【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及多肽合成领域，具体而言，涉及一种atp再生体系和多肽的合成方法。
技术介绍
1、三磷酸腺苷（atp）是生命的通用能量货币，在许多生物化学反应中起着核心作用，具有合成许多高价值产物的潜力。然而，使用atp作为直接能源会导致副产物的积累，例如二磷酸腺苷（adp）或单磷酸腺苷（amp），这使得下游过程更加复杂。同时，在大规模生产中直接添加atp会导致成本升高。
2、现有技术中，已经开发了许多能量再生系统来从其产品adp或amp中再生atp，例如磷酸烯醇丙酮酸（pep）与丙酮酸激酶（pk），磷酸肌酸与肌酸激酶（ck），乙酰磷酸酯与乙酸激酶（ak）和聚磷酸（polyp）与多聚磷酸激酶（ppk）系统。然而，基于pep、乙酰磷酸酯和磷酸肌酸的系统的产品抑制、高成本或低稳定性等问题可能会限制这些技术在大规模工艺中的应用。在上述系统中，atp再生与（polyp）n分解为（polyp）n-1相结合应用较多，并且由于聚磷酸盐的低成本，已广泛用于许多酶促反应中。
3、然而，目前atp再生的酶促偶联反应中，通常需要对合成atp的酶进行纯化，因为若使用细胞破碎的粗酶液时，atp会迅速消耗以产生副产物adp或amp，不利于反应的进行。由于合成atp的反应需要纯化的酶，增加了反应步骤及成本，难以应用于工业化放大生产中，使atp再生的酶促偶联反应尚未得到广泛应用。
技术实现思路
1、本专利技术的主要目的在于提供一种atp再生体系和多肽的合成方法，以解决现有技术中atp再生反应中
2、为了实现上述目的，根据本专利技术的第一个方面，提供了一种atp再生体系，该atp再生体系包括多聚磷酸激酶、多聚磷酸和磷酸腺苷底物；多聚磷酸激酶包括多聚磷酸激酶粗酶液；多聚磷酸激酶为ajppk2、pappk2b-i或mtppk2-i；atp再生体系的反应温度为：25℃~50℃。
3、进一步地，ajppk2为具有seq id no：1所示的氨基酸序列的多肽或与seq id no：1所示的氨基酸序列具有70%以上同一性的多肽；pappk2b-i为具有seq id no：2所示的氨基酸序列的多肽或与seq id no：2所示的氨基酸序列具有70%以上同一性的多肽；mtppk2-i为具有seq id no：3所示的氨基酸序列的多肽或与seq id no：3所示的氨基酸序列具有70%以上同一性的多肽。
4、进一步地，多聚磷酸的聚合度为3的正整数倍；优选地，多聚磷酸的聚合度为6。
5、进一步地，atp再生体系还包括激活剂和缓冲液。
6、进一步地，激活剂包括镁盐、锌盐、锰盐、铜盐或亚铁盐中的一种或多种；优选地，激活剂包括镁盐；更优选地，镁盐为氯化镁。
7、进一步地，缓冲液包括磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、碳酸缓冲液、醋酸缓冲液、巴比妥酸缓冲液或三羟甲基氨基甲烷缓冲液；更优选地，缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液；优选地，缓冲液的浓度为0.001m-1m；更优选地，缓冲液的浓度为0.1m。优选地，缓冲液的ph为1-14；更优选地，缓冲液的ph为9.5。
8、进一步地，磷酸腺苷底物包括如下任意一种或多种：atp、atp盐、adp、adp盐、amp或amp盐。
9、为了实现上述目的，根据本专利技术的第二个方面，提供了一种多肽的合成方法，该合成方法包括：利用上述任一种atp再生体系和多肽合成酶，通过消耗atp，催化氨基酸底物合成多肽。
10、进一步地，多肽合成酶为氨基酸连接酶；优选地，氨基酸底物包括丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、精氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸，丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸中的一种或多种；更优选地，氨基酸底物包括：a）丙氨酸；b）谷氨酰胺。
11、进一步地，氨基酸连接酶为l-氨基酸-α-连接酶。
12、应用本专利技术的技术方案，利用本申请中包括多聚磷酸和多聚磷酸的atp再生体系，与atp依赖性酶偶联用于多肽反应的合成时，在25℃~50℃的反应条件下，能够催化反应的进行，实现了利用粗酶液就能使得atp在合成反应中再生，促进合成反应的进行。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种ATP再生体系，其特征在于，所述ATP再生体系包括多聚磷酸激酶、多聚磷酸和磷酸腺苷底物；
2.根据权利要求1所述的ATP再生体系，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的ATP再生体系，其特征在于，所述多聚磷酸的聚合度为3的正整数倍。
4.根据权利要求1所述的ATP再生体系，其特征在于，所述ATP再生体系还包括激活剂和缓冲液。
5.根据权利要求4所述的ATP再生体系，其特征在于，所述激活剂包括镁盐、锌盐、锰盐、铜盐或亚铁盐中的一种或多种。
6.根据权利要求4所述的ATP再生体系，其特征在于，所述缓冲液包括磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、碳酸缓冲液、醋酸缓冲液、巴比妥酸缓冲液或三羟甲基氨基甲烷缓冲液。
7.根据权利要求1所述的ATP再生体系，其特征在于，所述磷酸腺苷底物包括如下任意一种或多种：ATP、ATP盐、ADP、ADP盐、AMP或AMP盐。
8.一种多肽的合成方法，其特征在于，所述合成方法包括：利用权利要求1-7中任一项所述的ATP再生体系和多肽合成酶，通过消耗所述ATP，催化氨基酸底物合成所
9.根据权利要求8所述的合成方法，其特征在于，所述多肽合成酶为氨基酸连接酶。
10.根据权利要求8所述的合成方法，其特征在于，所述氨基酸底物包括丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、精氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸，丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸中的一种或多种。
11.根据权利要求9所述的合成方法，其特征在于，所述氨基酸连接酶为L-氨基酸-α-连接酶。
...【技术特征摘要】
1.一种atp再生体系，其特征在于，所述atp再生体系包括多聚磷酸激酶、多聚磷酸和磷酸腺苷底物；
2.根据权利要求1所述的atp再生体系，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的atp再生体系，其特征在于，所述多聚磷酸的聚合度为3的正整数倍。
4.根据权利要求1所述的atp再生体系，其特征在于，所述atp再生体系还包括激活剂和缓冲液。
5.根据权利要求4所述的atp再生体系，其特征在于，所述激活剂包括镁盐、锌盐、锰盐、铜盐或亚铁盐中的一种或多种。
6.根据权利要求4所述的atp再生体系，其特征在于，所述缓冲液包括磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、碳酸缓冲液、醋酸缓冲液、巴比妥酸缓冲液或三羟甲基氨基甲烷缓冲液。
7.根据权利要求1所述的atp再生体系，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：张娜，李明记，李瑞，高秋月，申玉玉，
申请(专利权)人：天津凯莱英生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。