用于神经节细胞研究的动物模型的构建方法以及神经节细胞类型的区分方法技术

本申请提供了一种用于神经节细胞研究的动物模型的构建方法，包括：将第一目标动物与第二目标动物交配，得到杂合一代动物，所述第一目标动物的光感受器退化，所述第二目标动物携带LSL识别位点和荧光蛋白基因；将第一病毒悬液和第二病毒悬液注入所述杂合一代动物的玻璃体中，获得动物模型，其中，所述第一病毒悬液包括携带Cre重组酶基因的病毒，所述第二病毒悬液包括携带钙指示剂基因的病毒。该构建方法简单，操作方便，获得的动物模型的光感受器退化且具有多种标记物，能够用于神经节细胞类型的区分中，有利于视觉假体中电刺激参数的选择，以获得适用于光感受器退化的视觉假体。本申请还提供了一种神经节细胞类型的区分方法。申请还提供了一种神经节细胞类型的区分方法。申请还提供了一种神经节细胞类型的区分方法。

【技术实现步骤摘要】
用于神经节细胞研究的动物模型的构建方法以及神经节细胞类型的区分方法


[0001]本申请属于生物医学
，具体涉及用于神经节细胞研究的动物模型的构建方法以及神经节细胞类型的区分方法。

技术介绍

[0002]通过植入视觉假体来重建视觉是一种技术尖端且已被临床验证可长期有效恢复基本视觉的解决方案，它以微电子器件为核心，通过植入微电极阵列刺激视觉通路上的神经节细胞等，从而将外部图像信息转换成特定神经冲动传递到视觉中枢。神经节细胞根据对光刺激响应模式的不同可以分为ON型和OFF型，分别对光强度的增加和减少做出反应；若不同类型的神经节细胞能够在所需的时间或空间被选择性激活，则视觉假体可以引发更贴近生理学的神经活动。目前视觉假体的电刺激方式均针对于正常的神经节细胞，当视网膜退行性疾病发生时，视觉通路前端的光感受器退化，现有的电刺激方式已不合适。因此，如何对光感受器退化的神经节细胞类型进行区分，是视觉假体应用中急需解决的问题。

