一种经修饰的CaPif1解旋酶及其应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程和遗传工程领域，公开了一种修饰的CaPif1解旋酶，包含该解旋酶的复合体，包含该解旋酶的构建体，以及采用该解旋酶或复合体或构建体表征目标多核苷酸的方法及应用。本发明专利技术提供的经修饰的CaPif1解旋酶及其复合体和构建体均能够控制多核苷酸穿过生物纳米孔的移动，尤其当多核苷酸链长度增加时，其依然可以稳定控制多核苷酸移动而不会从多核苷酸上发生脱落。本发明专利技术还提供了特异的CaPif1解旋酶突变体，提高了其控制多核苷酸穿过纳米孔移位的能力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种经修饰的capif1解旋酶，特别是涉及一种能够控制目标多核苷酸穿过生物纳米孔移动的解旋酶，并且特别有助于对多核苷酸进行测序，属于基因工程和遗传工程领域。

技术介绍

1、近些年发展起来的纳米孔测序技术是一种新型的单分子测序技术，其利用电场力驱动单链多核苷酸穿过嵌在绝缘磷脂膜上的纳米级生物孔道蛋白，由于不同的碱基大小，每个核苷酸分子在通过生物纳米孔时会产生特征性的阻碍电流，记录下的这些特征电流信号对应于目标核酸的序列。

2、在“链测序”方法中，单个多核苷酸链通过所述生物纳米孔从而实现核苷酸序列的鉴定。相比于其他测序技术，这种测序技术的优势在于成本低，无需pcr扩增，快速实时便捷，测序读长长(超过150kb)，以及rna及表观遗传修饰直接测序的能力。其被认为是测序领域的革命性技术，具有不可估量的应用价值。

3、但是，纳米孔测序技术也存在严重的限制。在电场作用下，单链多核苷酸穿过纳米孔的速度非常快以至于难以从系统噪音中分辨出单个核苷酸的电流阻碍信号。因此，为了实现对核苷酸的鉴定，链测序使用多核苷酸结合的分子马达来控制多核苷本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种修饰的CaPif1解旋酶，其特征在于，对野生型CaPif1(368-883)氨基酸序列中的五个天然的半胱氨酸进行修饰，所述五个天然的半胱氨酸分别是C426，C507，C584，C592和C662。

2.根据权利要求1所述的解旋酶，其中用丙氨酸(A)或者丝氨酸(S)取代所述五个天然的半胱氨酸。

3.一种修饰的CaPif1解旋酶，其特征在于，引入新的用于实现连接的半胱氨酸，引入位点包括Q443、N448、K452、R455、I633、L634、P635、Q638、Q641、V642、D795、E796、D797和T799。

4.根据权利要求3所述的...

【技术特征摘要】

1.一种修饰的capif1解旋酶，其特征在于，对野生型capif1(368-883)氨基酸序列中的五个天然的半胱氨酸进行修饰，所述五个天然的半胱氨酸分别是c426，c507，c584，c592和c662。

2.根据权利要求1所述的解旋酶，其中用丙氨酸(a)或者丝氨酸(s)取代所述五个天然的半胱氨酸。

3.一种修饰的capif1解旋酶，其特征在于，引入新的用于实现连接的半胱氨酸，引入位点包括q443、n448、k452、r455、i633、l634、p635、q638、q641、v642、d795、e796、d797和t799。

4.根据权利要求3所述的解旋酶，其中突变组合包括r455c、e796c、c426a、c507a、c584a、c592a和c662a。

5.根据权利要求4所述的解旋酶，所述的解旋酶的氨基酸序列如seq id no.1所示。

6.根据权利要求3所述的解旋酶，其中突变组合包括q443c、l634c、c426a、c507a、c584a、c592a和c662a。

7.根据权利要求6所述的解旋酶，所述的解旋酶的氨基酸序列如seq id no.3所示。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的解旋酶，其特征在于，所述的解旋酶结合到单链多核苷酸或双链多核苷酸的内部核苷酸。

9.编码权利要求1-8中任一项所述的解旋酶的核苷酸序列。

10.根据权利要求9所述的核苷酸序列，其特征在于，所述核苷酸序列如seq id no.2或seq id no.4所示。

11.权利要求1-8中任一项所述的解旋酶与双马来酰亚胺基乙烷或双马来酰亚胺peg3形成的复合体。

12.一种构建体，其特征在于，所述构建体包含权利要求1-8中任一项所述的解旋酶或权利要求11所述的复合体和用于结合多核苷酸的结合部分。

【专利技术属性】
技术研发人员：陆志方，
申请(专利权)人：北京普译生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：