一种Rasd1基因定点敲入2A-Cre模型小鼠、构建方法及其应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种Rasd1基因定点敲入2A‑Cre模型小鼠、构建方法及其应用。所述构建方法包括：确定小鼠Rasd1基因Exon 2中适合插入的位点为site1；针对Rasd1基因site1设计构建gRNA序列以及构建2A‑Cre‑IRES‑EGFP序列的Donor载体；将gRNA和Cas9核酸酶的mRNA经体外转录后与Donor载体一起通过显微注射直接注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，经长片段PCR鉴定，获得同源重组的F0代小鼠；将同源重组的F0代小鼠与C57BL/6J小鼠交配获得阳性F1代小鼠，对阳性F1代小鼠进行PCR鉴定即可获得Rasd1基因定点敲入2A‑Cre的小鼠模型。基于本发明专利技术得到的小鼠模型进而为研究神经系统疾病以及其他慢性应激相关病病理机制以及筛选相应治疗方法和药物提供有效的研究模型。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，具体涉及一种rasd1基因定点敲入2a-cre模型小鼠、构建方法及其应用。

技术介绍

1、神经系统疾病因其高致残率和高致死率，已经成为全球性的公共健康挑战。然而，受限于神经系统的复杂性，目前对于各类神经系统疾病发病机制的理解尚不透彻，临床用于治疗各类神经系统疾病的安全且快速起效的药物仍尚匮乏。神经系统疾病病理过程的本质是神经系统在病理条件下发生的应激性变化，即神经可塑性变化。研究表明神经可塑性与神经系统疾病的发生发展密切相关，如焦虑症、抑郁症、脑卒中、帕金森、阿尔兹海默症、精神分裂症、癫痫等。长期不良环境或负性生活事件等慢性应激刺激是众多疾病，包括神经精神疾病以及肿瘤、心血管疾病、肥胖症等的重要诱因，其影响神经可塑性过程(如神经元增殖、存活，突触结构和功能可塑性等)，进而导致众多疾病的发生。

2、dexras1(又名rasd1)是由rasd1基因编码产生，因被应激激素地塞米松诱导产生而得名，与慢性应激和神经可塑性密切相关。研究显示nmdar参与突触传递和可塑性调控，dexras1被nmdar-nnos信号来源的no亚硝基化而本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种Rasd1基因定点敲入2A-Cre的小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括下列步骤：

2.根据权利要求1所述的Rasd1基因定点敲入2A-Cre的小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述构建得到的模型小鼠的基因型为C57BL/6J-Rasd1-2A-Cre-IRES-EGFP，其具有SEQID NO.2所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的Rasd1基因定点敲入2A-Cre的小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)和步骤(4)中PCR鉴定使用的5’端鉴定引物序列如SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4所示，3’端鉴定引物序列如SEQ...

【技术特征摘要】

1.一种rasd1基因定点敲入2a-cre的小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括下列步骤：

2.根据权利要求1所述的rasd1基因定点敲入2a-cre的小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述构建得到的模型小鼠的基因型为c57bl/6j-rasd1-2a-cre-ires-egfp，其具有seqid no.2所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求1所述的rasd1基因定点敲入2a-cre的小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)和步骤(4)中pcr鉴定使用的5’端鉴定引物序列如seq id no.3和seq idno.4所示，3’端鉴定引物序列如seq id no.5和seq id no.6所示。

4.一种rasd1基因定点敲入2a-cre的小鼠模型，通过权利要求1-3任一所述的构建方法构建而成。

5.权利要求4所述的rasd1基因定点敲入2a-cre的小鼠模型...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱丽娟，石胡江，王洪梅，李娜，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：