：