一种IL-15与DnTRII结合的融合蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种IL

【技术实现步骤摘要】
一种IL
‑
15与DnTRII结合的融合蛋白及其应用


[0001]本专利技术涉及免疫细胞制备
，特别涉及一种IL
‑
15与DnTRII结合的融合蛋白及其应用。

技术介绍

[0002]肿瘤（tumour）是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物（neogrowth），因为这种新生物多呈占位性块状突起，也称赘生物（neoplasm）。其中，恶性肿瘤因易发生转移，治疗后易复发且在某些特殊的微环境下导致极难治愈。
[0003]IL
‑
15 在 T细胞、NK细胞及其发育、稳态和功能中起着至关重要的作用，并且还对B细胞、树突状细胞（DC）、巨噬细胞和肥大细胞具有各种功能。IL
‑
15是细胞因子4
‑
α
‑
螺旋束家族的成员，分子量为14
‑
15kDa，含有114个氨基酸。IL
‑
15具有两种同种类型：
①
SSP：包含21个氨基酸组成的较短的信号肽（SSP，short signal peptide），SSP型IL
‑
15被充分翻译但并不分泌，因此，它的活动范围被限制在细胞质和细胞核，可能在其转录调控中起着重要作用；
②
LSP：包含48个氨基酸组成的更长的信号肽（LSP，long signal peptide），LSP
‑
IL
‑
15是作为免疫调节剂被分泌至胞外的。IL<br/>‑
15以及IL
‑
15Rα由抗原呈递细胞（单核细胞和树突细胞）协同表达。IL
‑
15广泛表达于多种细胞中，细胞类型包括单核细胞、巨噬细胞、DC细胞、成纤维细胞、上皮细胞和骨骼肌细胞，但在T 细胞中并不表达IL
‑
15细胞因子。
[0004]IL
‑
15与抗原受体的结合方式为反式呈递方式：IL
‑
15与表达在抗原提呈细胞上高亲和力的α受体结合，形成IL
‑
15Rα；IL
‑
15Rα将IL
‑
15递呈给IL
‑
2/15Rβγ二聚体形成三元复合物。可激活JAK和STAT型号通路，并具有促进靶细胞增殖与活化、IFN
‑
γ、TNF
‑
α分泌水平提升等功能。
[0005]DnTRII（又称TGF
‑
β）信号以细胞和背景依赖的方式发挥着肿瘤抑制或肿瘤促进的作用。TGF
‑
β信号的肿瘤抑制作用源自其诱导多个基因表达的能力，这些基因参与抑制细胞增殖、诱导凋亡、激活自噬、通过基质成纤维细胞抑制生长因子的信号、抑制炎症，以及抑制血管生成。这些作用维持了正常组织内的动态平衡，防止肿瘤形成的早期阶段。当癌症发展过程中引入突变或表观遗传修饰时，癌细胞逐渐耐受TGF
‑
β信号的抑制作用。TGF
‑
β信号通路的肿瘤抑制臂丧失，让癌细胞利用此通路来专门促进那些支持肿瘤发展的过程，包括细胞增殖、免疫抑制、血管生成、癌症干细胞自我更新、上皮间充质转化以及转移。了解TGF
‑
β信号的肿瘤抑制或肿瘤促进作用的调节机制，可能具有治疗潜力，有望抑制几种不同类型的人类癌症的发展。
[0006]转化生长因子（TGF
‑
β）是一种多功能的细胞因子，它以细胞或背景依赖的方式发挥着肿瘤抑制或肿瘤促进的作用。TGF
‑
β通过异源四聚体受体复合物传递信号，这个受体复合物是由两个I型和两个II型的跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶受体组成的。与脂类结合之后，II型受体（TGF
‑
β RII）将I型受体（TGF
‑
β RI）磷酸化，在大部分细胞类型中导致Smad2和Smad3的招募和磷酸化，而在一些依赖I型受体表达的细胞中则招募Smad1和Smad5。激活的Smad蛋白与Smad4关联，转位到细胞核，在那里它们招募更多的转录调控因子，包括DNA结合转录因
子、共激活因子、共抑制因子和染色体重塑因子，这些因子控制了许多靶基因的表达。它们的差异表达可能造成了TGF
‑
β的细胞特异性响应。
[0007]尽管研究表明TGF
‑
β的多个肿瘤抑制和肿瘤促进作用直接依赖于Smad信号，但TGF
‑
β还会激活许多其他的信号通路，包括Ras/MAPK、Par6、RhoA/ROCK1、PI 3
‑
K/Akt、p38和JNK，这些可能以Smad依赖或不依赖的方式，促进了TGF
‑
β信号的癌症相关作用。这些信号通路的激活是细胞类型特异且背景依赖的。
[0008]早期研究表明，TGF
‑
β可以成为T细胞增殖的有效抑制剂。几种机制驱动TGF
‑
β介导的T细胞增殖抑制，包括抑制IL
‑
2产生、下调c
‑
myc和上调细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂。然而，在某些情况下，TGF
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β还在促进细胞死亡以限制激活后的T细胞扩增方面发挥重要作用。并且，在某些情况下，已显示TGF
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β可促进活化T细胞的存活。因此，在不同情况下，TGF
‑
β可以抑制或增强T细胞增殖、存活和随后在特定组织部位的积累，其表达程度不宜过高或过低，而在T细胞表面表达部分无功能TGF
‑
β受体可达到人为降低环境中TGF
‑
β浓度的效果。

