核酸内切酶VIII及其制备方法和应用技术

技术编号:40775664 阅读:20 留言:0更新日期:2024-03-25 20:21
本申请公开了一种核酸内切酶VIII的制备方法和应用。本申请中提供了经密码子优化的编码核酸内切酶VIII的核苷酸序列,相比其他的密码子序列,其能够在大肠杆菌体系中实现大量可溶表达,且保持了很高的生物催化活性,适宜工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药领域,特别涉及核酸内切酶viii及其制备方法和应用。


技术介绍

1、核酸内切酶viii(endonuclease viii,nei)是大肠杆菌第八核酸内切酶,是一种全长为262个氨基酸残基的单体蛋白,分子量为29.7kda。核酸内切酶viii具有n-端糖基化酶和ap裂解酶的活性,是原核细胞内重要的dna修复酶之一,主要用于修复受损的嘧啶碱基。核酸内切酶viii同时具有5’端磷酸二酯酶活性,可以清除处理ap位点时产生的5-脱氧核糖。

2、dna在胞内会受到脱氨、氧化及烃化反应的影响,会产生大量的受损碱基,这种损伤会导致基因编码错误和基因组不稳定,并可能导致与衰老和癌症相关的慢性疾病。在生物体胞内存在内源性碱基切除修复机制(ber),该机制由n-端糖基化酶启动,识别并移除受损的碱基,形成ap位点,第二步通过ap裂解酶活性可以切割ap位点的3’端或5’端,去除ap位点,产生一个3’和5’磷酸的碱基缺口,最后通过dna聚合酶、连接酶完成修复。核酸内切酶viii可催化底物较为广泛,包括胸腺嘧啶二醇(tg)、尿嘧啶二醇、二氢胸腺嘧啶、本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种编码核酸内切酶VIII的分离的多核苷酸,其特征在于,所述多核苷酸经密码子优化,且所述多核苷酸选自以下任一种:

2.一种表达载体,其特征在于,所述表达载体包括如权利要求1所述的多核苷酸。

3.根据权利要求2所述的表达载体,其特征在于,所述表达载体为大肠杆菌表达载体,优选为pET-28a(+)。

4.一种宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞包括如权利要求2或3所述的表达载体;或者

5.一种制备核酸内切酶VIII的方法,其特征在于,所述方法包括步骤:

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,使用SB培养基培养所述的宿主细胞。<...

【技术特征摘要】

1.一种编码核酸内切酶viii的分离的多核苷酸,其特征在于,所述多核苷酸经密码子优化,且所述多核苷酸选自以下任一种:

2.一种表达载体,其特征在于,所述表达载体包括如权利要求1所述的多核苷酸。

3.根据权利要求2所述的表达载体,其特征在于,所述表达载体为大肠杆菌表达载体,优选为pet-28a(+)。

4.一种宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞包括如权利要求2或3所述的表达载体;或者

5.一种制备核酸内切酶viii的方法,其特征在于,所述方法包括步骤:

6.根据权利要求5所述的方...

【专利技术属性】
技术研发人员:蒋析文朱伟伟王佳刘文丽何祖强郑桑桑
申请(专利权)人:广州达安基因股份有限公司
类型:发明
国别省市:

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