技术实现思路

[0003]有鉴于此，本申请提供了一种用于神经节细胞研究的动物模型的构建方法以及神经节细胞类型的区分方法，该动物模型的光感受器退化且具有多种标记物，能够用于神经节细胞类型的区分中，有利于视觉假体中电刺激参数的选择，以获得适用于光感受器退化的视觉假体。
[0004]第一方面，本申请提供了一种用于神经节细胞研究的动物模型的构建方法，包括：
[0005]将第一目标动物与第二目标动物交配，得到杂合一代动物，所述第一目标动物的光感受器退化，所述第二目标动物携带LSL识别位点和荧光蛋白基因；
[0006]将第一病毒悬液和第二病毒悬液注入所述杂合一代动物的玻璃体中，获得动物模型，其中，所述第一病毒悬液包括携带Cre重组酶基因的病毒，所述第二病毒悬液包括携带钙指示剂基因的病毒。
[0007]可选的，所述第一病毒悬液的滴度大于或等于5
×
10
12
基因拷贝数/ml，所述第二病毒悬液的滴度大于或等于1
×
10
13
基因拷贝数/ml。
[0008]可选的，所述第一病毒悬液的注入量为25μl/kg
‑
100μl/kg，所述第二病毒悬液的注入量为25μl/kg
‑
100μl/kg。
[0009]可选的，所述携带Cre重组酶基因的病毒中病毒载体具有Nefh启动子。
[0010]可选的，所述荧光蛋白包括红色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白和黄色荧光蛋白中的至少一种。
[0011]进一步的，所述红色荧光蛋白包括tdTomato、DsRed、TagRFP和mCherry中的至少一种。
[0012]进一步的，所述蓝色荧光蛋白包括EBFP、EBFP2、Azurite、mKalama1和mTagBFP中的
至少一种。
[0013]进一步的，所述黄色荧光蛋白包括EYFP、Topaz、Venus、mCitrine和Ypet中的至少一种。
[0014]可选的，所述钙指示剂包括GCaMP1、GCaMP2、GCaMP3、GCaMP5、GCaMP6、GCaMP7、GCaMP
‑
X和RCaMPs中的至少一种。
[0015]可选的，所述第一目标动物和所述第二目标动物分别选自小鼠、大鼠、兔、羊和猴中的至少一种。
[0016]可选的，所述病毒包括腺病毒、腺相关病毒、慢病毒和逆转录病毒中至少一种。
[0017]第二方面，本申请提供了一种神经节细胞类型的区分方法，包括：
[0018]将第一目标动物与第二目标动物交配，得到杂合一代动物，所述第一目标动物的光感受器退化，所述第二目标动物携带LSL识别位点和荧光蛋白基因；
[0019]将第一病毒悬液和第二病毒悬液注入所述杂合一代动物的玻璃体中，获得动物模型，其中，所述第一病毒悬液包括携带Cre重组酶基因的病毒，所述第二病毒悬液包括携带钙指示剂基因的病毒；
[0020]获取所述动物模型的视网膜样本，对所述视网膜样本进行电刺激并观测，获得第一观测结果；
[0021]采用乙酰胆碱转移酶抗体对所述视网膜样本进行孵育，加入荧光染料标记的抗IgG抗体后进行观测，获得第二观测结果；
[0022]根据所述第一观测结果和所述第二观测结果对神经节细胞的类型进行区分。
[0023]可选的，所述电刺激的参数包括刺激持续时间为200ms
‑
300ms，刺激频率为1kHz
‑
6.25kHz，刺激幅度为1μA
‑
240μA。
[0024]可选的，所述荧光染料包括ALEXA Fluor系列染料、异硫氰酸荧光素、罗丹明、藻红蛋白和花青素中的至少一种。
[0025]本申请提供的一种用于神经节细胞研究的动物模型的构建方法，该构建方法简单，操作方便，获得的动物模型的光感受器退化且具有多种标记物，能够用于神经节细胞类型的区分中；本申请还提供了一种神经节细胞类型的区分方法，能够对光感受器退化的神经节细胞的类型加以区分，从而有利于视觉假体中电刺激参数的选择，有助于获得适用于光感受器退化的视觉假体。
附图说明
[0026]为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请，并不用于限定本申请。
[0027]图1为本申请一实施方式提供的用于神经节细胞研究的动物模型的构建方法的流程示意图。
[0028]图2为本申请一实施方式提供的神经节细胞类型的区分方法。
[0029]图3为本申请一实施方式提供的显微镜结果图。
[0030]图4为本申请另一实施方式提供的显微镜结果图。
[0031]图5为实施例1提供用于神经节细胞研究的动物模型的构建方法的流程图。
[0032]图6为实施例2采用的电刺激的波形图。
具体实施方式
[0033]以下是本申请的优选实施方式，应当指出，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本申请原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本申请的保护范围。
[0034]请参阅图1，为本申请一实施方式提供的用于神经节细胞研究的动物模型的构建方法的流程示意图，包括：
[0035]S101：将第一目标动物与第二目标动物交配，得到杂合一代动物，第一目标动物的光感受器退化，第二目标动物携带LSL识别位点和荧光蛋白基因。
[0036]S102：将第一病毒悬液和第二病毒悬液注入杂合一代动物的玻璃体中，获得动物模型，其中，第一病毒悬液包括携带Cre重组酶基因的病毒，第二病毒悬液包括携带钙指示剂基因的病毒。
[0037]神经节细胞根据对光刺激响应模式的不同可以分为ON型细胞和OFF型细胞，分别对光强度的增加和减少做出反应，目前临床上植入的视觉假体中使用电极的直径过大，导致每个电极同时刺激数十甚至几百个神经节细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于神经节细胞研究的动物模型的构建方法，其特征在于，包括：将第一目标动物与第二目标动物交配，得到杂合一代动物，所述第一目标动物的光感受器退化，所述第二目标动物携带LSL识别位点和荧光蛋白基因；将第一病毒悬液和第二病毒悬液注入所述杂合一代动物的玻璃体中，获得动物模型，其中，所述第一病毒悬液包括携带Cre重组酶基因的病毒，所述第二病毒悬液包括携带钙指示剂基因的病毒。2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述第一病毒悬液的滴度大于或等于5
×
10
12
基因拷贝数/ml，所述第二病毒悬液的滴度大于或等于1
×
10
13
基因拷贝数/ml。3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述第一病毒悬液的注入量为25μl/kg
‑
100μl/kg，所述第二病毒悬液的注入量为25μl/kg
‑
100μl/kg。4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述携带Cre重组酶基因的病毒中病毒载体具有Nefh启动子。5.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述荧光蛋白包括红色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白和黄色荧光蛋白中的至少一种，所述红色荧光蛋白包括tdTomato、DsRed、TagRFP和mCherry中的至少一种，所述蓝色荧光蛋白包括EBFP、EBFP2、Azurite、mKalama1和mTagBFP中的至少一种，所述黄色荧光蛋白包括EYFP、Topaz、Venus、mCitrine和Ypet中的至少一种；所述钙指示剂包括GCa...

【专利技术属性】
技术研发人员：张诗昀，徐臻，吴天准，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：