技术实现思路

[0009]基于上述问题，本专利技术所要解决的问题在于提供一种IL
‑
15与DnTRII（即为胞内截短型的无功能TGF
‑
β受体）结合的融合蛋白，其中，IL
‑
15和IL
‑
15RaSu结合成超激动蛋白，该超激动融合蛋白再与DnTRII结合获得融合蛋白，并使含有该融合蛋白的免疫细胞成功膜表达该融合蛋白、同时表达嵌合抗原受体，以达成增强免疫细胞增殖能力、抗凋亡能力和对于肿瘤的杀伤能力。
[0010]本专利技术的技术方案如下：一种IL
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15与DnTRII结合的融合蛋白， IL
‑
15与DnTRII结合的融合蛋白经基因编辑过的，且该融合蛋白可以提高免疫细胞的活性以及对肿瘤的杀伤效果，所述免疫细胞表达嵌合抗原受体 。
[0011]IL
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15与DnTRII结合的融合蛋白含有细胞因子IL
‑
15N72D、G4S*4 Linker、IL
‑
15RaSu、G4S*4 Linke和DnTRII，且是按照细胞因子IL
‑
15N72D、G4S*4 Linker、IL
‑
15R本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种IL
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15与DnTRII结合的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括细胞因子IL
‑
15N72D、G4S*4 Linker、IL
‑
15RaSu、G4S*4 Linke和DnTRII，且该融合蛋白是按照IL
‑
15N72D、G4S*4 Linker、IL
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15RaSu、G4S*4 Linke和DnTRII顺序依次串联表达的，且所述自分泌IL
‑
15与IL
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15RaSu结合为超激动蛋白。2.一种表达盒，其特征在于，所述表达盒含有权利要求1所述的编码融合蛋白的核酸序列。3.一种载体，其特征在于，所述载体中含有权利要求1所述的融合蛋白、或者含有权利要求2所述的表达盒。4.一种重组微生物，其特征在于，所述重组微生物含有权利要求1所述1所述的融合蛋白、或者含有权利要求2所述的表达盒、或者含有权利要求3所述的载体。5.一种免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞含有权利要求1所述1所述的融合蛋白、或者含有权利要求2所述的表达盒、或者含有权利要求3所述的载体。6.根据权利要求5所述的免疫细胞，其特征在于，所述免疫细胞由融合蛋白与嵌合抗原受体基因的融合形成。7.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢海涛，都晓龙，马丽雅，
申请(专利权)人：深圳市先康达生命科学有限公司，
类型：发明
国别省市：